家兔支配膀胱的传出和传入神经成分在脊髓内的分布——HRP逆行追踪及跨神经节追踪研究

向家兔膀胱壁内注入HRP,通过逆行及跨神经节追踪证明:1.膀胱副交感中枢在S_(2~5)髓节(S_(3、4)为中心),主要位于中间带外侧核(占标记细胞总数78.37%),并由此向网状核、后角外侧缘、侧索、中介核及前角后外侧核内扩散。L_(1~5)也有相当数量的长轴突交感节前神经元被标记,说明膀胱壁内有副交感和交感两种节前神经元分布。2.被标记的初级传入神经元中枢突在骶段人背外侧束,主要沿后角外侧缘呈束状行向网状核和中间带外侧核,大部分终止于此,形成膀胱排尿反射的途径;一部分则更向内侧,在中介核到后连合核处形成终末带。另外还有一小束纤维,沿后角内侧缘向腹侧走行,终止于后连合核。这些核团可能是膀胱意识性感觉的中继处。在L_(2~4)也可见沿后角外侧缘走行终止于网状核、中间带外侧核的纤细纤维束。3.一侧膀胱受脊髓双侧支配,但以同侧为主。

大鼠腰后段背根节神经元周围突的分支分布——荧光素双标记法研究

本研究应用2组荧光素配伍(FB-NY,PI-Bb)的双标记技术,进行了下列3组实验:1.将各配伍组的2种荧光素分别注入大鼠一侧胫神经干和腓神经干;2.分别注入一侧的腓肠皮神经和小腿三头肌神经:3.分别注入胫神经和同侧膀胱壁内。前两组在注入侧 L_(4～8)背根节内用荧光显微镜观察到的标记细胞中约12%为双标记细胞;而第3组仅在注入侧 L_6背根节中见到少量双标记细胞。双标记细胞的大多数为小型(33.1%)和中小型(40.9%)细胞。本文结果表明:背根节细胞周围突有相当一部分是分叉的,它们的2个分支或分布于2条躯体神经,或分别分布于皮肤和肌肉,甚至可分别分布于躯体和内脏的不同感受野。这一结果为阐明牵涉痛和针刺对内脏活动调控的神经机制,提供了一定的形态学基础。

猫骶尾髓胆碱能神经成分的形态和分布——胆碱乙酰化酶单克隆抗体的免疫组织化学方法研究

本实验应用单克隆抗胆碱乙酰化酶(ChAT)血清、卵白素—生物素复合体、AEC成色的免疫组织化学方法,对8只猫的骶尾髓进行了免疫组化染色观察。结果为:1.ChAT免疫反应阳性细胞:在L_(7)~Co_(1)节段前角各核团可见大量ChAT阳性神经元,它们可分为大、中、小3型。大、中型多极运动神经元的染色强度为淡至中等;小型神经元染色浓深,三者在核团内混杂存在。在骶髓中间带外侧核、中间带内侧核均可见梭形、圆形或椭圆形的副交感节前神经元,呈中等到深染;中介核内可见成色较淡的横向排列的长梭形神经元。在Ⅶ层内还可见成色深的中型多极神经元。在X层室周灰质中亦可见较深染的中、小型神经元。本文证明,后连合核区的腹侧部存在相当数量的小型阳性神经元,而在背侧部仅偶见于S2节段。后角偶见小型淡染的神经元,散在于Ⅲ~Ⅴ层。2.ChAT免疫反应阳性纤维和终末在灰质各板层内均有分布,其密度依次为前角、中间带、中央灰质和后连合核区、后角。后角Ⅲ层者较密,Ⅰ层次之,而Ⅱ层甚为稀疏。前角诸核团内部及周围有阳性纤维分布,可见大量终扣与大、中型阳性神经元接触,还可见一些轴突末支上生有成串的终扣,围绕着一个细胞的胞体和树突基部,与之形成多个接触点。在中间带各核团间有横行纤维联系。

家兔后根节中不同周围感受野的初级传入神经无的分型和分布——HRP法

本文分别测量了家兔后根节中HRP标记的来自腓肠皮神经、小腿三头肌肌支和膀胱壁的初级传入神经元胞体的直径,并用尼氏染色标本作了对照观察。根据所测神经元胞体直径分布图形,将后根节细胞分为小型、中小型、中型、大型和特大型等5型。前二型在构造上属于小暗(B)细胞;后三型属于大亮(A)细胞。皮神经注入例的初级传入神经元,小型和中小型细胞高达78.06%;肌支注入例,中型、大型和特大型的标记细胞增至48.67%。而膀胱壁随副交感神经传入至骶尾后根节的标记细胞各型分布与皮神经者相似;随交感神经传入腰段后根节者则与肌支者接近。本文讨论了后根节细胞的分型及各型细胞与所发出纤维粗细的关系。并结合中枢内的分布讨论了各型细胞的性质。

猫骶尾髓胆碱能神经成分的分布

应用单克隆抗ChAT血清(Bochringer Mannheim,1∶500)对8只猫的骶尾髓冰冻切片用AB-AEC法进行了免疫组织化学反应,其结果如下:一、ChAT免疫反应阳性细胞的分布在L_(7)-S_(2)节段前角的腹外侧核、后外侧核和后后外侧核,S_(3)、CO_(1)节段的腹内侧核和前连合核区,可见大量的ChAT免疫反应阳性神经元。

排尿反射回路的形态学证明

生理学和临床早已证明,脑桥吻侧部和骶髓均存在排尿反射中枢,后者在截瘫患者可维持反射性排尿,但由于方法学的限制,形态学上尚未证明。本系列研究包括:(1)

骶髓后连合核接受盆内脏伤害性信息传入的形态学证明

为阐明投射至骶髓后连合核的盆内脏初级传入中是否含有传递伤害性信息成分，本研究综合运用特异性标记初级传入Ｃ纤维的ＢＳＩ－Ｂ４－ＨＲＰ跨节追踪技术，神经干局部涂抹Ｃ纤维毒素ＣａＰｓａｉｃｉｎ并结合ＳＰ免疫组化方法，研究了猫投射至骶髓后连合核的盆神经初级传入纤维中是否含有传递伤害性刺激的成分；同时观察了秋水仙素处理的骶２后根节内ＢＳＩ－Ｂ４标记的初级传入神经元与ＳＰ免疫阳性神经元的关系。结果如下：（１）向盆神经注入ＢＳＩ－Ｂ４－ＨＲＰ，骶１～３后根节内出现平均直径３４μｍ的标记细胞，后连合核内出现密集的标记终末，电镜下证明通过Ｌｉｓｓａｕｅｒ氏束进入脊髓内的标记纤维均为无髓纤维；（２）对盆神经进行局部Ｃａｐｓａｉｃｉｎ处理，引起后连合核内的ＳＰ免疫阳性纤维和终末明显减少；（３）骶２后根节内ＢＳＩ－Ｂ４－ＦＩＴＣ标记细胞有１７％同时呈ＳＰ免疫阳性；（４）骶２后根节内ＢＳＩ－Ｂ４－ＨＲＰ标记的盆内脏初级传人神经元的３９％同时呈ＳＰ免疫阳性。本研究结果在形态学上证实了骶髓后连合核接受盆腔内脏伤害性信息的传入，它可能是中继和整合盆内脏伤害性信息的低级中枢。

家兔胃前壁的神经支配——HRP法研究

向成熟家兔胃前壁点状注入HRP溶液,发现迷走神经背核除吻、尾端外,全面出现标记细胞,但以闩上、下的部分最为密集。其分布状况是。背核的尾侧部标记细胞仅出现于其内侧部,向吻侧扩延于背内部,到闩的上下部分标记细胞全面地出现于核内,到核的吻侧部则数量少、无特有的定位关系。在背核背内方和最后区之间的地区也出现了一些散在的标记细胞。结状节内出现了大量标记细胞,小型细胞占40%以上。脊神经节在Th_(1)~L_(3)节段出现了一定数量的标记细胞,但Th_(3)~Th_(10)比较集中,显示着胃的经交感途径传入既有弥散性特点又有相对集中的节段性特点。脊神经节内的标记细胞都是30微米以下的中、小型细胞,各占半数。

大鼠福尔马林实验中脊髓后角浅层内P物质和降钙素基因相关肽的变化

为研究福尔马林实验动物行为反应与脊髓内Ｐ物质（ＳＰ）和降钙素基因相关肽（ＣＧＲＰ）之间可能的相互关系，应用免疫组织化学方法结合图像分析技术，对福尔马林实验大鼠不同时程的脊髓后角浅层内ＳＰ、ＣＧＲＰ的含量进行了半定量分析，并与大鼠的行为反应分期进行了比较。结果显示：脊髓后角浅层内ＳＰ和ＣＧＲＰ的含量在福尔马林实验后的第１期反应（０～５ｍｉｎ）时迅速降低；在间歇期（５～２０ｍｉｎ）仍持续降低，在１５ｍｉｎ达最低值；间歇期后进入第２期反应（３０～６０ｍｉｎ）时，逐渐开始缓慢恢复，６０ｍｉｎ后恢复至正常水平，并开始逐渐增高，于９０ｍｉｎ达最高值。之后逐渐回落，在１２～２４ｈ又恢复至正常水平。

足底伤害性刺激条件下大鼠腰骶髓SP、CGRP、L－ENK样神经成分的变化

将１０％福尔马林１５０～２００μｌ注入大鼠一侧后肢足底，用注入等量０．９％生理盐水作为对照，分别于刺激后５、１５、３０、６０、９０、１２０ｍｉｎ和１２、２４、４８ｈ取材，进行免疫组化反应（ＡＢＣ法），观察脊髓腰骶段后角浅层及后连合核区的ＳＰ、ＣＧＲＰ、Ｌ－ＥＮＫ样纤维和终末的分布，并随机抽样进行图像分析．结果显示：在福尔马林刺激后，脊髓后角浅层和后连合核区的ＳＰ、ＣＧＲＰ样阳性纤维和终末在５～６０ｍｉｎ明显减少，而到１．５～１２ｈ却呈增加趋势，１２ｈ后逐渐恢复正常．而Ｌ－ＥＮＫ样纤维和终末始终无明显变化．本文结合文献讨论了上述变化与痛与镇痛机制的关系。

内脏和躯体初级传入冲动在猫骶髓后连合核的汇聚

用玻璃微电极细胞外记录的方法，观察了在电刺激猪盆神经和胫神经或机械性刺激会阴部时骶髓后连合核神经元自发放电频率的变化．共记录了80个单位放电神经元，其中13个为无关单位．电反应类型有3种：长潜伏期长串反应，短潜伏期长串反应，抑制性反应．在所观察的对刺激呈有效反应的67个单位中，30个（44．78％）对躯体和内脏刺激均起反应，其中，12个对盆神经和胫神经传入冲动都起反应；18个对盆神经和会阴部躯体感受野的传入呈汇聚性反应．对会阴部感受野施加各种机械性刺激，鉴定此汇聚神经元为WDR神经元．67个有效反应单位中还有5个（7.46％）只对内脏传入冲动，32个（47.76％）仅对躯体传入冲动做出反应．本研究从电生理学上验证了本教研室在形态学上发现的盆腔内脏（膀胱）初级传入和坐骨神经躯体初级传入在骶髓后连合核神经元的汇聚，并对汇聚的类型和意义进行了观察和讨论．

大鼠、兔肺动脉壁亮氨酸脑啡肽的分布、含量及其作用途径

用ＡＢＣ免疫组化法对ＳＤ大鼠肺动脉全层漂染，结果显示有亮氨酸脑啡肽（Ｌ－ＥＮＫ）阳性纤维走行于动脉壁外膜中。放免法测得大鼠、兔肺动脉壁合Ｌ－ＥＮＫ，含量（ｐｇ／ｍｇ组织湿重）分别为４３９．１８±３０．５２，２９．９±１．４。离体灌流的兔肺动脉螺旋条，经参数Ⅰ电场刺激可引起收缩反应，α受体阻断剂酚妥拉明可阻断之；α２受体阻断剂育亨宾小剂量增强收缩反应，大剂量则抑制，阿片受体阻断剂纳洛酮可使收缩反应增强。应用酚妥拉明后，参数Ⅱ电场仍能引起较高的收缩反应，纳洛酮对此收缩无影响。外源性ＮＥ引起肺动脉条收缩，Ｌ－ＥＮＫ对之没有抑制效应。结果提示，肺动脉壁含有内源性Ｌ－ＥＮＫ，可因电场刺激而释放，由阿片受体介导抑制动脉壁神经末梢ＮＥ释放，进而抑制血管收缩，对血管平滑肌本身活动及已释放ＮＥ均无抑制效应。关键词：

一氧化氮合酶阳性神经元及纤维在大鼠脊髓的分布及其来源

用还原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷磷酸(NADPH)脱氢酶反应观察了大鼠脊髓内一氧化氮合酶阳性神经元和纤维的分布。胞体浓染且突起显示良好的类似Golgi染色的阳性神经元分布于亘脊髓全长的中央管周围灰质(X层),胸腰髓(T1-L3)的中间带外侧核、中介核及腰骶髓(L6、S1)的骶髓副交感核和后连合核,少量弥散于后角Ⅳ～Ⅵ层。后角Ⅲ层内可见较多的胞体浓染或淡染但突起短或未见阳性突起的小型神经元。前角内无阳性神经元,但有较多串珠状阳性终末支,并在运动神经元胞体和树突上形成终扣。阳性纤维和终末在后角Ⅰ层和Ⅲ层密集,其它部位稀少。在胸腰段和腰骶段脊髓后角内、外侧缘有行向腹侧的内、外侧阳性纤维束,外侧束集中而粗大,阳性纤维束终止于中间带外侧核和后连合核。切断后根和半横断颈髓的实验表明,后角Ⅰ层的阳性纤维和终末主要来源于脊神经节内一氧化氮合酶阳性细胞的中枢突,而Ⅲ层内的阳性纤维和终末则为Ⅲ层和后角深层阳性细胞的突起。结合文献和本文结果可以推断,一氧化氮在躯体和内脏感觉的传入过程及内脏传出活动中是一种重要的活性物质。

一氧化氮合酶在大鼠主盆神经节及阴茎勃起组织中的分布

用ＮＡＤＰＨ脱氢酶组织化学方法观察了大鼠主盆神经节及阴茎勃起组织内一氧化氮合酶（ＮＯＳ）阳性成分的分布。发现主盆神经节内分布有大量ＮＯＳ阳性神经元，其中大部分密集于盆神经进入端，而膀胱端稀少。阴茎深动脉及其分支螺旋动脉周围，阴茎和尿道海绵体的平滑肌小梁内均分布有ＮＯＳ阳性纤维。阴茎勃起组织内未见ＮＯＳ阳性神经元。将荧光金注人阴茎海绵体后，在主盆神经节内发现有较多的荧光金标记细胞。结合ＮＡＤＰＨ反应，发现这些荧光金标记细胞多为ＮＯＳ阳性。本文结果证实主盆神经节内存在ＮＯＳ阳性神经元，部分ＮＯＳ阳性神经元支配阴茎勃起组织的血管床，提示一氧化氮可能是参与调节阴茎勃起的一种重要神经活性物质。

大鼠腰骶髓中间带外侧核向臂旁核的投射──BDA顺行追踪研究

为了解盆内脏器感觉信息的传递道路，用结合生物素的葡聚糖胺（ＢＤＡ）作为顺行追踪剂，研究了大鼠腰骶髓中间带外侧核向脑桥臂旁核的投射。将ＢＤＡ注射于中间带外侧核后，顺行标记的轴突终末出现于双侧的臂旁核，同侧略多。大量的ＢＤＡ标记的轴突终末出现于臂旁外侧核的外侧内核和外侧中央核，少量分布于外侧背核。此外，在臂旁内侧核的中段及ＫＦ核内也发现有少量标记终末。上述结果说明，大鼠腰骶髓中间带外侧核的神经元主要投射至臂旁外侧核外侧内核和外侧中央核。

大鼠脊髓内接受盆腔脏器伤害性刺激神经元的定位分布

本文用Ｆｏｓ蛋白免疫组织化学方法研究了大鼠脊髓内接受盆腔脏器伤害性刺激神经元的分布状况。在对照组，仅偶见Ｆｏｓ阳性细胞出现于Ｌ６、Ｓ１节段脊髓后角（＜２个／片），且染色浅淡。将３％福尔马林经插管分别注入膀胱、阴道和直肠造成伤害性刺激时，Ｆｏｓ阳性细胞数明显增多（１００～２６０个／片，Ｓ１），主要出现于Ｌ６、Ｓ１节段后角Ⅰ层内侧部、后角内侧缘、后连合核和中间带外侧核。少量散在于后角Ⅰ层外侧部、后角外侧缘、外侧脊核和前角背内侧部。为了确定脊髓内Ｆｏｓ阳性神经元是否向上位脑结构投射，将荧光金（ＦＧ）注入一侧臂旁外侧核后，给予膀胱伤害性刺激，结合Ｆｏｓ蛋白免疫组化技术，在后连合核和中间带外侧核发现有ＦＧ／Ｆｏｓ双标细胞。在中间带外侧核，ＦＧ标记细胞与Ｆｏｓ阳性细胞均主要位于核的背侧部，且ＦＧ标记细胞多数同时为Ｆｏｓ阳性，ＦＧ／Ｆｏｓ双标细胞占ＦＧ标记细胞总数的７１．２％（３７／５２），占Ｆｏｓ阳性细胞总数的１４．８％（３７／２５０），提示脊髓内接受盆腔脏器伤害性神经元部分投射至臂旁外侧核。为进一步确定Ｆｏｓ阳性细胞在中间带外侧核定位分布特征，采用ＮＡＤＰＨ脱氢酶反应（显示副交感节前神经元）与Ｆｏｓ蛋白免疫组化相结合?

大鼠腰骼髓“内脏面”传出和上行投射神经元的定位分布——HRP与荧光金追踪法研究

用HRP与荧光金(FG)结合的示踪法,观察了大鼠腰骶髓“内脏面”副交感节前神经元和上行投射神经元的定位分布。发现FG注入一侧臂旁外侧核或Barrington核后,逆行标记的金色荧光细胞出现于双侧L_5～S_2的“内脏面”,细胞密集于后连合核和中间带外侧核(IML),此外,还出现于双侧的I层及外侧脊髓核(LSN)。HRP注射于一侧盆神经后,逆标细胞出现于术侧的L_6和S的IML,偶见于中介核(IC)。在IML内,HRP标记的副交感节前神经元位于其腹侧份,而FG标记的上行投射神经元主要位于背侧和背内侧部,亦可见少数FG标记细胞混杂在HRP标记细胞之间。本研究结合已有的研究对IML的命名、组成和功能以及LSN的组成进行了讨论。

足底伤害性刺激条件下大鼠腰骶髓背根节内SP mRNA和α-CGRP mRNA的表达

将Formalin注入大鼠一侧后肢足底，分别于术后不同时间（0．5、1、2、4、8、12、24、48h和5d）将动物断头取材，用放射性同位素[α－(35)S]dATP标记的寡核苷酸探针进行原位杂交组织化学实验，检测大鼠腰骶髓（L5、L6和S1）背根节内SPmRNA和α－CGRPmRNA表达阳性细胞占整个背根节细胞的百分率。结果显示：注射后2h背根节内SPmRNA和α－CGRPmRNA表达阳性细胞百分率即明显增高；分别于12h（α－CGRPmRNA阳性细胞表达率增加了3．3％，P＜0．01）和24h（SPmRNA阳性细胞表达率增加了3．5％，P＜0．01）达到高峰，其中SPmRNA可持续到48h后，而α－CGRPmRNA则在12h后逐渐回落；5d时二者的表达阳性率均降至术前水平．提示SP和α－CGRP的mRNA的表达水平与伤害性刺激的施加有关，从而进一步证明了SP和CGRP在伤害性刺激信息的传递过程中具有重要作用．

家兔躯体(坐骨神经)和内脏(膀胱)初级传入神经元向骶髓后连合核区的投射—HRP跨越神经节追踪观察

本文作者研究了膀胱(内脏)及坐骨神经(躯体)初级传入纤维向脊髓的投射。发现内脏传入纤维和躯体本体觉粗纤维都向S_(2)—S_(4)节段后连合核区投射,两者的投射区有重叠。推测内脏传入和躯体本体觉传入的纤维在后连合核可能有汇聚。另外,根据躯体本体党纤维在髓内跨节段分布的范围和位置以及盆腔脏器初级传入的投射位置,结合文献分析和讨论了脊髓后连合核的位置和形态。提出在脊髓内存在着一个和脑部的孤束核在形态及功能上酷似的脊髓后连合核的见解。它在吻侧以对称的狭细细胞带起于胸髓下段,向尾侧逐渐扩大位于Ⅵ层内侧部,到骶髓成为位于中央管背外方的核团,S_(3)以下两侧者合并形成位于中央管背侧后连合区的较大核团,一直可追踪到尾髓。