测序法及液相芯片杂交法对生殖道人乳头瘤病毒感染分型的比较

目的探讨人乳头瘤病毒(HPV)分型方法在临床标本应用中的特异性及敏感性。方法采用通用型引物用PCR方法对尖锐湿疣及宫颈细胞内瘤变组织标本进行HPV DNA检测,测序法及液相芯片杂交法(luminex法)对其进行分型。结果在单型感染中测序法较为准确,而在多型感染中luminex法占一定优势。结论测序法结合luminex法可以运用在HPV感染标本中的分型。

寡核苷酸DNA Microarray用于HLA DRB1基因分型的研究

对寡核苷酸DNAMicroarray用于HLADRB1基因分型的技术进行研究。常规的酚 /氯仿法提取标准血样基因组DNA ,在DRB1的exon 2区域设计一对引物 ,经PCR扩增基因组相应区段并用Cy5 dCTP进行标记。设计寡核苷酸分型探针 ,将探针固定在APS PDC法制作的DNAMicroarray上 ,用标记的PCR产物与之杂交 ,扫描仪对杂交结果进行扫描 ,Imagene软件对杂交图象进行分析。共检测了 33例标准血样的HLADRB1基因型。检测结果证明研制的DNAMicroarray准确、灵敏。DNAMicroarray技术可以有效地检测DRB1等位基因 ,对比常规的PCR SSP和PCR SSO方法、分型基因芯片方法更为直观 。

补肾益精方延缓老年雄性大鼠骨与脑衰老的实验研究

目的 :评价补肾益精方延缓老年雄性大鼠骨衰老与脑衰老的作用 ,探讨此方延缓整个机体衰老的机制。方法 :4 0只 2 4月龄SD雄性大鼠随机分为 2 4月龄本底对照组、30月龄增龄对照组、补肾益精方低剂量组、补肾益精方高剂量组 ,每组各 10只。低剂量组、高剂量组均自 2 4月龄给药至 30月龄。各组相应处理以后分别测定各组大鼠的骨参数 (左侧股骨近段、中段、远段的骨密度和右侧股骨的弯曲断裂载荷 )以及脑参数 (脑组织M受体结合容量和胆碱酯酶活性 )。结果 :在骨方面 ,补肾益精方既能量效依赖性地增加大鼠股骨各段骨密度 ,又能量效依赖性地提高大鼠股骨弯曲断裂载荷 ;在脑方面 ,补肾益精方不仅能上调大鼠脑组织M受体结合容量 ,而且又能抑制大鼠脑组织胆碱酯酶活性。结论 :补肾益精方具有同时延缓雄性大鼠骨衰老与脑衰老的作用 ;推测该方似通过神经内分泌免疫网络的介导从整体角度调整衰老机体肾虚精亏之异常。

补肾中药对拟痴呆小鼠大脑组织中γ-氨基丁酸和谷氨酸含量的影响

选用氯化铝溶液制备拟痴呆小鼠动物模型,研究补肾中药对拟痴呆小鼠大脑组织中γ—氨基丁酸(GABA)和谷氨酸(Glu)含量的影响。结果表明:拟痴呆小鼠大脑组织中GABA含量比正常小鼠明显升高(P<0.01),Glu含量则比正常小鼠明显低下(P<0.01)。补肾中药则可明显降低拟痴呆小鼠大脑组织中抑制性氨基酸神经递质GABA的含量,升高Glu含量,使其接近正常水平。提示补肾中药能通过降低拟痴呆小鼠大脑组织中抑制性氨基酸神经递质GABA的含量,升高兴奋性氨基酸神经递质Glu的含量,从而增进拟痴呆小鼠大脑兴奋性,改善痴呆迟钝症状,促进记忆功能。

不同中医治法对DEN诱发大鼠肝癌作用的比较研究

目的:研究不同中医治法对二乙基亚硝胺(DEN)诱发大鼠肝癌作用的差异,井探讨其机理。方法:以DEN诱发大鼠肝癌为动物模型,观察不同治法对大鼠的一般状况及肝组织病理、甲胎蛋白(AFP)免疫组化等相关指标的变化。结果:DEN成功诱发大鼠肝癌形成,不同中医治法优于西药化疗,其中全方组、活血组综合疗效较好,而清热组对改善肝组织病理及降低肝组织AFP含量最明显,健脾组疗效较差。结论:清热解毒法尽管在肝癌局部治疗方面呈现出显著的特点,但多种治法组合后,其综合疗效要优于单一冶法,这可能与原发性肝癌病机的复杂性有关。

补肾益精中药复方延缓雄性大鼠骨衰老作用的评价及其机制的推测

为评价补肾益精中药复方延缓雄性大鼠骨衰老的作用，探讨其延缓骨及机体衰老的机制，将 ３６ 只 Ｓ Ｄ雄性大鼠随机分为２４ 月龄本底对照组、３０ 月龄增龄对照组、补肾益精中药复方低、补肾益精中药复方高剂量组，每组各９ 只。低剂量组、高剂量组均自２４ 月龄给药至３０ 月龄。进行相应处理后分别测定各组大鼠左侧股骨近段、中段、远段的骨密度以及右侧股骨的弯曲载荷。结果显示补肾益精中药复方既能量效依赖性地延缓大鼠股骨各段骨密度的增龄性减少率，又能量效依赖性地延缓大鼠股骨弯曲载荷的增龄性降低率。表明补肾益精中药复方具有量效依赖性地延缓雄性大鼠骨衰老的作用。据此，推测该方是否可能是通过神经内分泌免疫网络的介导，从整体角度调整衰老机体肾虚精亏的异常。

副溶血性弧菌ERIC-PCR分型及毒力基因检测研究

目的:建立副溶血性弧菌ERIC-PCR分子分型技术,分析副溶血性弧菌标准菌株及分离株基因组DNAERIC-PCR指纹图谱,并对副溶血性弧菌毒力基因进行检测,以了解不同来源副溶血性弧菌毒力基因携带情况。方法:提取副溶血性弧菌基因组DNA,以肠杆菌基因间共有重复序列(ERIC)为引物进行PCR扩增,PCR产物经琼脂糖凝胶电泳后用凝胶成像分析仪对图谱进行观察分析,并以相似性系数构建聚类图;通过PCR方法对直接耐热溶血素(TDH)和耐热直接相关溶血素(TRH)进行检测。结果:26株副溶血性弧菌均可扩增产生可重复的DNA指纹图谱,ERIC-PCR可将26株菌分为12个型,分辨力指数为0.926;只在临床分离株中检测到TDH基因,而除一株标准菌株外,所有菌株都未检测到TRH基因。结论:研究显示ERIC-PCR可从分子水平对副溶血性弧菌基因组DNA进行快速指纹图谱分析,同时结合毒力基因检测,能够为副溶血性弧菌食物中毒疾病的预防和流行病学调查提供科学依据。

不同治法对大鼠肝癌相关基因转录作用的研究

为探讨中医不同治法调节大鼠肝癌相关基因转录水平的差异。以DEN诱发的大鼠肝癌为模型 ,18W后将其分为模型 (B)组、西药 (C)组及中药全方 (D1)组、清热 (D2 )组、活血 (D3)组、健脾 (D4 )组 ,每组 10只 ,分别给予相应药物治疗 ,疗程 6W ,另取 10只未造模鼠为正常对照 (A)组。之后 ,处死动物 ,采用异硫氰酸胍 苯酚 氯仿一步法抽提肝组织总RNA ,DD PCR及放射自显影技术分离A组肝组织与B组肝癌组织中差异显示的基因片段 ,以此片段为探针 ,分别与各组肝组织总RNA进行Northernblot印迹杂交 ,比较其间的差异 ,同时将筛选出的阳性cDNA片段进行克隆与序列分析。结果 :从正常肝组织与模型组肝癌组织中分离出 32个差异显示的基因片段 ;Northernblot印迹杂交表明其中 9个基因片段在各组之间转录水平上存在明显差异 ;其中 ,来源于正常肝组织中的DD2 2 为新基因 ,来源于肝癌组织中的基因有 5个为已知基因 ,3个为新基因。

补肾中药复方延缓老年雄性大鼠股骨皮质骨、松质骨骨量增龄性丢失的实验研究

目的 研究补肾中药复方延缓老年大鼠股骨皮质骨 、松质骨骨量增龄性丢失的作用。方法３６只２４月龄 Ｓ Ｄ 雄性大鼠随机分为２４月龄本底对照组、３０月龄增龄对照组、补肾中药复方低剂量组、补肾中药复方高剂量组，每组各９只。低剂量组、高剂量组均自２４月龄给药至３０月龄。各组相应处理以后分别测定各组大鼠左侧股骨以松质骨为主的近段、远段以及以皮质骨为主的中段的骨密度。结果 补肾中药复方低剂量组大鼠股骨各段骨密度增龄性减少率出现延缓的趋势；高剂量的补肾中药复方则能明显延缓股骨各段骨密度增龄性减少率。结论 补肾中药复方具有量效依赖性地延缓大鼠皮质骨。

不同治则对DEN诱发大鼠肝癌作用的比较研究

为研究不同中医治则对DEN诱发大鼠肝癌的作用差异 ,并探讨其机理。将 60只大鼠以DEN诱发大鼠肝癌 ,并随机分为 6组 ,模型组 (B)、西药组 (C)、全方组 (D)、清热组 (E)、活血组 (F)、健脾组 (G) ,每组 10只。另取 10只未造模大鼠为正常对照组 (A) ,除A、B两组外 ,分别采取相应的治疗方法。 6W后处死全部大鼠 ,观察大鼠的一般状况及肝组织病理、AFP等相关指标的变化。结果 :所观察的各种中医治则均优于西药化疗 ,其中全方组、活血组综合疗效较好 ,而清热组对改善肝组织病理及降低肝组织AFP含量最明显 ,健脾组疗效较差。结论 :清热解毒法在肝癌局部治疗方面呈现出显著的特点 ,但多种治法组合后 ,其综合疗效要优于单一治法 。

补肾中药对老年大鼠脑组织中M受体功能的影响

采用受体放射性配基结合分析法和生化酶底物反应研究了补肾中药、补肾活血中药对老年大鼠脑组织中胆碱能Ｍ 受体结合容量（Ｒｔ） 与乙酰胆碱酯酶（ＡｃｈＥ） 活性的影响。结果表明：老年大鼠大脑组织中Ｍ 受体Ｒｔ 值较青年大鼠显著低， 而ＡｃｈＥ活性则显著高。补肾中药、补肾活血中药可明显抑制老年大鼠脑组织中ＡｃｈＥ活性， 显著增加Ｍ 受体Ｒｔ 值。提示补肾中药、补肾活血中药可通过降低老年大鼠脑组织中ＡｃｈＥ活性， 增加Ｍ 受体Ｒｔ 值， 延缓脑组织的衰老。

补肾中药延缓脑组织衰老的实验研究进展

在引起机体衰老的诸多因素中,中枢神经系统功能的退行性改变占很重要的地位。根据中医“肾主骨生髓”、“脑为髓之海”的理论,近年来国内学者对补肾中药延缓脑组织衰老的机理进行了多指标的实验研究。现将有关报道综述如下。1 补肾中药对脑组织中单胺氧化酶活性的影响 Shihj报道了单胺氧化酶(MAO)与脑衰老的关系,引起了医学和生物学界的广泛重视。近几年来许多学者研究发现,MAO,尤其是MAO-B的活性随年龄增长而明显增加,与脑衰老关系密切。莫氏等研究了“右归丸”和“还精煎”对CST-BL/6J雄性纯种小鼠脑组织中线粒体MAO的活性的影响,结果显示右归丸和还精煎可降低MAO活性,其中青年组(5月龄)、中年组(8月龄)、老年组(16月龄)

清热泻火和解痉止痛中药对吗啡依赖性大鼠性激素和促性腺激素分泌的影响

制备吗啡依赖大鼠模型，以放射免疫分析技术测定各组大鼠血清中睾酮（T）和雌二醇（E2），以及促卵泡成熟激素（FSH）和黄体生成素（LH）的含量。结果：吗啡依赖性模型组大鼠血清中T、E2的含量和T／E2比值均较正常组显著降低.自然戒断组T和E2含量虽然较模型组明显升高，但其T／E2比值仍明显低于正常对照组。清热泻火Ⅰ、Ⅱ号方及解痉镇痛方均可显著提高血清中T含量.明显提高T／E2比值.与正常对照组比较无明显差异。清热泻火对E2、FSH和LH均无明显影响，解痉镇痛药虽可明显提高E2含量.对FSH、LH无明显作用。提示清热泻火和解痉镇痛中药均可改善吗啡成瘾大鼠的性腺功能，其作用机理既有相同之处，也有一定差异。

禽肉产品中禽流感与新城疫病毒多重RT-PCR检测方法的建立

根据禽流感病毒NP基因和新城疫病毒F基因各设计1对引物,经优化单项RT-PCR(sRT-PCR)反应体系,建立的多重RT-PCR(mRT-PCR)同时检测禽流感、新城疫的极限分别为10-2.5 EID50/0.1 mL和10-3.75 EID50/0.1 mL,mRT-PCR检测禽流感的敏感性与sRT-PCR一致,mRT-PCR检测新城疫的敏感性较sRT-PCR敏感性下降2个数量级。特异性试验表明,mRT-PCR仅检测到不同亚型(H1、H3、H5、H6和H9)禽流感、不同毒力新城疫病毒,对其他9种禽病原体和SPF鸡尿囊液均未扩增出片断。mRT-PCR检测39株禽流感H1、H5和H9亚型病毒、41株不同宿主源新城疫病毒,结果与sRT-PCR、HI试验完全一致;mRT-PCR和病原分离法同时检测人工感染鸡的组织脏器,2种方法检测禽流感的符合率为93.8%(30/32),检测新城疫的符合率为95.2%(20/21);采用mRT-PCR和病原分离法同时对35份进口禽产品、32份鸡粪拭子检测,2种方法检测禽流感的符合率为100%(67/67),对新城疫的符合率为97.1%(65/67)。病原分离法的检出率虽高于mRT-PCR,经统计学分析,两者差异不显著。

MPCR检测食品中大肠杆菌O157和单核增生李斯特氏菌的研究

根据大肠杆菌O157(Escherichia coliO157,E.coliO157)的志贺样毒素基因slt和"黏附抹平"因子eaeA基因、单核增生李斯特氏菌(Listeria monocytohenes,LM)的编码溶血素O的hlyA基因和毒力基因plcA,分别设计上游和下游的slt、eaeA、hlyA和plcA四对引物,对应扩增片段依次为780、450、708、600bp。通过对单管多重PCR(multiplex PCR,MPCR)扩增的特异性、敏感性分析以及对单管多重PCR扩增条件,如Mg2+浓度、dNTPs浓度和退火温度等的优化,建立快速检测大肠杆菌O157和单增李斯特菌的多重PCR方法,该方法能同时检测到0.50ng的E.coliO157和单增李斯特菌基因组DNA,并且操作简便、快速,具有良好的敏感性和特异性,能够快速实现对食品中多种致病菌的诊断和监控。

补肾中药对拟痴呆小鼠脾淋巴细胞中cGMP含量的影响

用Ｃａｒｂａｃｈｏｌ作为激动剂，测定ｃＧＭＰ含量来反映Ｍ受体ｃＧＭＰ系统功能状态的方法来研究补肾中药对拟痴呆小鼠脾淋巴细胞中Ｍ受体反应性的影响。结果表明：拟痴呆小鼠脾淋巴细胞ｃＧＭＰ基础含量显著低于正常小鼠（Ｐ＜０．０５），由Ｃａｒｂａｃｈｏｌ引起的ｃＧＭＰ升高反应也降低（Ｐ＜０．０５、Ｐ＜０．００１）。补肾中药可明显提高拟痴呆小鼠脾淋巴细胞ｃＧＭＰ含量及增强由Ｃａｒｂａｃｈｏｌ引起的ｃＧＭＰ升高反应。

副溶血弧菌耐热直接溶血毒素基因的克隆及原核表达

根据GenBank上已有的副溶血弧菌耐热直接溶血毒素的基因序列,设计并人工合成引物。将耐热直接溶血毒素的基因全长克隆到大肠杆菌表达载体pGEX-4T-1上,构建重组表达载体tdhA/pGEX-4T-1和tdhS/pGEX-4T-1,转化大肠杆菌BL21(DE3),得到表达的工程菌株。优化诱导表达条件,表达耐热直接溶血毒素。转化有重组质粒tdhA/pGEX-4T-1,tdhS/pGEX-4T-1的BL21可稳定高效地表达可溶形式的目的蛋白。表达产物用聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定,用GST琼脂糖珠柱亲和层析纯化。溶血实验表明,表达的蛋白具有溶血活性。

基因芯片技术检测3种食源性致病微生物方法的建立

建立一种运用多重PCR和基因芯片技术检测和鉴定志贺氏菌、沙门氏菌、大肠杆菌O157的方法,为3种食源性致病菌的快速检测和鉴定提供了准确、快速、灵敏的方法。分别选取编码志贺氏菌侵袭性质粒抗原H基因(ipaH)、沙门氏菌肠毒素(stn)基因和致泻性大肠杆菌O157志贺样毒素(slt)基因设计引物和探针,进行三重PCR扩增,产物与含特异性探针的芯片杂交。对7种细菌共26株菌进行芯片检测,仅3种菌得到阳性扩增结果,证明此方法具有很高的特异性。3种致病菌基因组DNA和细菌纯培养物的检测灵敏度约为8pg。对模拟食品样品进行直接检测,结果与常规细菌学培养结果一致,检测限为50CFU/mL。结果表明:所建立的基因芯片检测方法特异性好,灵敏度高,为食源性致病菌的检测提供了理想手段,有良好的应用前景。