抑制MDR1基因表达shRNA RNAi系统的构建

目的构建抑制多药耐药基因(MDR1)表达的短发夹RNA(shRNA)真核表达载体系统。方法根据MDR1基因已知序列,设计两段21个碱基的MDR1特异性靶序列,合成两对62nt并含有编码shRNA序列的寡核苷酸,双链退火后,克隆到经过BamHI和XbaI双酶切后线性PGE-1载体的U6启动子下游,重组构建RNA干扰(RNAi)质粒。结果对重新构建的pshRNA-MDR1载体经PCR扩增后行电泳分析,并对含有插入基因片段行测序分析。结果表明,62个碱基均成功插入到预计位点,并且序列完全一致。结论载体的成功构建为研究其对MDR1基因表达的抑制作用打下基础,同时使我们发展了在体内合成siRNA的方法。

shRNA介导的RNAi载体构建及对肝癌耐药细胞MDR1基因表达的抑制

目的:重组构建抑制多药耐药MDR1基因表达的shRNA真核表达载体,研究其对肝癌耐药细胞MDR1基因表达的抑制作用,以及对P-糖蛋白(P-gp)表达和功能的抑制作用.方法:根据MDR1基因序列,设计两段21个碱基的MDR1特异性靶序列作为shRNA目标序列(sh-MDR1-1,sh-MDR1-2),重组构建psh-MDR1表达质粒.采用脂质体介导转染肝癌耐药细胞SMMC-7721/R,用MTT法测定细胞对化疗药物阿霉素(ADM)的敏感性,流式细胞仪检测细胞膜表面P-糖蛋白(P-gp)表达和细胞内Rhdaming123(Rh123)的潴留.结果:PCR和DNA测序证实了psh-MDR1-1和psh-MDR1-2重组质粒的成功构建,均能有效地抑制细胞P-gp表达;转染细胞后均能够一定程度地恢复耐药细胞对化疗药物ADM敏感性,P-gp表达水平明显降低,细胞内的Rh123稳态积累量均明显增高;第1条序列更能有效的抑制MDR1基因表达.结论:体外完成shRNA RNAi载体的构建,能有效地逆转肝癌耐药细胞MDR1基因过度表达,抑制P-gp介导的多药耐药.从DNA载体产生的shRNA在肝癌耐药细胞内能诱导RNAi,能够序列特异性地抑制MDR1基因表达.

纤维素基离子凝胶聚合物电解质的制备与性能

通过原位交联木浆纤维素/1-乙基-3-甲基咪唑醋酸盐溶液制备了纤维素基离子凝胶聚合物电解质,并采用扫描电子显微镜(SEM)、流变、力学拉伸及交流阻抗等测试,研究了纤维素基离子凝胶的形貌﹑力学性能和电化学性能。SEM结果表明,所得交联型离子凝胶具有纳米多孔网状结构。流变结果表明高温下离子凝胶具有很好的弹性,200℃时的弹性模量为1.7×105 Pa。电学性能测试结果表明室温下离子凝胶具有很高电导率,达到6.3×10-3 S/cm,且电导率随温度的升高而增大。力学性能测试结果显示离子凝胶具有良好的力学强度,其拉伸强度达9.6 MPa。

N端脑钠肽诊断伴肾功能不全心衰的准确性评价

目的:评价N端脑钠肽(NT-proBNP)诊断伴肾功能不全心衰的准确性。方法:选取50～70岁伴肾功能不全心衰患者104例,测定体重、体表面积和血肌酐(Crea)浓度,计算肌酐清除率(eGFR),并分为三组:eGFR在60～90ml/min为实验I组,eGFR在30～60ml/min为实验II组,eGFR<30ml/min为实验III组,分别测定各组血浆NT-proBNP水平。对照组为50～70岁无心衰、肾功能正常人50例。应用ROC软件计算曲线下面积,评价应用NT-proBNP诊断伴不同程度肾功能不全心衰的准确性。结果:实验I组的NT-proBNP明显高于对照组(P<0.05),实验II组和实验III组的NT-proBNP、Crea、eGFR均明显高于对照组(P<0.05);三组血浆NT-proBNP水平与eGFR密切相关,相关系数为-0.534(P<0.01);三组病例所得到的ROC曲线下面积分别为0.988、0.948、0.908。结论:eGFR影响NT-proBNP诊断伴肾功能不全心衰的准确性;应根据eGFR分层界定NT-proBNP临界值,以提高NT-proBNP诊断伴肾功能不全心衰的准确性。

NASBA和IS-NASBA的临床应用及研究进展

核酸序列依赖扩增(NASBA)是一种特异性等温扩增RNA的技术,是基于一个等温扩增酶系统,包括AMV逆转录酶(AMVRT)、RNaseH和T7RNA聚合酶。以RNA为模板,在AMV逆转录酶和引物Ⅰ的作用下合成cDNA,引物Ⅰ的5′端带有T7启动子序列,然后引物Ⅱ与cDNA链退火合成cDNA链的互补链,进而形成了含完整T7启动子序列的双链DNA。T7RNA聚合酶以此双链DNA为模扳,合成大量拷贝的RNA片段。原位NASBA(insituNASBA,ISNASBA)是结合原位杂交技术而发展起来的,主要用于分子病理学、分子形态学领域的杂交技术。

改性埃洛石纳米管/聚丙烯纳米复合材料的制备与性能

采用KH-550硅烷偶联剂对HNTs进行表面改性,通过溶液共混法制备出了m-HNTs/PP纳米复合材料,并对其流变性能、结晶行为、热稳定性能及力学性能进行了深入研究。流变结果表明:m-HNTs/PP纳米复合材料为熔体假塑性流体,且剪切黏度随HNTs质量分数的增加而逐渐增加。DSC结果表明:复合材料的结晶温度呈现先增加后减小的趋势,但都高于纯PP的结晶温度。力学性能测试和TGA结果表明:加入适当质量分数的m-HNTs明显提高了PP基体的力学强度和热稳定性。

血清分离胶对生化指标测定的临床应用研究

目的本文主要通过比较血清分离胶对12项生化指标测定结果的影响及其检测结果稳定性的动态分析,广泛提高血清分离胶在临床检验工作中的使用率。方法采用血清分离胶真空采血管(检测组)与传统的普通玻璃采血管(对照组)进行随机采样,采集同一供血者血样标本,观察血清分离时间及其离心情况;并对12项生化指标测定结果分析比较;同时对检测结果的稳定性分析比较。结果血清分离胶真空采血管能明显缩短了血清析出时间,检测组与对照组血清生化指标测定结果经统计学处理比较均无显著性差异(t检验,P>0.05),表明分离胶的加入不影响血清各成份的含量;添加分离胶能有效的将血球与血清隔离,0小时测定结果与4℃放置24小时、48小时测定结果经统计学处理比较无显著性差异(t检验,P>0.05)。结论血清分离胶可用于对非抗凝血标本的血清分离,可以保持被分离血清各成份的性状,并且还可以保持血清各成份的稳定性,在临床检验中有很广泛的用途。

血清载脂蛋白A5水平与糖尿病大血管病变的关系

目的探讨血清载脂蛋白A5(ApoA5)水平与2型糖尿病及其合并大血管病变患者的关系。方法将265例2型糖尿病患者按一定的纳入标准,分成不伴血管病变组134例和合并大血管病变组131例;另抽取100名健康体检者作为健康对照组。采用酶联免疫吸附法测定血清ApoA5水平,并进行相关性分析。结果 2型糖尿病合并大血管病变患者血清ApoA5水平与不伴大血管病变组比较,差异具有统计学意义(P<0.05);且显著高于健康对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。另相关分析结果显示,ApoA5与三酰甘油水平呈显著负相关(r=-0.201,P<0.05)。结论 ApoA5水平在2型糖尿病合并大血管病变患者中明显降低,可能是导致2型糖尿病及合并大血管病变的重要危险因素。

鄂西北地区汉族人群CD40基因单核苷酸多态性分析

目的研究CD40-E1SNP和E4SNP单核苷酸多态性在鄂西北部地区汉族人群中的分布,并探讨CD40基因单核苷酸多态性与血浆可溶性CD40水平的关系。方法 318例汉族人,其中男性187例,女性131例;平均年龄31.2岁。应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)及测序的方法,CD40-E1SNP和E4SNP并计算其基因型频率及等位基因频率,酶联免疫吸附分析检测血浆可溶性CD40浓度,并与文献报道不同种族人群比较。结果鄂西北地区汉族人群CD40-E1SNP基因型频率:CC型29.2%,CT型54.1%,TT型16.7%,C、T等位基因频率分别为56.3%、43.7%,这种多态性分布在男女间差异无统计学意义(P>0.05),与英国、波兰比较,发现不同种族间CD40-E1SNP基因型分布及等位基因频率差异均存在统计学意义(P<0.01);CD40-E1SNP各基因表型之间可溶性CD40含量分别为:CC(57.3±6.6)pg/mL,CT(34.2±4.5)pg/mL,TT(28.8±4.2)pg/mL,差异存在统计学意义(P<0.01)。在实验中未检测到CD40-E4SNP单核苷酸多态性。结论鄂西北地区汉族人群中存在CD40-E1SNP单核苷酸多态性,其基因型在不同种族间存在较大的差异,并且可能影响CD40的表达,而不存在CD40-E4SNP单核苷酸多态性。

改性微晶纤维素/线性低密度聚乙烯复合材料的流变性能

采用硅烷偶联剂3-氨基丙基三乙氧基硅烷(KH-550)对微晶纤维素(MCC)进行改性,通过熔融共混法制备了改性MCC/LLDPE复合材料,并对复合材料的流变行为和动态力学性能进行了研究。动态流变测试结果表明,所有复合材料的储能模量、损耗模量和复数黏度随着MCC含量的增加而增加,而受温度的影响变化不大。稳态流变结果表明,MCC/LLDPE复合材料熔体均为假塑性流体,在高剪切速率下复合材料较纯LLDPE有着更低的剪切黏度。动态力学分析结果表明,MCC的加入大大提高了复合材料的刚性。

半叶马尾藻多糖对辐射损伤小鼠免疫功能的保护作用

目的探讨半叶马尾藻多糖[Sargassum hemiphyllum(Turner)C.Ag,SHP]对辐射损伤小鼠免疫功能的影响。方法选取74MBq的32P-玻璃微球(32P-GMS)肿瘤内照射导致荷瘤小鼠辐射损伤,通过流式细胞术、分光光度法、酶释放法测定不同浓度的SHP对辐射损伤小鼠免疫功能的保护作用。结果照射组荷瘤小鼠免疫功能明显低于正常对照组(P<0.01);200,400,800 mg/kg SHP口服灌胃加照射组荷瘤小鼠免疫功能明显高于照射组(P<0.01)。结论74MBq的32P-GMS肿瘤内照射可以抑制小鼠的免疫功能,SHP对辐射损伤小鼠的免疫功能有保护作用。

郧阳地区健康人群血液流变学指标参考值的研究

目的检测郧阳地区健康人群的血液流变学各项指标,初步建立适宜本地区人群血液流变学的正常参考值范围。方法严格挑选1043名不同性别、年龄、职业的健康人(男性548名,女性495名),用R80自动血液流变仪检测其血液流变学指标并对结果作统计学处理。结果相同年龄不同性别男女组间各切变率的全血粘度值、血浆粘度值、红细胞压积、血沉等指标均有显著差异(P<0.05),而不同年龄同性别组间的血液流变学指标无显著差异,但50岁～75岁男女组,血液流变学指标有增高趋势。结论建立本地区正常参考范围,为临床相关疾病的早期预防、诊断、疗效及预后观察提供实验室依据。

浅谈异型淋巴细胞计数在诊断鼻咽癌中的应用价值

鼻咽癌（nasopharyngeal carcinoma．NPC）是鼻咽部最常见的恶性肿瘤。大量资料证明，其病因与EB病毒（Epstein—Barr，EB）感染有密切关系，免疫学研究表明异型淋巴细胞的产生系病毒感染及刺激原刺激淋巴细胞增生亢进．甚至发生母细胞化的结果^[1]。为探讨外周血异型淋巴细胞计数与NPC之间的联系．现就我院2004—2008年住院患者和健康体检者的检测指标进行统计分析。结果报告如下。

重组α_Ⅰb干扰素软膏对豚鼠皮肤疱疹病毒感染的作用

报道了重组α1b干扰素软膏对豚鼠皮肤单纯疱疹病毒感染的局部治疗的效果。目的是在疱疹病毒感染的动物模型上证实α1b干扰素软膏的治疗作用 ,为该药的临床应用提供临床前药效学资料。结果表明α1b干扰素软膏对疱疹病毒的皮肤感染具有缩短病程 ,促进结痂及痊愈的效果 ,可作为一种外用抗疱疹病毒药物应用于临床。

老年冠心病患者血浆HCY、CRP和血脂水平变化及其与冠脉病变程度的关系

目的:探讨冠心病(CHD)患者血浆同型半胱氨酸(HCY)水平与冠脉病变程度及C-反应蛋白(CRP)、血脂水平的关系。方法:检测102例CHD患者和27例正常对照人群的血浆HCY和CRP、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)和脂蛋白(a)[LP(a)]水平,并进行比较及相关性分析。结果:CHD组血浆HCY以及CRP、TG、TC、LP(a)水平显著高于正常对照组;CHD组血浆HCY水平与CRP、TG、TC、LP(a)无明显相关性(P>0.05),血浆HCY、CRP、TG、TC、LP(a)水平随着冠脉病变支数增加而增高,呈显著正相关。结论:高血浆HCY是CHD的独立危险因素,对CHD的预防和诊断具有一定的临床意义。

CD40基因启动子区-1C/T多态性与早发急性心肌梗死的相关性研究

目的:研究我国湖北十堰地区汉族人群CD40基因启动子区-1C/T多态性与早发急性心肌梗死(AMI)的相关性。方法:应用流式细胞仪检测161例早发AMI患者和186名健康对照者的B淋巴细胞CD40表达水平;用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)检测CD40基因启动子区-1C/T多态性的基因型频率分布;应用酶联免疫吸附试验检测血清可溶性CD40配体(sCD40L)水平;应用微粒子增强透射免疫分析技术检测血清超敏C-反应蛋白(hs-CRP)水平。结果:早发AMI患者B淋巴细胞CD40表达水平高于对照组,且差异有统计学意义(平均荧光强度为6.81±2.16比2.08±1.19,P<0.01);而其血清sCD40L及hs-CRP也均较对照组升高,差异有统计学意义(P均<0.01)。基因型分布在早发AMI组(CC=34.2%、CT=54.7%、TT=11.1%)与对照组(CC=23.7%、CT=56.9%、TT=19.4%)的差异有统计学意义(P<0.05)。早发AMI组C等位基因频率高于对照组,差异有统计学意义(61.5%比52.2%,OR=1.465,95%CI:1.082～1.983,P<0.05);B淋巴细胞CD40表达水平在CC、CT、TT各基因型间差异也有统计学意义(P<0.05)。结论:CD40基因启动子区-1C/T多态性可能与我国湖北十堰地区汉族人群早发AMI的发生有关。

两种血糖测定方法的差异性分析

目的 探讨血糖仪测定血糖的可行性及其与生化分析仪测定结果的相关性 ,为临床上采取适当的血糖监测方法提供依据。方法 对 97例待测者抽清晨空腹静脉血 ,2 h内分离血清 ,同时用血糖仪和生化分析仪进行血糖测定。结果 血糖仪和生化分析仪测定血糖均值分别为 (6 .5 74± 1 .81 5 ) mmol/L,(5 .48± 1 .40 4 ) mmol/L ,两组结果差异显著 ,但呈高度正相关。结论 血糖仪测定血糖值可以作为临床监测指标 ,但需要校正。