不同处理方法对骨髓间充质干细胞与小肠黏膜下基质复合效果的影响

目的探讨不同处理方法对骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)与小肠黏膜下基质(small intestinal submucosa,SIS)复合效果的影响。方法制备MSCs和SIS,将MSCs以不同浓度、不同接种次数与SIS复合,比较复合浓度、复合次数及复合时间对复合效果的影响。SIS用不同预湿方法处理后,将MSCs以2个浓度接种于预湿方法处理后的SIS上,比较不同的预处理方法对复合效果的影响。结果MSCs以2×106/mL与新法预处理的SIS复合后黏附率最高。MSCs与SIS复合后光学显微镜下可见SIS黏膜面有较多细胞附着,浆膜面几乎无细胞附着。扫描电镜可见细胞附着在SIS表面,呈长梭形或不规则形状,细胞表面可见颗粒状物及微绒毛。结论采用新的预湿方法,MSCs以2×106/mL的浓度与SIS复合1 d后用于移植,复合效果最佳。

大鼠阴道重建动物模型的构建

目的构建大鼠阴道重建动物模型。方法手术切除雌性大鼠阴道,将小肠黏膜下基质(small intestinal submucosa,SIS)置入切除后形成的腔穴内重建大鼠阴道。分别于术后14 d、1个月、3个月随机处死6只大鼠,取出阴道全层检测重建阴道组织中上皮组织、平滑肌组织及神经组织的的生长情况,取4只大鼠于3个月时处死用组织浴槽的方法进行功能学检测,即给予不同的电场刺激(electrical field stimulation,EFS),检测重建阴道组织张力的变化情况。结果大鼠阴道重建手术能很好的模拟无阴道患者的阴道成形术。重建阴道14 d时质地比较韧,没有弹性,随时间延长质地逐渐变软,至3个月时明显变软,并且有一定的弹性。重建阴道镜检:14 d时可见有部分上皮组织从阴道入口向上爬行,伴有较多炎细胞浸润,1个月时上皮组织能覆盖整个阴道,3个月时上皮组织更加成熟。新生上皮组织表达广谱角蛋白AE1/AE3;1个月时重建阴道组织中有少量组织表达α平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA),提示平滑肌的再生,3个月时α-SMA表达增多局部形成束状;直到3个月时重建阴道组中才偶见蛋白基因产物9.5(protein gene product 9.5,PGP9.5)阳性的神经组织。组织浴槽实验中在电场刺激下重建阴道组织有轻微的收缩反应,收缩的图形和变化趋势与正常阴道类似,但收缩强度明显小于正常阴道。结论用大鼠构建阴道重建模型操作简便,可用于评估多种组织材料用于阴道重建的效果,为进一步构建更好的重建阴道奠定了基础。

CM-Dil标记对骨髓间充质干细胞的影响及其在大鼠阴道重建模型中的示踪

目的探讨骨髓间充质干细胞(bone marrow stem cells,BMSCs)氯甲基苯甲酰胺(chloromethyl-benzamidodialkylcarbocyanine,CM-DiI)标记的效果及其标记后在大鼠阴道重建模型中的示综。方法全骨髓贴壁培养法培养大鼠BMSCs。用不同浓度的CM-Dil标记液标记BMSCs,观察不同浓度标记下BMSCs的标记效率和增殖能力。BMSCs与小肠黏膜下基质(small intestinal submucosa,SIS)复合后构建大鼠阴道重建模型,观察干细胞在重建阴道的示综。结果CM-DiI标记后各浓度的标记效率都可达98%以上,但荧光强度随浓度的增加而变强。2.5μmol/L及5μmol/L标记后的生长曲线与对照组无明显区别,10μmol/L及20μmol/L标记后生长曲线较对照组稍降低。BMSCs移植后主要分布在阴道深层组织中,术后3个月仍可见橙黄色的BMSCs。结论CM-DiI标记对干细胞活性影响小,5μmol/L可能是最佳的标记浓度,BMSCs移植后3个月仍可见橙黄色的BMSCs,可用于后期进一步研究。