粒细胞集落刺激因子(G-CSF)对心肌梗死后心室重构与心脏功能的影响

粒细胞集落刺激因子(G-CSF)能够将骨髓干细胞动员到缺血组织参与组织修复,因而具有治疗心肌梗死的潜力.但是目前国际上对该疗法的效果尚存在争议.为了研究心肌梗死急性期内注射G-CSF对心肌纤维化及心脏功能的影响,将SD大鼠冠状动脉左前降支结扎3h后,皮下注射G-CSF(50μg/kg/d,共5d)或等量生理盐水.结果显示G-CSF注射5d后,外周血白细胞数量显著增加.3个月后,G-CSF注射显著增加了梗死范围和左心室胶原含量,损害了心脏功能.由以上可见,心肌梗死急性期内给予G-CSF治疗促进了心肌组织纤维化,并导致了心室扩张和心脏功能恶化.

辛伐他汀对大鼠心肌梗死后TNF-α、IL-6表达及心室重构的干预研究

目的:探讨炎性细胞因子与梗死后心室重构的关系,观察辛伐他汀对细胞因子以及心室重构的影响。方法:雌性SD大鼠建立急性心肌梗死(AMI)模型后随机分为辛伐他汀组、心梗对照组,另设假手术组。4周后二维超声心动图检测并计算心功能指标;放射免疫法测定血清及心肌组织Ⅲ型前胶原氨基末端肽(PⅢNP)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)含量。处死动物计算心肌肥厚指数,心室切片染色后应用显微镜微机图像分析系统计算梗死面积。结果:与对照组相比,辛伐他汀组LVDd、LVDs显著降低(P<0.05),LVEF、LVFS显著增加(P<0.05)。与假手术组相比,对照组、辛伐他汀组血清、心肌TNF-α、IL-6及血清PⅢNP含量增加(P<0.05或P<0.01);与对照组相比,辛伐他汀组血清TNF-α、IL-6及PⅢNP含量显著降低(均P<0.05);与对照组非梗死区相比,辛伐他汀组非梗死区心肌TNF-α、IL-6含量显著降低(均P<0.05)。与假手术组相比,对照组、辛伐他汀组心脏相对质量明显增加(均P<0.01)。与对照组相比,辛伐他汀组心脏相对质量显著降低,梗死面积显著减少(均P<0.05)。结论:辛伐他汀降低AMI后TNF-α、IL-6的表达,改善了心室重构,抗炎作用可能是其机制之一。

壳聚糖纳米粒介导的HSV-tk基因对前列腺癌的体外杀伤作用

目的:考察壳聚糖纳米粒作为自杀基因载体进行前列腺自杀基因治疗的可行性,为前列腺癌的基因治疗寻找新的基因载体。方法:将壳聚糖纳米粒包裹的含报告基因的质粒pEGFP-C1分别转染前列腺癌细胞PC-3和22Rv1,并观察EGFP的表达情况。随后将含HSV-tk自杀基因的真核高效表达质粒pcDNA3-tk经壳聚糖纳米粒包裹后转染上述2种前列腺癌细胞,转染48 h后,以RT-PCR检测HSV-tk基因的表达情况。最后对转染的2种细胞给予不同浓度的前体药更昔洛韦(ganci- clovir,GCV)作用24 h后,采用MTT比色法测定药物对细胞增殖的影响,并进行统计学分析。结果:壳聚糖纳米粒能够将质粒pEGFP-C1转入2种前列腺癌细胞,并表达EGFP,在PC-3细胞中壳聚糖纳米介导的转染效率高于脂质体。采用壳聚糖纳米粒转染pcDNA3-tk于2种前列腺癌细胞后,RT-PCR证明在癌细胞中有HSV-tk基因的表达。给予前体药物GCV后,实验组细胞生长抑制率与只给壳聚糖或裸质粒的对照组相比明显增高,说明HSV-tk自杀基因纳米粒在细胞中表达,从而使HSV-tk/GCV自杀基因系统发挥杀伤细胞的作用。结论:壳聚糖纳米粒能将质粒基因pcDNA3-tk转入前列腺癌细胞并表达胸苷激酶发挥作用,可做为前列腺癌自杀基因治疗的基因载体。

新型基因载体G5-PAMAM-D在前列腺癌HSV-tk/GCV自杀基因系统中的应用

背景与目的:考察纳米级阳离子聚酰胺-胺型树枝状聚合物(polyam idoam ine dendrimers,PAMAM-D)作为基因载体进行前列腺癌自杀基因治疗的可行性,为前列腺癌的基因治疗寻找新的基因载体。方法:以第5代PAMAM-D(G5-PAMAM-D)为载体将含增强型荧光蛋白(EGFP)基因片段的重组质粒pEGFP-C1转染至前列腺癌细胞系PC-3和22Rv1,成功表达EGFP后,再以G5-PAMAM-D为载体将含HSV-tk自杀基因的真核表达重组质粒pcDNA3-tk转染至前列腺癌细胞系PC-3和22Rv1,转染48h后,对转染的两种细胞给予浓度为0、10、100、1000、10000μmol/L前体药更昔洛韦(Ganciclovir,GCV),24h后采用MTT比色法测定药物对细胞增殖的影响。制作前列腺癌皮下荷瘤小鼠,将G5-PAMAM-D/pcDNA3-tk复合物瘤内注射,24h后腹腔注射GCV,观察这一复合物体内对肿瘤生长的抑制作用。结果:荧光观察及FCM结果证明G5-PAMAM-D可将pEGFP-C1转入两种前列腺癌细胞并表达EGFP。采用G5-PAMAM-D将pcDNA3-tk重组质粒转染PC-3和22Rv1细胞,给不同浓度的前体药GCV后,实验组细胞与对照组相比有明显浓度依赖性生长抑制。荷瘤小鼠在给予瘤内注射G5-PAMAM-D/pcDNA3-tk复合物后,行腹腔注射GCV,治疗后第40天,实验组肿瘤体积(1135±245mm3)与对照组裸质粒组(9965±2109mm3)和PAMAM-D组(8357±1956mm3)相比肿瘤生长明显被抑制(P<0.01),生存时间延长。结论:G5-PAMAM-D可作为前列腺腺癌自杀基因治疗的基因载体,有良好的应用前景。

干细胞在心肌梗死治疗中的应用

近年来,干细胞的研究进展,给心肌梗死的治疗带来了新的希望,干细胞移植也成为了当前研究的热点问题。骨髓干细胞、胚胎干细胞、骨骼肌成肌细胞等已被应用于心肌的再生。研究表明,干细胞移植能有效地改善梗死心肌的功能,但其作用机制尚不完全明了。本研究对干细胞移植治疗心肌梗死研究中取得的成就、有待解决的问题以及临床应用前景作了一个总的评述。

壳聚糖纳米粒介导的CD基因对前列腺癌的体外杀伤作用

目的考察壳聚糖(Chitosan)纳米粒作为自杀基因载体进行前列腺癌自杀基因治疗的可行性,为前列腺癌的基因治疗寻找新的基因载体。方法将壳聚糖纳米粒包裹含报告基因质粒pEGFP-C1转染至前列腺癌细胞系PC-3和22Rvl,观察EGFP的表达情况,再将含胞嘧啶脱氨酶(Cytosinedeamiase,CD)自杀基因的真核表达质粒pcDNA3-CD转染至该2种前列腺癌细胞,转染48h后,以RT-PCR检测CD基因的表达。对转染的两种细胞给予不同浓度的前体药5-氟胞嘧啶(5-fluorocytosine,5-FC)24h后,采用MTT比色法测定药物对细胞增殖的影响,并进行统计学处理。结果表明壳聚糖纳米粒能够将质粒pEGFP-C1转入2种前列腺癌细胞,并表达EGFP,在PC-3细胞其转染效率高于脂质体转染试剂。采用壳聚糖纳米粒转染pcDNA3-CD于2种前列腺癌细胞后,RT-PCR证明在癌细胞中有CD基因的表达。给予前体药物5-FC后,实验组细胞生长抑制率与只给壳聚糖或裸质粒的对照组相比明显增高,说明壳聚糖纳米粒可将CD自杀基因递送至前列腺癌细胞中,并在细胞中进行表达,从而使CD/5-FC自杀基因系统发挥杀伤细胞的作用。结论壳聚糖纳米粒能将质粒基因转入前列腺癌细胞并表达,可做为前列腺癌自杀基因治疗的基因载体,有良好的应用前景。

我国畜禽养殖业抗生素的使用特征及其环境与健康风险

我国是畜禽养殖大国,也是兽用抗菌药物的生产和使用大国。兽用抗菌药的长期大量使用造成了环境污染、细菌耐药性增强、畜禽农产品安全风险增高等问题,危害人类健康。本文综述了我国2009—2019年间兽用抗菌药的用量,分析了兽用抗菌药的使用现状及特征,发现2009—2019年兽用抗菌药物用量占兽用化学药品用量的比例在69.6%~74.1%之间,兽用抗菌药用量在2014年达到最大值,随后逐年降低。兽用抗菌药的主要使用类型以四环素类为主,以促生长为目的使用的抗菌药物以金霉素和土霉素为主。通过对不同食品中抗生素的残留情况进行分析发现,抗生素在牛奶、养殖鱼和蔬菜中的检出率为90.9%~100%,且养殖鱼中喹诺酮类抗生素平均残留量为725.13μg·kg^(-1),超出国家食品安全限量标准(100μg·kg^(-1))。本文同时总结了环境中抗生素残留情况及细菌耐药性的产生及其机制,探讨了抗生素大量使用对动物及人体健康的危害,最后分别从源头、使用、排放和修复等角度对抗生素污染防治提出管理建议和措施,以期助力抗生素污染控制。

CXCR4基因修饰骨髓间充质干细胞体外迁移实验

构建一种高表达基质细胞衍生因子受体(CXCR4)的大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs),考察CXCR4对细胞定向迁移能力的影响。实验构建了pMSCV-CXCR4-IRES-GFP基因质粒,并通过逆转录病毒将其转入预先培养的MSCs中。分别采用流式细胞分析仪、反转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫荧光染色法检测CXCR4在MSCs中的表达,并利用Transwell方法检测基质细胞衍生因子(SDF-1)对MSCs体外定向迁移的影响。流式细胞仪分析显示,转基因MSCs表面CXCR4的阳性率为46%,绿色荧光蛋白(GFP)阳性率为57%。RT-PCR进一步证实了CXCR4的表达。细胞迁移实验结果表明,CXCR4基因修饰促进了MSCs向SDF-1的定向迁移,当SDF-1浓度为50 ng/ml时,这种定向迁移能力较之对照组提高了近5倍。通过以上结果可以初步证实,MSCs表面CXCR4表达量在SDF-1/CXCR4介导的细胞迁移通路中发挥着重要作用,这为进一步研究MSCs的体内迁移和归巢提供了依据。

阳离子聚酰胺-胺型树枝状聚合物介导STAT3-shRNA对前列腺癌生长的抑制作用

目的探讨第5代阳离子聚酰胺-胺型树枝状聚合物(G5-PAMAM-D)作为小发卡RNA (shRNA)真核表达质粒的载体,进行前列腺癌RNA干扰基因治疗的可行性。方法根据增强型绿色荧光蛋白(EGFP)、信号转导子和转录激活子3(STAT3)cDNA序列结构,分别设计构建表达EGFP mRNA、STAT3 mRNA的特异shRNA真核表达质粒pSilencing 4.1-EGFP-shRNA和pSilencing 4.1- STAT3-shRNA。在体外以G5-PAMAM-D为载体,将质粒pEGFP-C1和pSilencing 4.1-EGFP-shRNA共转染前列腺癌细胞PC-3、22Rvl,通过观察EGFP表达检测干扰效果以及转染效率;然后,以同样的方式将pSilencing 4.1-STAT3-shRNA转入前列腺癌细胞系,四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测其对细胞生长的抑制作用,丫啶橙染色观察细胞凋亡。制作前列腺癌小鼠模型,将G5-PAMAM-D与质粒pSilencing 4.1-STAT3-shRNA的混合物注射人荷瘤鼠肿瘤内,观察对肿瘤生长的抑制作用。结果体外实验表明,G5-PAMAM-D可将pSilencing 4.1.EGFP-shRNA转入前列腺癌细胞,明显沉默EGFP的表达,并且G5-PAMAM-D可将pSilencing 4.1-STAT3-shRNA有效转入前列腺癌细胞中,明显抑制肿瘤细胞的生长,增加细胞的凋亡。体内实验证明,G5-PAMAM-D/pSilencing 4.1-STAT3-shRNA可抑制荷瘤鼠前列腺癌的生长,而各对照组肿瘤生长无明显抑制。结论G5-PAMAM-D作为基因载体,可将shRNA的真核表达质粒在体内外转入前列腺癌组织细胞,并有效表达shRNA;G5-PAMAM-D可能成为应用前景广阔的小干扰RNA(siRNA)的载体。

超声心动图评估直接心肌注射骨髓间充质干细胞对心肌梗死的治疗效果

由于心肌细胞属不可再生细胞，梗死心肌局部只能通过纤维瘢痕组织取代，这种心肌重构是造成患者心力衰竭及死亡的主要原因之一。近年来国内外实验及初期临床研究证明将骨髓间充质干细胞（mesenchymal stem cells，MSC）植入梗死心肌后，MSC可在病变区分化增殖成血管内皮细胞及有功能的心肌细胞，有效改善了梗死周边的血供及瘢痕形成所致的心室重构，

太阳辐射减弱对水稻光合生理特性和中微量元素积累的影响

近年来雾霾等大气环境污染问题突出,气溶胶导致到达地表的太阳辐射强度降低,对农作物生长造成了较大影响。为了探讨太阳辐射强度降低对粮食作物生理特性和矿质元素营养的影响,本研究以‘南粳5055’水稻品种为供试材料,采用田间随机区组设计,通过不同程度遮光处理模拟弱光环境(CK,不遮光对照;Y1、Y2遮光率分别为19%、45%),研究了在水稻关键生育期(拔节期、抽穗期、灌浆期)内叶绿素含量(SPAD)、叶面积指数(LAI)、叶片净光合速率、产量和籽粒中、微量金属元素(Ca、Mg、Fe、Zn、Mn、Cu)含量的响应特征。结果表明:全生育期内遮光处理抑制了水稻光合作用产物的合成,降低了叶面积指数;但在生育前期对叶绿素含量无显著影响,在生育后期则显著增加。两种遮光处理下水稻的千粒重较CK分别降低了14.4%和18.4%,结实率降低了4.3%和12.9%,从而导致水稻产量下降,且随着遮光程度增加,水稻减产率加大,产量分别下降了58.5%和66.4%。遮光处理籽粒糙米和颖壳中金属元素含量升高,尤其微量元素含量显著上升。可见,遮光对水稻生长产生了不利影响,最终使其减产,并使Cu、Mn等重金属元素含量增加,这可能造成污染风险进而对人体健康造成威胁,因此,太阳辐射减弱对作物产量和品质的影响需要综合评价。