水通道蛋白9商品化抗体和自制抗体识别位点的分析和应用

目的分析水通道蛋白9(AQP9)商品化抗体和自制抗体的抗原识别位点,并鉴别其应用效果。方法利用Western blotting对比3种商品化抗体与自制AQP9抗体鉴定基因型的效果。分析4种抗体的抗原识别位点,及其在实际应用中的特异性。结果Western blotting结果显示,3种商品化抗体在野生型(WT)和Aqp9^(-/-)小鼠中均可见蛋白条带。3种商品化抗体对应的血蓝蛋白(KLH)共轭合成肽依次为大鼠、人源和人源,与小鼠AQP9氨基酸序列存在一定差异。AQP3/7与AQP9分子量相近,且在肝中均有表达,同源性较高。自制抗体在WT鼠的27 kD位置可见一明显条带,但是Aqp9^(-/-)鼠的相应位置未见条带。结论1号和3号商品化抗体可用于辅助鉴别Aqp9^(-/-)鼠的基因型,自制抗体在蛋白水平上可以准确鉴定基因型。

经双耳上头皮后切口的取脑法

目的传统的环状切口或十字切口取脑法无法满足保护捐献者遗容的要求。我们提出经双耳上头皮后切口的取脑法,有效地保护了捐献者的遗容。方法采用距枕外隆凸上方2.0 cm,至耳廓最前缘切口,获取完整的脑。结果该切口未涉及头面部皮肤,且切口小,有利于缝合修复,减少了渗液。结论该切口有效地保护了捐献者的遗容,将有利于脑库的建立和发展。

利用CRISPR/Cas9系统构建水通道蛋白9基因敲除小鼠

目的利用CRISPR/Cas9系统敲除小鼠水通道蛋白9(AQP-9)基因,构建稳定敲除AQP-9基因的纯合子AQP-9^(-/-)小鼠。方法根据CRISPR/Cas9靶点设计原则,在Ensembl数据库上找到AQP-9基因序列的外显子区域,综合分析选定AQP-9-202的公共外显子2,前期在其两边设计7个小向导RNA(sgRNA)靶点,选择合适靶点,将AQP-9敲除。用PCR以及基因测序手段检测基因敲除效果。获得F1代杂合子小鼠后,继而提供10只野生型小鼠(雌雄各5只)进行繁育,以期得到纯合子AQP-9^(-/-)小鼠。结果前期设计的7个sgRNA靶点基因活性均在95%以上,选择L2和R2作为最终的sgRNA靶点。注射受精卵74枚,移植60枚,得到6只F0代阳性鼠。经过繁育鉴定,最终得到稳定敲除AQP-9基因的纯合子AQP-9^(-/-)小鼠。结论利用CRISPR/Cas9系统获得全身敲除AQP-9基因且可稳定遗传的纯合子AQP-9^(-/-)小鼠。

利用CRISPR/Cas9系统构建Aqp9基因敲除小鼠

近年来,CRISPR/Cas9系统发展成为一种新兴的基因编辑技术。本实验根据CRISPR/Cas9靶点设计原则,在Ensembl数据库上找到Aqp9基因序列的外显子区域,综合分析选定Aqp9-202外显子,在其两边设计sgRNA靶点,经检测所设计的7个靶点基因活性均在95%以上,选定L2和R2。注射受精卵74枚,移植60枚,得到6只F0代鼠。

二氢杨梅素下调大鼠缺血性脑卒中脑组织炎症小体Nod样受体蛋白3的表达

目的 研究二氢杨梅素(DHM)在大鼠缺血性脑卒中治疗方面的作用,并探讨其对炎症小体Nod样受体蛋白3(NLRP3)表达的影响。方法 取70只SD大鼠,利用线栓法构建大鼠大脑中动脉栓塞(MCAO)模型,采用Longa评分、TTC染色、Nissl染色、免疫组织化学染色及Western blotting等方法,探讨DHM对MCAO大鼠缺血/再灌注损伤的治疗效果及机制。结果 DHM治疗后MCAO大鼠自主运动能力明显改善,脑组织梗死体积明显减小,脑组织结构和神经元形态较为改善,且DHM治疗后的NLRP3和炎症因子白细胞介素1β(IL-1β)蛋白表达显著降低。结论 DHM能下调炎症小体的表达,进而降低MCAO脑卒中大鼠的脑梗死体积并改善神经行为学表现。

缺血性脑卒中与血管性痴呆在发病机制上的联系

缺血性脑卒中造成的脑损伤可以继发认知或行为障碍。研究表明,缺血性脑卒中是血管性痴呆的一个危险因素。涉及共同的病理生理过程及相似的危险因素。在发病机制上存在联系,均包含了内皮细胞功能紊乱及血脑屏障通透性增高。缺血性脑卒中后存在的微梗死、微血管改变、局部神经元萎缩和神经退行性变均可能是继发血管性痴呆的病理机制。但是,两者相关的具体机制仍然未完全阐明。

二氢杨梅素下调大鼠缺血性脑卒中脑组织NLRP3的表达

本研究旨在探讨二氢杨梅素(DHM)在大鼠缺血性脑卒中治疗方面的作用,并探索其对炎症小体Nod样受体蛋白-3(NLRP3)表达的影响。利用线栓法构建大鼠大脑中动脉栓塞(MCAO)模型,采用Longa评分、TTC染色、Nissl染色观察、免疫组织化学染色及Western blot检测等方法,探究DHM对MCAO大鼠缺血再灌注损伤的治疗效果及机制。

肝纤维化大鼠联合门静脉离断与肝脏离断的二步肝切除术模型的建立

目的:通过四氯化碳(CCl_(4))和乙醇综合法建立联合门静脉离断与肝脏离断的二步肝切除术(associating liver partition and portal vein ligation for staged hepatectomy,ALPPS)的肝纤维化模型,探讨ALPPS应用于肝纤维化大鼠的安全性及可行性。方法:将40只雄性SD大鼠采用抽签法随机均分为对照组和肝纤维化组,每组各20只。对照组大鼠进行常规饲养,并采用橄榄油注射4周。肝纤维化组大鼠采用40%CCl_(4)的橄榄油溶液背部皮下注射+饮用10%乙醇4周。肝纤维化组和对照组各取5只大鼠,进行天狼猩红染色判断肝纤维化的程度。其余15只大鼠行ALPPS,并于术后即刻、第3天、第6天各取5只大鼠,取再生肝脏称重,检测肝脏增生情况,并进一步通过Ki-67免疫组织化学染色判断肝细胞再生情况。结果:通过CCl_(4)和乙醇综合法建模4周,肝纤维化组大鼠体重缓慢增加,生活基本未受影响,且肝纤维化均匀,有1只大鼠因注射CCl_(4)死亡,建模成功率为95.0%。肝纤维化组和对照组大鼠在ALPPS后均实现了剩余肝脏体积的快速增长,且两组差异无统计学意义(P>0.05)。肝纤维化组和对照组大鼠肝组织的Ki-67阳性细胞均在术后第3天明显增多,术后第6天明显减少。结论:采用CCl_(4)背部皮下注射和乙醇综合法可以快速建立肝纤维化大鼠模型,在此基础上进行ALPPS是安全可行的。本研究建立了稳定高效的肝纤维化大鼠ALPPS模型。