人胎盘滋养层细胞的分离培养及IgG FcγRⅢ在滋养层细胞的表达

目的 :体外分离培养人胎盘滋养层细胞 ,观察其生物学特性 ,研究IgGFcγRⅢ (CD16)在人胎盘组织中的定位及体外培养的滋养层细胞是否存在CD16,从而为HCV母婴传播机制的研究提供细胞学实验基础。 方法 :采用胰蛋白酶消化法消化人足月胎盘组织 ,以 3 5 %、4 5 %两个Percoll密度梯度进行分离纯化。用ABC免疫组化染色法对足月分娩后的胎盘组织石蜡包埋切片及体外分离培养的胎盘滋养层细胞进行染色。 结果 :胎盘组织中滋养层细胞角蛋白染色阳性 ,血管内皮细胞及基质成分波形蛋白染色阳性 ,经该法分离纯化的细胞角蛋白染色阳性者(滋养层细胞 )占 90 %以上 ,胎盘组织切片的滋养层细胞及体外分离培养的滋养层细胞抗CD16染色阳性 ,阳性信号定位于胞质 ,未见胞核着色。 结论 :改进后的分离方法可以得到较高纯度的滋养层细胞 ,胎盘组织的滋养层细胞和体外分离培养的滋养层细胞均有CD16表达。

人胎盘滋养层细胞的分离培养及HCV体外感染试验

目的 体外分离培养较高纯度的胎盘滋养层细胞 ,观察其生物学特性 ,探讨丙型肝炎病毒 (HCV)经胎盘母婴传播的具体途径 .方法 采用胰蛋白酶消化法消化人足月胎盘组织 ,以 35 % ,4 5 %两个 Percoll密度梯度进行分离纯化 .并用免疫组化及透射电镜等技术对其生物学特性进行观察 .HCV阳性血清感染体外分离培养的胎盘滋养层细胞 ,通过逆转录聚合酶链反应及扩增敏感试验对培养上清进行定性、定量检测 ,以观察 HCV的感染及复制情况 .结果 胎盘组织中滋养层细胞角蛋白染色阳性 ,血管内皮细胞及基质成分波形蛋白染色阳性 ,经该法分离纯化的细胞角蛋白染色阳性者 (滋养层细胞 )占 90 %以上 ,电镜下滋养层细胞可观察到成熟型、中间型、未成熟型三种形态 .HCV感染细胞培养 16 d内培养上清中可间断检测出 HCV RNA.结论 改进后的分离方法可以得到较高纯度的滋养层细胞 ,HCV感染胎盘滋养层细胞可能是 HCV宫内母婴传播的途径之一 .

透射电镜及激光共聚焦技术观察体外丙型肝炎病毒感染的人胎盘滋养层细胞

目的:探讨体外分离培养的人体胎盘滋养层细胞感染丙型肝炎病毒(HCV)的可能性,以及滋养层细胞感染HCV后的超微结构改变.方法:采用胰蛋白酶消化法及Percoll密度梯度分离法分离培养人胎盘组织中滋养层细胞后,以HCVRNA阳性血清对滋养层细胞进行体外感染试验,应用RT-PCR法定性及定量检测感染后细胞培养上清中HCVRNA,透射电镜观察HCV感染后滋养层细胞的超微结构改变,并用激光共聚焦技术观察免疫荧光染色后HCVNS5在滋养层细胞中的定位.结果:HCV感染后的细胞培养上清中可间断检测到HCVRNA,而对照组始终未检出;激光共聚焦观察显示HCVNS5主要定位于细胞核周;HCV感染后滋养层细胞超微结构发生了明显改变,主要表现为溶酶体大量增生,粗面内质网增生,脂滴减少,出现空泡状结构,并可观察到病毒样颗粒.结论:HCV可以感染滋养层细胞,并导致滋养层细胞的超微结构发生类似黄病毒科病毒感染后的改变.

丙型肝炎病毒母婴传播机制研究

随着对血制品检测的加强及检测技术的提高,HCV经输血传播的发生率已大大降低。现研究认为HCV存在母婴传播,近年来许多学者对HCV母婴传播的具体机制、影响因素等进行了大量研究,但仍有许多问题尚无统一认识,且目前的研究多数为流行病学调查,关于HCV如何在母婴间进行传播的具体机制研究报道甚少。本文就目前丙型肝炎病毒母婴传播及其机制研究进展作一综述。

感染性腹泻的微生态疗法

0引言 从微生态学观点来说,胃肠道受到外界因素的影响导致内部的微生态失调将导致腹泻.对于感染性腹泻的防治,目前仍以抗生素治疗为主,但应用抗生素治疗的弊端已愈来愈引起人们的重视,微生态制剂的兴起是治疗感染性腹泻的又一重要手段,它具有调节肠道菌群失调及改善肠道生态环境的作用,对急、慢性腹泻和抗生素引起的肠道菌群失调有良好的预防和治疗作用.微生态防治的本质是以扶植正常菌群,拮抗致病或条件致病菌,调整和恢复微生态平衡为目的的一种预防和治疗方法[1].

HBV、HCV垂直传播机制及预防研究近况

我国是乙、丙型肝炎病毒感染的高发区,人群中HBsAg阳性率约占10%.慢性HBV感染者约1.3亿;丙型肝炎病毒感染率为3.2%,据此推算,中国的丙型肝炎病毒感染者至少有3000万[1].目前研究已证实乙型、丙型肝炎病毒均存在母婴传播,由于生命早期病毒感染后免疫耐受的存在,使新生儿成为慢性乙型、丙型肝炎病毒携带者,以致发展为肝硬化、肝癌.

老年HCV感染典型病例介绍及抗病毒治疗策略调整

对于老年慢性患者,应根据患者年龄、对药物的耐受性、合并症（如高血压、冠心病等）及患者的意愿等因素全面衡量考虑是否进行抗病毒治疗。2011年EASL诊疗指南也仅提及老年人病情进展较快,利巴韦林用量需根据体重计算,并需加强副反应的监测。我们报道2例老年慢性患者接受了个体化抗病毒治疗策略。

丙型肝炎病毒超微结构研究进展

丙型肝炎病毒(HCV)基因组克隆成功后,人们对其基因组的研究已十分深入,但由于HCV病毒颗粒在感染者血中、肝脏中含量很低,血中HCV又往往与免疫复合物和脂蛋白包裹存在,以及缺乏有效的HCV体外培养体系和小动物模型,形态结构研究难度极大而相对滞后,有关HCV超微结构和病毒装配过程还知之甚少,多数研究认为HCV病毒颗粒由外膜及核心组成,外膜表面有钉状突起.HCV感染后的细胞多数可见扩大的胞质囊腔,病毒颗粒多存在胞质囊腔内,这些胞质囊腔认为来自扩大的细胞内质网.细胞核内、胞质、血清、体外培养细胞中HCV颗粒的大小、形式有差异,目前尚无统一认识,其在感染细胞内的形态结构和定位尚不清楚.本文就近年来有关HCV超微结构研究的相关文献进行回顾.

肝衰竭实验室诊断新指标探讨及临床意义

肝衰竭实验室检测的目的有:①提供诊断和鉴别诊断的依据;②了解肝脏损害的程度,②观察病情发展与演变;④预测预后;⑥指导治疗。肝衰竭时很难用单一指标来准确评价肝功能受损的程度。近年来,一些反映肝衰竭预后评价的新的生物标志物不断涌现,包括反映肝脏储备功能的吲哚青绿(ICG)清除试验,反映物质代谢异常的乳酸、动脉血酮体比测定等;反映肝脏合成功能异常的甲胎蛋白、C反应蛋白、凝血因子V水平、谷胱甘肽-S-转移酶(GST)等;反映肝脏免疫反应的可溶性CD163(sCD163),以及胸腺素β4、Gc球蛋白、骨桥蛋白、M30抗原等指标。将这些新的生化指标纳入判断肝衰竭预后标准之中,将有助于不断完善肝衰竭的评价体系。

钙离子信号调节亲环素配体研究进展

钙离子信号调节亲环素配体(CAML)作为亲环素B的结合蛋白于1994年被首次发现,尽管其具体作用机制目前还不十分清楚,但许多研究已证实其在T细胞受体及钙离子信号转导、细胞凋亡、免疫调节以及病毒感染等方面具有重要作用.目前已经报道与其相互作用的蛋白主要有:跨膜激活剂及钙调亲环素配体相互作用分子(transmembrane activator and CAML interactor,TACI)、EGF受体,血管紧张素ⅡⅠ型受体相关蛋白(AT1 receptor-associated protein,ATRAP)、人立早基因(immediate early geneX-1,IEX-1)、淋巴细胞特异蛋白质酪氨酸激酶(p56Lck)、常染色体隐性遗传性多囊肾疾病的相关基因PKHD1编码的蛋白fibrocystin,以及霍普金氏肉瘤相关疱疹病毒K7蛋白(KSHV)等.本文就CAML相关研究进展作简要综述.

乙型肝炎后肝硬化合并原发性甲状腺功能减退症1例

肝硬化患者常可出现低T3综合征或低T3、T4综合征,但肝硬化合并原发性甲状腺功能减退症者文献报道很少.本文对1例静止性肝硬化合并腹水,同时并发原发性甲状腺功能减退症,因甲减临床表现不典型而误诊2年的少见病例报道如下.

利巴韦林抗HCV作用机制研究进展

1998年,利巴韦林开始用于与IFN-α联合治疗丙型肝炎病毒(HCV)感染。目前研究认为,利巴韦林可能通过影响宿主免疫反应而起作用,其主要抗病毒作用机制可以归纳为间接作用和直接作用两大类。间接作用机制包括通过启动T细胞表型从2型向1型转化,增强宿主的T细胞介导的抗病毒免疫以及抑制宿主单磷酸次黄嘌呤核苷脱氢酶(IMPDH);直接作用机制包括:直接抑制BNA依赖的RNA多聚酶,从而抑制HCV复制,以及作为RNA诱变剂,使快速突变的RNA病毒加速错误突变。

钙离子调节亲环素配体及其不同剪接体的克隆及生物信息学分析

目的:克隆钙离子调节亲环素配体(CAML)及其不同剪接体,并应用生物信息学进行分析。方法:以Jurkat、HepG2细胞提取的cDNA为模板,PCR扩增CAML基因,选用pGEM-T-easy载体进行TA克隆,利用VectorNTI9.0软件与CAML基因所在染色体进行比对分析,并对CAML全长基因进行生物信息学分析。结果:CAML基因克隆成功,并证实CAML基因在细胞中存在3种剪接体,分别为缺失全长CAML cDNA序列中634~698、173~633和173~698 bp的CAML序列,大小分别为825、429和363 bp。这些剪接体的组成中均包含了CAML与其他蛋白相互结合的亲水的N末端,以及CAML发挥调节钙离子内流作用所必需的第2、3跨膜结构域,说明这些剪接体均具有发挥CAML基本功能的可能。结论:成功克隆了CAML基因,并首次证实CAML基因在细胞中存在不同剪接体。

地高辛素标记探针原位杂交技术检测肝硬变组织中TIMPs mRNA

目的金属蛋白酶组织抑制因子(TIMPs)具有抑制金属蛋白酶(MMPs)的作用,为了阐明TIMP-1和TIMP-2在肝硬变患者肝组织中的表达水平及分布状态。我们检测了肝硬变患者肝组织中的TIMP-1和TIMP-2,探讨TIMP-1和TIMP-2在肝硬变发病机制中的作用。方法以TIMP-1和TIMP-2 cDNA探针为试剂。采用原位杂交技术检测40例经肝组织病理学检查证实为结节性肝硬变患者肝组织中(其中男32例.女8例,平均年龄为50岁)TIMP-1和TIMP-2 mRNA的表达。结果 40例肝硬变患者肝组织中TIMP-1利TIMP-2 mRNA表达的阳性率为100％,TIMP-1 mRNA的表达强阳性40例中有32例,占80％,中等阳性6例,占15％.弱阳性2例,占5％;TIMP-2 mRNA的表达强阳性40例中有22例。占55％,中等阳性16例,占40％,弱阳性2例,占5％TIMP-1 mRNA阳性的肝组织中TIMP-2 mRNA亦为阳性,且TIMP-1 mRNA表达强度略高于TIMP-2 mRNA。而正常肝组织中未见阳性表达。TIMP-1利TIMP-2 mRNA表达的阳性信号主要位于肝细胞胞质中,未见细胞核表达。结论肝硬变患者肝组织中的肝细胞中存在TIMP-1和TIMP-2 mRNA的表达,TIMP-1和TIMP-2可能与肝病的进展相关,它通过抑制MMPs的活性,使得ECM降解减少而导致肝纤维化,以至肝硬变。

46例重型肝炎合并口腔真菌感染的护理

目的 探讨重型肝炎合并口腔真菌感染的护理方法。方法 对 4 6例住院重型病毒性肝炎合并口腔真菌感染患者 ,采用抗真菌药物局部涂抹、雾化吸入 ,观察口腔护理效果。结果 4 6例患者中 39例口腔真菌感染痊愈。结论 合理的口腔护理可促进口腔真菌感染愈合 ,有效减少了院内深部真菌感染的发生。

金属蛋白酶组织抑制因子-2在大鼠肝组织中的定位及表达

用人血白蛋白攻击的方法制备实验性免疫性肝纤维化大鼠模型 ,以正常大鼠为对照。采用免疫组化法及原位杂交技术分别检测肝脏中金属蛋白酶组织抑制因子 2 (TIMP 2 )mRNA和相关抗原。了解TIMP 2在正常及实验性免疫性肝纤维化大鼠肝组织中的定位及表达状态。结果为实验组肝脏中TIMP 2mRNA和相关抗原表达在肌成纤维细胞、成纤维细胞 ,以汇管区及纤维间隔中最明显 ,阳性信号位于细胞胞浆中 ,未见细胞核表达。提示在肝纤维化中 ,成纤维细胞及肌成纤维细胞是TIMP 2表达的主要细胞 ,并随着病损肝脏中肝纤维化程度的加重 ,TIMP

TIMP-1和TIMP-2在原发性肝癌生长、浸润及转移中的作用

目的 了解基质金属蛋白酶组织抑制因子 1(tissueinhibitorofmetalloproteinase -1,TIMP 1)和基质金属蛋白酶组织抑制因子 2 (TIMP 2 )mRNA及相关抗原在肝癌组织中的定位和表达状态 ,探讨TIMP l和TIMP 2在肝癌组织生长、浸润及转移中所起的作用。方法 以TIMP l和TIMP 2探针及单克隆抗体 (McAb)为试剂 ,采用原位杂交技术及免疫组织化学法检测原发性肝癌、肝高分化腺癌的肝组织中TIMP l和TIMP 2mRNA及相关抗原的表达 ,并与 10例正常肝组织做对照。结果 2 0例原发性肝癌患者的肝组织中TIMP l和TIMP 2mRNA及相关抗原表达的阳性率为 90 %;9例肝高分化腺癌的腺癌组织中无TIMP 1和TIMP 2mRNA及相关抗原的表达 :10例正常肝组织中TIMP l和TIMP 2mRNA及相关抗原表达均为阴性 ;TIMP l和TIMP 2mRNA及相关抗原阳性信号呈现为棕黄色颗粒状 ,分布在肝细胞浆内 ,未见细胞核着色 ;无论是原发性肝癌癌组织还是癌周组织中 ,TIMP l的表达强于TIMP 2的表达 ,癌周组织中TIMP 1和TIMP 2mRNA和相关抗原的表达与肝组织病理改变相关 ,即肝硬化者表达强 ,慢性肝炎者表达弱 ,正常肝组织无表达。结论 原发性肝癌的癌组织中存在TIMP l和TIMP 2mRNA及相关抗原的表达 ,其表达强度可能与原发性肝癌的分型有关 ,它可能通过抑制MMP的?