上海市猪源大肠杆菌耐药性监测

目的了解上海市猪场大肠杆菌耐药情况及耐药规律。方法按照常规方法分离培养细菌,应用HX-21细菌鉴定/药敏分析仪以及API20E鉴定系统进行了鉴定细菌,采用HX-21细菌鉴定/药敏分析仪测定了大肠杆菌对24种抗菌药耐药情况。结论本地区猪源大肠杆菌耐药性严重,其中对阿米卡星、多黏菌素敏感率高,对氨苄西林、卡那霉素、四环素、甲氧苄啶耐药性较高,耐药谱复杂,多重耐药性、交叉耐药性严重。

1群4型禽腺病毒的分离鉴定及Fiber-2蛋白的免疫效果分析

旨在鉴定河南某蛋鸡场以心包积液、肝肿大出血为特征的病原,并对病原的免疫原性蛋白进行表达和效果分析。本研究采用病毒分离、血清学试验、PCR检测及测序分析、动物回归试验、大肠杆菌表达、蛋白纯化、攻毒保护等方法进行研究。结果显示,所采集样品经卵黄囊途径接种7日龄SPF鸡胚,盲传2代后获得病毒;PCR可扩增出约900 bp的Hexon基因片段,经测序,其Hexon基因与血清C4型毒株的相似性为100%;血清中和试验结果表明分离的禽腺病毒为1群血清4型禽腺病毒,命名为HN-ZK株。该毒株可在鸡胚原代肝细胞上产生CPE,病毒含量可达10^(7.5)TCID50·0.1 mL^-1。动物回归试验表明,该分离毒株可使35日龄SPF鸡100%(10/10)表现出发病症状。以分离株的DNA为模板,利用大肠杆菌原核表达系统,获得相对分子质量约为33 ku的Fiber-2蛋白,离心浓缩、纯化后蛋白含量为300 mg·mL^-1。将表达的Fiber-2蛋白用不同的剂量免疫SPF鸡,结果表明20μg·只^-1的剂量能使鸡完全抵抗强毒株的攻击,说明Fiber-2蛋白具有较好的免疫原性。本研究可为禽心包积水-肝炎综合征的诊断和基因工程亚单位疫苗的研制提供数据参考。

鸭疫里默氏杆菌PCR检测方法的建立

本研究根据鸭疫里默氏杆菌16S rRNA基因的保守序列设计一对特异性引物,建立了鸭疫里默氏杆菌的PCR检测方法。结果表明,此方法具有敏感性高、特异性好等优点,从而为鸭疫里默氏杆菌的诊断提供了有效的工具。

鸡和人志贺菌gyrA、parC基因突变与喹诺酮类耐药的关系

通过药敏实验检测了鸡鲍氏、人鲍氏和人福氏三株志贺菌对12种常用抗生素的耐药情况,发现三者均未产生对喹诺酮类药物的耐药性。用聚合酶链反应(PCR)分别扩增三株志贺菌的DNA旋转酶A亚单位(gyrA)和拓扑异构酶ⅣC亚单位(parC)基因,并对其中的耐喹诺酮类决定区(QRDR)进行了分析。发现鸡和人鲍氏志贺菌QRDR区的序列没有发生任何碱基突变,这与药敏试验结果相吻合。人福氏志贺菌虽然也对喹诺酮类无耐药性,但其gyrA基因存在83位Ser83(TCG)→Leu(TTG)的突变,由于只有83位点一处突变,所以尚未表现出耐药性表征,parC基因中存在58位Ser58(AGC)→Ile(ATC)的突变,该突变点与常见的80、84位氯基酸的改变有所不同,却仍在QRDR区域之中,虽然暂时还无法根据这一结果判断该突变与喹诺酮类耐药性之间的关系,但至少表明该菌株正处在耐药性演变进程之中,其在志贺菌耐药性中的确切作用还有待进一步研究。

猪捷申病毒研究进展

猪捷申病毒(porcine teschovirus,PTV),属于小RNA病毒科捷申病毒属。该病毒可感染家猪和野猪导致猪捷申病,该病已在全球多个国家流行,且常呈现亚临床感染。猪感染PTV强毒后,表现出典型的神经症状,如共济失调,同时伴有腹泻、流产等临床表现。PTV现在我国呈地方性流行趋势,给养猪业带来一定的挑战。本文就目前该病毒的研究进展进行综述。

鸭疫里默氏杆菌分离鉴定及药敏试验

从云南、山东16个鸭场有典型浆膜炎临床症状的病(死)鸭中分离到14株细菌,经形态、培养特性、生化特性、PCR等生物学特性鉴定,上述菌株均为鸭疫里默氏杆菌,型鉴定试验表明其中2株为RA-1型、4株为RA-2型,药敏试验表明山东分离株对头孢氨苄、痢特灵、链霉素、庆大霉素较敏感,云南分离株对氨苄青霉素、痢特灵、头孢氨苄较敏感。动物致病性试验显示RA-1、RA-1型分离菌株均可使健康鸭发病或死亡。

鸭疫里默氏杆菌的分离鉴定及其二价灭活疫苗的研制

从云南昆明、山东青岛死亡率高的鸭场的病死鸭中各分离到一株细菌,分别命名为YB080510株和YB080512株。细菌鉴定和血清定型结果表明:YB080510株、YB080512株分别为血清Ⅰ型和血清Ⅱ型鸭疫里默氏杆菌,为国内目前主要流行型菌株,与其他鸭疫里默氏杆菌流行株的同源性为99.2%～100%;分离菌的致病性试验结果表明:两株鸭疫里默氏杆菌均为强致病菌,活菌量为1×109CFU的YB080510株、2×108CFU的YB080512株均可使1月龄健康樱桃谷鸭全部致死。以此YB080510株、YB080512株鸭疫里默氏杆菌制备二价灭活疫苗,每型菌含量为9×109CFU/mL,将此疫苗用5日龄樱桃谷鸭分别进行安全性和效力试验,结果显示疫苗安全、有效,攻毒保护率可达90%～100%(9/10～10/10)。

鸭源1:A型多杀性巴氏杆菌的分离与鉴定

经形态观察、培养特性、生化特性、PCR鉴定及PCR分型等鉴定,确定2018年从河南省某蛋鸭场分离到的一株疑似多杀性巴氏杆菌菌株为1:A型。采用药敏纸片,对该分离菌株进行药敏试验,发现其对头孢噻肟、头孢曲松钠、左氧氟沙星高度敏感,对强力霉素、环丙沙星、头孢哌酮舒巴坦钠、丁胺卡那中度敏感,对氟苯尼考、林可霉素不敏感。用该菌株的培养物腹腔注射4只体质量为25g左右的昆明小鼠进行毒力试验,结果攻毒菌量为3.7CFU时,能使全部小鼠死亡,证明该菌株具有较强的毒力。本研究对于了解河南省鸭源多杀性巴氏杆菌的血清型及其耐药性和致病性提供了数据支撑。

犬α干扰素的克隆、表达及纯化

根据DDBJ/GenBank基因库中已登录的犬α干扰素序列,设计了含SphⅠ和HindⅢ酶切位点的一对引物,采取聚合酶链式反应(PCR)技术以犬基因组DNA为模板进行了CaIFN-α的成熟肽基因的克隆,扩增产物与克隆载体pGEM-T Easy Vector连接后转入大肠杆菌JM109,经PCR鉴定和EcoRⅠ酶切鉴定,初步证实为CaIFN-α,用SphⅠ和HindⅢ双酶切重组质粒,将目的片段与表达载体pQE30连接,然后转入大肠杆菌JM109,经PCR鉴定、SphⅠ和HindⅢ双酶切鉴定、序列测定证实已经成功克隆了CaIFN-α,构建了重组表达质粒PQE30/CaIFN-α。将重组表达菌液培养至OD600为0.5时加入IPTG诱导表达,经SDS-PAGE分析CaIFN-α在大肠杆菌中得到了表达,表达的目的蛋白以包涵体形式存在,表达量约占细菌总量的20%左右。将诱导表达的菌液经超声裂解、变性、复性、透析后,得较纯的CaIFN-α蛋白。本研究为以后CaIFN-α的活性及临床应用研究奠定了基础。

一例由绿脓杆菌引起的水貂出血性肺炎的诊治

水貂出血性肺炎又称假单胞菌病或绿脓杆菌病，是由假单胞菌科假单胞菌属中的铜绿假单胞菌（又称绿脓杆菌）引起的一种急性传染病。以肺出血、肺水肿、呼吸困难，部分水貂突然死亡，并从口鼻中流出血样泡沫等为特征，是严重威胁养貂业的重要疾病之一。

猪胸膜肺炎放线杆菌LY株的分离、鉴定和定型

2011年4月,从山东省莱阳市某猪场疑似猪传染性胸膜肺炎发病猪肺中分离到致病菌1株(LY株)。经形态、培养特性、生化特性、PCR等鉴定,LY株为猪胸膜肺炎放线杆菌。应用多糖抗原进行血清学定型试验,鉴定结果为APP2型。

我国局部猪胸膜肺炎流行调查和血清型分析

为了解我国猪传染性胸膜肺炎的流行情况及其病原胸膜肺炎放线杆菌（Actinobacillus Pleurnopneumoniae,简称APP）的主要血清型,1990年~2014年我们对我国23省市不同养猪场进行了流行病学调查。调查结果表明,该病在我国23个省市均有发生,先后从山东、深圳、上海、河北、江苏、河南等省、市的临床病例和送检病料中分离到APP病原62株。其中已鉴定、定型的菌株59株,所涉及的型株为1型4株、2型11株、3型3株、5型18株、7型19株、8型1株、未定型3株。根据我们对全国流行病学调查和病原分离鉴定各型分离株的多少及其毒力的强弱比较分析,本病危害我国养猪业发展的主要血清型为7型、5型和1型。

鸡传染性鼻炎双价灭活疫苗的安全性和免疫效力试验

鸡传染性鼻炎（Infection Coryza，IC）是由副鸡嗜血杆菌（Haemophilus paragallinarum，Hpg）引起鸡的一种快速传播的上呼吸道疾病，育成鸡和产蛋鸡均可发病，可造成育成鸡生长停止，淘汰率增加，产蛋鸡产蛋量减少，从而给养鸡业带来重大经济损失。笔者先后从青岛地区及山东、江苏、河北等省市送检的发病鸡中分离到副鸡嗜血杆菌数十株，所有菌株都经过鉴定，部分菌株进行过定型，多数为A型，少数为C型。

鸡新城疫疫苗研究及应用概况

介绍了鸡新城疫病的流行情况及疫苗的应用现状,概述了灭活疫苗、活疫苗及基因工程苗等主要的鸡新城疫疫苗研究及应用现状,旨为鸡新城疫疫苗的研制和应用提供一定的参考依据。

关于猪传染性萎缩性鼻炎的病原分离及鉴定研究

为了更好的对猪传染性萎缩性鼻炎展开针对性的诊断和诊治,我们对本地部分生猪养殖场中的疑似猪传染性萎缩性鼻炎病例进行分离,分离了14株菌体,并对其进行了病原鉴定和药敏试验,结果表明,14株细菌中确定8株为支气管败血波氏杆菌, 6株为产毒性多杀性巴氏杆菌,为此,建议使用二联灭活疫苗预防传染性的猪萎缩性鼻炎。同时通过药敏试验也表明,两种菌均对头孢曲松钠、链霉素敏感,为此,临床可首选该类药物。

鸭疫里默氏杆菌荧光定量PCR检测方法的建立

根据鸭疫里默氏杆菌16SrRNA基因的保守序列设计特异性引物和TaqMan探针,建立了该菌的荧光定量PCR检测方法。利用该方法分别对自然和人工感染病例不同脏器的细菌进行定量检测,并对临床疑似阳性病例进行诊断。试验证明,该方法具有敏感性高、特异性好、稳定性强的特点;在自然感染和人工感染的鸭病例中,脑组织和心脏的细菌含量最高。该检测方法能够很好地应用于鸭疫里默氏杆菌的快速检测。