黄芪多糖对斑点叉尾[鱼回]的药效学及安全性临床评价

为促进黄芪多糖在斑点叉尾[鱼回](Ictalurus punctatus)养殖中的应用,本研究参照农业农村部新渔药临床试验中心关于免疫调节剂临床效果及安全性评价SOP开展了黄芪多糖对斑点叉尾[鱼回]的药效学及安全性临床评价。Ⅱ期临床试验结果显示,饲料中添加黄芪多糖可明显提高斑点叉尾[鱼回]血清中总超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、溶菌酶、酸性磷酸酶、碱性磷酸酶活性及白细胞吞噬活性,并在Ⅲ期临床中发现黄芪多糖不仅可增强斑点叉尾[鱼回]免疫,提高其抗细菌感染的能力,还可促进斑点叉尾[鱼回]生长,效果最优添加量为20 mg/kg鱼体重。安全性临床评价发现每日投喂20 mg/kg鱼体重的黄芪多糖对斑点叉尾[鱼回]无害。上述结果表明,黄芪多糖可作为免疫增强剂应用于斑点叉尾[鱼回]的养殖中,建议饲料中每日添加量为20 mg/kg鱼体重。

甘胆口服液对副溶血性弧菌引起的对虾肝胰腺损伤坏死病防治效果

副溶血弧菌引起的对虾急性肝胰腺坏死病是南美白对虾养殖危害最大的疾病之一,但目前缺乏有效的绿色防控手段。为探究甘胆口服液对南美白对虾急性肝胰腺坏死病的防治作用,在副溶血性弧菌人工感染对虾4 h后,通过投喂不同剂量(0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL/kg饲料)的甘胆口服液进行治疗,连续用药1周后观察对虾肝胰腺病理损伤情况,测定血淋巴中丙氨酸氨基转移酶(ALT)与天门冬氨酸氨基转移酶(AST)含量,统计对虾发病率和感染死亡率。结果表明:甘胆口服液以2.0~5.0 mL/kg饲料的剂量给药7 d,可改善副溶血性弧菌感染引起的对虾肝胰腺细胞受损情况,有效抑制肝胰腺损伤导致的AST、ALT含量的异常升高,并将感染对虾死亡率降低至12%以下。甘胆口服液对副溶血性弧菌引起的对虾急性肝胰腺坏死病具有较好的治疗效果。

香连溶液抑制草鱼细菌性败血症作用研究

为探究香连溶液对草鱼细菌性败血症的抑制效果,使用嗜水气单胞菌对草鱼攻毒,随即按照不同剂量连续给药7 d,通过临床表现、症状评分、病理变化、感染死亡率等指标综合评价药物作用。攻毒后8 d,攻毒对照组草鱼体表症状评分显著高于空白对照组(P<0.05),各给药组症状评分显著低于攻毒对照组(P<0.05),与用药浓度呈反比。攻毒对照组及低剂量组肝脏、肾脏及肠道有不同程度病变,其余组无显著变化。中、高剂量的香连溶液对患病草鱼的治愈率达到80.00%以上,感染死亡率低于1.11%。总之,香连溶液可显著抑制嗜水气单胞菌引起的草鱼细菌性败血症。

高温诱导对尼罗罗非鱼性别分化及生长的影响

采用自雌鱼口腔中取出受精卵人工孵化的方法建立了尼罗罗非鱼家系20个。受精后9d,将各家系鱼苗分成两份,分别在28℃(对照组)和36℃(高温诱导组)下养殖,诱导处理12d后,统计高温诱导期成活率并将实验鱼转入自然水温下培育,养殖60～120d后对各实验组的雄性率及生长情况进行测定。结果表明,高温处理对仔鱼的成活率没有影响,但能显著提高某些家系的雄性率,如F27(诱导组88%,对照组49%)、F37(诱导组90%,对照组53%)和F41(诱导组91%,对照组53%);高温处理后多数家系的雄性率略有升高,但不显著;有两个家系高温诱导组雄性率低于对照组,分别是F8(诱导组43%,对照组46%)和F35(诱导组29%,对照组38%),这显示了尼罗罗非鱼性别分化受遗传和环境因子共同作用。生长情况测定结果表明,高温诱导对发育初期罗非鱼的生长没有显著影响。本研究结果说明,高温处理能显著提高某些家系的雄性率,高温诱导和家系选择有望成为高雄性率尼罗罗非鱼新品种培育的新的技术手段。

鲤鱼(Cyprinuscarpio,Cyprinidae)ants基因及其对鳞片发育的影响

ants(adenine nucleotide translocators),又称为ATP/ADP载体,利用Genefishing差异筛选技术对普通鲤鱼和德国镜鲤的皮肤转录产物进行筛选,得到了其中一个ant基因的部分片段,利用RT-PCR技术对皮肤中的ants基因进行钓取,得到6种不同的CDS序列。利用CLUSTALW对这6条翻译后的序列进行比对,发现这6条序列编码4种不同的氨基酸序列,表明ants基因至少有6种不同的转录产物(isoforms),但是在蛋白质水平上可能存在4种不同的翻译产物。利用NCBI上的blast对氨基酸序列进行同源性检索发现这4个蛋白产物与斑马鱼ant2最为相似,其相似度分别达到97%,97%,96%,98%。对处于不同分类地位的物种的ants基因与鲤鱼的4个ants表达产物进行进化树分析发现,这4个蛋白产物在93/100再现性水平上明显聚类为ant2,说明皮肤中表达的这些ants基因很可能是ant2。原位杂交结果显示,ant2在受精后4.5 h和6 h不表达,从受精后10 h开始在外包处强烈特异表达,在受精后12 h的胚胎中很弱表达,在受精后24 h的体节中特异强烈表达,在受精后48 h胚胎无表达,但是在着生鳞片的部位特异强烈表达,而在皮肤的其他部位则表达较弱或者不表达。以上的结果表明,ant2基因可能是通过不同的转录产物在精细调控鳞片的发育。

鲤鱼(Cyprinuscarpio)外异蛋白A受体Edar基因的克隆及表达定位

外异蛋白A受体(Ectodysplasin-A receptor,Edar)基因最早是在哺乳动物中发现的,其在皮肤附属物的发育中具有重要的生物学功能。利用Genfishing差异筛选技术对建鲤和镜鲤的皮肤转录表达产物进行筛选,得到Edar基因的部分片段。通过克隆镜鲤mRNA全长发现,镜鲤该基因全长CDS为1 389 bp,编码一个含有462个氨基酸的蛋白质,包含一个信号肽位点、肿瘤坏死因子受体结合位点序列、跨膜区和死亡结构域。序列比对结果表明,镜鲤Edar蛋白与斑马鱼相似度最高,达88.31%,而与其亲缘关系较远的爪蟾,鸡,人类,小鼠相似度较低,分别是64.88%,63.79%,64.36%,63.50%。对5'-UTR和3'-UTR区进行分析表明,镜鲤与斑马鱼、青鳉5'-UTR的相似度只有23.78%,24.73%,而与非洲爪蟾、鸡、人和老鼠的相似度更低,仅为11.73%、18%、6.50%、10.04%;3'-UTR与青鳉的相似度为35.49%,与非洲爪蟾、人和小鼠的相似度分别为9.42%、8.05%、9.37%。整体原位杂交结果表明,该基因在建鲤和镜鲤鳞片发生时在鳞片着生的皮肤基质中特异表达,而在非鳞片发生区域表达较弱或者不表达,到所有鳞片发育形成后,该基因的表达消失,表明该基因可能参与鲤鱼鳞片的起始发育而不是后期的鳞片模式维持过程。

鲤鱼Ectodysplasin-A(Eda)基因生物信息学及功能分析

Ectodysplasin-A(Eda)基因在皮肤附属物的发育中具有重要的生物学功能。利用Genfishing差异筛选技术对普通鲤鱼和德国镜鲤的皮肤转录表达产物进行筛选,得到Eda基因的部分片段。然后利用实验室的鲤鱼EST数据库设计包含CDS全长的特异引物。克隆测序后发现,镜鲤Eda基因全长CDS包含1 062个碱基,编码一个含有354个氨基酸的蛋白质,包含一个受体结合位点序列。序列比对结果表明,鲤鱼Eda蛋白与斑马鱼相似度最高,达92.76%,而与其亲缘关系较远的鸡、人类、老鼠相似度较低,分别是46.61%、50.51%、50.76%。同时对RACE得到的5'-UTR区进行分析表明,该调控区与斑马鱼相比变异不大(相似度92.98%),但是与其亲缘关系较远的物种变异较大(与人类的相似度为23.36%,与老鼠的相似度为31.07%)。原位杂交结果表明,该基因在鲤鱼鳞片发生时在鳞片着生的皮肤基质中特异表达,而在非鳞片发生区域表达较弱或者不表达,而在全部鳞片发育形成后,该基因的表达消失,表明该基因可能参与鲤鱼鳞片的起始发育而不是后期的鳞片模式维持过程。

低聚原花青素对肉鸡生长性能、免疫机能及抗氧化性能的影响

【目的】研究低聚原花青素(OPC)对肉鸡生长性能、免疫机能及抗氧化性能的影响.【方法】选取1日龄艾拔益加(AA)肉鸡(公雏)200只随机分为4个组,每组5个重复,每个重复10只鸡.分别饲喂添加0,5,10,15mg/kg OPC的饲粮,进行为期42d的试验.测定了平均日增质量、平均日采食量、料重比等生长性能指标,总抗氧化能力(T-AOC)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(T-SOD)、丙二醛(MDA)等血浆抗氧化指标以及免疫器官指数、单核吞噬细胞活性、血浆溶菌酶等免疫指标.【结果】1)5、10mg/kg OPC可显著提高22~42日龄平均日增质量(ADG)(P<0.05),以10 mg/kg OPC组最高,显著降低平均日采食量(ADFI)及料重比(F/G)(P<0.05),以10mg/kg OPC组最低;5、10 mg/kg OPC均可显著降低1~42日龄ADFI、F/G(P<0.05),以10mg/kg OPC组最低;2)10mg/kg OPC组可显著提高21d血浆总抗氧化能力(T-AOC);10、15mg/kg OPC可显著提高42d谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平、超氧化物歧化酶(T-SOD)水平、T-AOC水平;3)各OPC剂量均可显著提高肉鸡胸腺指数水平(P<0.05),且10mg/kg OPC组优于15mg/kg OPC组.10mg/kg OPC可显著提高脾脏指数水平(P<0.05);4)10、15mg/kg OPC组可显著提高廓清指数水平(P<0.05),且10mg/kg OPC组优于15mg/kg OPC组.10mg/kg OPC组可显著提高吞噬指数水平(P<0.05);5)5、10mg/kg OPC组均可显著提高血浆溶菌酶含量(P<0.05),以10mg/kg OPC组最优.【结论】10mg/kg OPC对肉鸡1~42d的生长性能及免疫机能提升最显著,15mg/kg OPC对肉鸡血浆抗氧化提升最显著.

中草药添加剂对育肥猪生长性能、胴体性状及肉品质的影响

试验旨在探讨由黄芪、金银花、菊芋配制而成的中草药添加剂对育肥猪生长性能、胴体性状及肉品质的影响。选取300头健康、体重相近的育肥猪,分为3个试验组,每4个重复,每个重复25头猪。试验组在基础饲粮中分别添加0、0.20%、0.50%中草药添加剂,试验期为30 d。结果表明:饲粮中添加0.20%或0.50%中草药添加剂后,料重比均显著低于对照组(P<0.05),其中添加0.20%中药组的料重比最低。与对照组相比,饲粮中添加中草药添加剂后,0.20%和0.50%中药组的背膘厚和蒸煮损失均显著低于对照组(P<0.05);添加0.20%中药组的肌肉粗蛋白含量显著增高(P<0.05);同时添加0.50%中药组的肌内脂肪也显著增高(P<0.05)。综上所述,饲粮中添加中草药添加剂可降低育肥猪的料重比,降低背膘厚和蒸煮损失,提高肌肉的粗蛋白和肌内脂肪含量。综合各项指标,饲粮中添加0.20%中草药添加剂的效果最好。

一种复合中草药对草鱼非特异性免疫功能的影响

为研究一种复合中草药对鱼体非特异性免疫功能的影响,本文采用单因子浓度梯度法,在基础饲料中分别添加0.05%、0.10%、0.20%的复合中草药,以空白饲料组为对照,试验组和对照组各设3个平行,每个平行为30尾草鱼。通过测定血液白细胞吞噬活性、血清和组织溶菌酶(Lysozyme,LSZ)活力、超氧化物歧化酶(Superoxide dismatase,SOD),评价草鱼非特异性免疫功能。结果:实验组草鱼白细胞吞噬能力极显著高于对照组(P<0.01),0.10%组白细胞吞噬能力显著高于0.05%组(P<0.05)、与0.20%组无显著差异(P>0.05)。0.05%组、0.10%组和0.20%组的血清LSZ活力分别比对照组提高18.63%、28.60%和21.96%(P<0.01)。0.10%组肝胰脏的LSZ活力极显著高于0.05%组和对照组(P<0.01),0.20%组显著高于对照组(P<0.05)。3个试验组鳃LSZ活力均极显著高于对照组(P<0.01)。复合中草药对血清和肝胰脏的SOD活力无显著影响。但对草鱼鳃SOD活力有显著影响,0.10%组和0.20%组鳃SOD活力显著高于对照组(P<0.05)。结论:复合中草药可通过提高白细胞吞噬能力、提高组织溶菌酶(LSZ)及超氧化物歧化酶(SOD)活性来增强草鱼的非特异性免疫功能,中草药为无抗生态养殖提供了新的思路选择。

一种中药复方制剂在饲料中长期添加对罗氏沼虾生长及免疫功能的影响

饲料中添加2 kg/t的中药复方制剂,开展了84 d饲喂试验,通过测定罗氏沼虾(Macrobrachium rosenbergii)的生长性能及血液和肝胰腺中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、溶菌酶(LZM)、碱性磷酸酶(AKP)和吞噬细胞吞噬等活性评价该中药复方制剂对罗氏沼虾生长及免疫功能的影响。饲喂试验结束后,利用副溶血弧菌进行攻毒,计算保护率,评价该制剂对罗氏沼虾弧菌感染的保护效果。结果显示,饲喂结束后,中药复方制剂组罗氏沼虾体重显著高于空白组(P<0.05)。罗氏沼虾血液和肝胰腺中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、溶菌酶(LZM)、碱性磷酸酶(AKP)和吞噬细胞吞噬等活性也显著提高(P<0.05),且在第7 d或14 d达到峰值。副溶血弧菌攻毒后,中药复方制剂组的7 d累计死亡率为61.1%,基础饲料组的死亡率90.0%,该中药复方制剂对罗氏沼虾的保护率为32.1%。试验表明,饲料中添加2 kg/t中药复方制剂可显著提高罗氏沼虾生长性能及免疫功能,减少副溶血弧菌感染引起的死亡。为获得持久的免疫效果,建议长期添加。

一种复合植物提取物对罗氏沼虾免疫功能及生长性能的影响

试验旨在研究复合植物提取物对罗氏沼虾免疫功能及生长性能的影响。将地势光照相近的6个池塘随机分成2组(对照组、试验组),每组3个重复,试验组在基础饲料中添加0.20%的复合植物提取物,试验期为84 d。试验结果表明:试验组血液和肝胰腺中的LZM、SOD、CAT、AKP活性及血液吞噬率和吞噬指数在各个时间点均显著高于对照组(P<0.05);血液和肝胰腺中的LZM、SOD活性及吞噬率和吞噬指数均在7 d达到峰值,CAT活性在14 d达到峰值;血液中的AKP活性在14 d达到峰值,肝胰腺中AKP活性在28 d达到峰值;试验组注射鳗弧菌的死亡率为56.7%,对照组注射鳗弧菌死亡率为90.0%,复合植物提取物对罗氏沼虾注射鳗弧菌保护率37.04%;试验组罗氏沼虾体重和增重率显著高于对照组(P<0.05)。试验表明,投喂0.02%复合植物提取物7 d或14 d,能够提高罗氏沼虾的免疫功能和生长性能。

天然植物提取物对断奶仔猪生长性能、腹泻率及血清抗氧化指标的影响

试验旨在研究不同的天然植物提取物对断奶仔猪生长性能、腹泻率及血清抗氧化指标的影响。试验选取320头21日龄断奶仔猪,随机分为4个试验组,每组4个重复,每个重复20头仔猪,对照组饲喂基础日粮,复方Ⅰ~Ⅲ组在基础日粮中添加1 kg/t的复方天然植物提取物。试验期为16 d。结果表明:复方Ⅱ组的平均日增重显著高于对照组和复方I组(P<0.05),且复方Ⅱ组的料重比较其他各组分别降低了51%、23%、6.9%(P<0.05),复方Ⅱ组的腹泻率及腹泻评分较对照组显著降低(P<0.05)。此外,复方II组和复方Ⅲ组的猪二胺氧化酶(DAO)活性显著低于对照组和复方I组(P<0.05),复方Ⅱ组血清丙二醛含量较对照组显著降低43%(P<0.05)。断奶仔猪日粮中添加复方Ⅱ可显著改善断奶仔猪的生长性能、降低腹泻率、提高抗氧化能力。综合效果评价,复方Ⅱ的效果优于其他复方。

山花黄芩提取物对肉鸡生长性能、免疫机能及屠宰性能的影响

试验为了研究饲粮中添加山花黄芩提取物水平对肉鸡生长性能、免疫机能、屠宰性能的影响。饲料中山花黄芩提取物添加水平分别为0、250、500、1 000 g/t,共4个剂量组。随机挑选320只健康1日龄艾拔益加(AA)肉雏鸡,并分为4个处理组,每组分别8个重复,每个重复10只鸡,每个重复为1个笼,试验期为42 d。测定生长性能指标、免疫器官指数和屠宰性能。结果显示,与对照组相比,各试验组在1~21日龄阶段的生长性能差异不显著(P>0.05),但平均日增重(ADG)都有一定程度上的提高。与对照组相比,500 g/t添加组可显著提高42日龄平均体重及22~42日龄、1~42日龄的平均日增重(ADG)和平均日采食量(ADFI)(P<0.05),各试验组料重比(F/G)均无显著性差异(P>0.05)。500 g/t添加组可显著提高21、42日龄脾脏指数水平(P<0.05)及42日龄胸腺指数水平(P<0.05);与对照组相比,500 g/t添加组可显著提高42日龄肉鸡胸肌率及腿肌率(P<0.05)。结果表明,饲粮中添加山花黄芩提取物可以使1~42日龄肉鸡获得较好的生长性能、免疫机能及屠宰性能,其中山花黄芩提取物添加量为500 g/t时效果最佳。

中药发酵膏菌种特点的研究及在南美白对虾养殖中的应用效果

试验旨在研究中药发酵膏菌株特点及其在南美白对虾养殖中的应用效果。采用中药发酵膏中乳酸菌CLEM01分别进行的黏附性试验和弧菌体外拮抗试验;同时采用单因子浓度梯度法研究不同浓度中药发酵膏对南美白对虾生长性能和肠道菌群的影响。结果表明:乳酸菌对南美白对虾肠道黏液黏附率高达51.79%,显著高于对照组(P<0.05);乳酸菌对副溶血弧菌和哈维氏弧菌的抑制效果均显著高于空白对照组(P<0.05);0.40%中药发酵膏组的成活率高达90.48%,显著高于0.20%中药发酵膏组(P<0.05),均显著高于对照组(P<0.05);0.40%中药发酵膏组和0.20%中药发酵膏组终重量均显著高于对照组(P<0.05),但两组之间差异不显著(P>0.05)。添加中药发酵膏组的增重率、特定生长率和饲料系数均显著高于对照组(P<0.05),但0.40%中药发酵膏组的增重率、特定生长率和饲料系数均显著高于0.20%中药发酵膏组(P<0.05);添加中药发酵膏组对虾肠道总菌数和乳酸菌数显著高于对照组(P<0.05),弧菌总数显著低于对照组(P<0.05),0.20%中药发酵膏组和0.40%中药发酵膏组之间差异不显著(P>0.05)。在南美白对虾饲料中添加0.20%中药发酵膏和0.40%中药发酵膏,均可以有效促进对虾生长,改善对虾肠道菌群结构,增加有益菌数量,降低有害弧菌数量。

FGF1a(fibroblast growth factor 1a)基因对镜鲤(Mirror carp)鳞被发育的影响

成纤维生长因子FGF1a(fibroblast growth factor 1a)是一类重要的生长因子,在细胞的发育过程中起着重要的作用。用实验室镜鲤EST数据库设计包含该基因CDS全长的特异引物,得到了FGF1a基因的全长CDS。经过克隆测序发现,镜鲤FGF1a基因全长的CDS包含444个碱基,其编码一个含有146个氨基酸的蛋白质,包含一个受体结合位点。与其它物种序列比对结果表明,镜鲤FGF1a蛋白与斑马鱼相似度最高,而与其亲缘关系较远的人类、老鼠、非洲爪蟾蜍及鸡相似度较低。根据所获得的基因序列设计探针,利用原位杂交技术发现FGF1a基因在鱼刚长鳞片的皮肤上表达较高,说明该基因可能参与鳞被发育;而同时在尾鳍、背鳍和腹鳍中也有特异的高表达信号,说明FGF1a可能也参与鳍条的发育过程。

鲤鳞被SLC25A5基因的克隆和表达分析

本研究利用差异表达技术(Genefishing)在德国镜鲤和建鲤两个皮肤中表达差异,分离和克隆了鲤鱼鳞被相关的基因,溶质载体蛋白基因SLC(Solute Carrier Protein)大家族中SLC25基因小家族,通过克隆测序的序列在NCBI中比对结果分析,和SLC25家族中的SLC25A5基因结构非常相似,同源性达到9 9%。