人分泌型白细胞介素2受体α链基因的克隆及其在真核细胞中的表达

删除人白细胞介素－２受体α链ｃＤＮＡ中编码胞质内１３个氨基酸及跨膜区１９个氨基酸残基的ＤＮＡ片段后，接上人工合成的终止寡核苷酸片段，改建后的ｃＤＮＡ与真核表达载体ｐＲｃ／ＣＭＶ重组成质粒ｐＣＭＶ／ｒｓＩＬ２Ｒ。用电打孔及磷酸钙法将此质粒转染ＣＨＯ细胞，经Ｇ４１８筛出表达Ｎｅｏ基因的克隆２０株，通过ｍＲＮＡ狭缝杂交及ＥＬＩＳＡ检测，有５株能稳定表达分泌型α链ｍＲＮＡ及蛋白，其中４株细胞培养上清中的ＩＬ２Ｒα链的含量达１４００Ｕ／ｍｌ以上。

染色质免疫沉淀技术及其在基因表达调控研究中的初步应用

目的验证抑癌基因表达产物p53蛋白在体内是否结合于p21WAF1/CIP1基因的启动子区,并检测p53蛋白对热休克蛋白hsp90β基因启动子区的结合情况。方法采用染色质免疫沉淀(ChIP)及PCR技术检测特异基因调节序列,Western印迹分析p53蛋白。结果在p53抗体免疫沉淀的DNA片段中含有p21WAF1/CIP1和hsp90β基因的启动子区p53蛋白结合序列,免疫沉淀样品中含有p53蛋白。结论p53蛋白在体内结合于p21WAF1/CIP1和hsp90β基因的启动子区,参与两基因的表达调控。

恶性疟原虫红内期cDNA库的组建及克隆的筛选

从体外培养的恶性疟原虫中分离纯化总mRNA,将其逆转录为cDNA,组入表达型载体λgt11,建立了恶性疟原虫中国海南岛分离株FCC1/HN红内期cDNA库。经大肠杆菌表达后用抑制性单克隆抗体M26-32、F6-C2、F6-D3筛选。杭有27个克隆与M26-32作用、34个克隆与M26-32和F6-C2都反应。对筛选结果进行了分析。这些阳性克隆的表达产物有可能作为疟疾疫苗的组成部分。

白细胞介素2受体α亚基参与Jurkat细胞凋亡的调节

T淋巴细胞表面的高亲和力白细胞介素 2受体 (IL 2R)由α ,β及γ三种亚基组成 ,其中只有IL 2Rα亚基具有特异结合IL 2的活性 ,目前对IL 2Rα亚基的确切的功能尚不清楚。我们将IL 2RαcDNA反意表达质粒转染Jurkat细胞后 ,经Western印迹 ECL分析发现 ,细胞内出现了细胞凋亡早期特异的多聚二磷酸腺核糖聚合酶 [Poly(ADP ribose)polymerase ,PARP]的 89kD断裂片段 ,此结果提示 ,IL

人IL-2Rα链基因负调控元件结合蛋白的分离纯化

淋巴细胞表面高亲和力IL-2R的出现受IL－2Ra基因的诱导表达控制，而IL－2Ra链基因的表达受到严格的时空的调控。在IL-2Ra基因上游除存在正调控元件外还存在负调控元件（-391TCATCCCAGG-381，NRE）及其下游不完全反转重复序列（-153CCTGGTTTGA-143NIRS）。本组曾通过紫外交联实验发现Jurkat细胞有一种蛋白质与NIRS和NRE特异结合。本文利用肝素-亲和柱层析及序列特异DNA亲和层析认1010Jurkat细胞中获得了分子量约为75kD的NRE特异结合蛋白。EMSA实验表明，纯化后的蛋白与NRE所形成的结合物能被NIRS及HIVLTR的负调控元件所竞争，提示该NRE结合蛋白不仅可能参与IL-2Ra基因的转录调控，而且可能在HIV基因表达过程中起某种作用。

人IL-2Rα基因在CHO细胞中的稳定整合和表达及其应用

目的 应用本组制备的白细胞介素 2受体 (IL- 2 R) ,建立一种既安全又简便 ,并能定量检测白细胞介素2 (IL- 2 )生物活性的方法。方法 采用 Southern印迹杂交方法 ,检测重组分泌型 IL- 2 Rα亚基 (rs IL- 2 Rα)基因在高效表达的转染细胞基因组中的稳定整合 ;以 Western免疫印迹法测定 rs IL- 2 Rα的相对分子质量 ,建立定量检测人 IL- 2生物活性的受体与抗体夹心酶联免疫吸附测定 (r EL ISA)方法。结果 (1) Southern印迹分析表明 ,rs IL- 2 Rα基因已稳定整合到高表达的转染 CHO细胞基因组中 ;(2 ) rs IL- 2 Rα的相对分子质量为 40 0 0 0左右 ;(3)应用建立的r EL ISA方法测定人 IL- 2标准溶液结果表明 ,IL- 2的标准曲线范围为 31.2 5～ 5 0 0 .0 0 U (r=0 .9995 ) ;预先将山羊抗人 IL- 2 Ig G与 IL- 2保温后 ,所得标准曲线的斜率明显降低 (P<0 .0 5 )。结论 与传统测定 IL- 2的方法相比 ,用rs IL- 2 Rα建立的受体 -抗体夹心 r EL ISA方法不仅具有准确、特异性强及操作简便的特点 ,而且 ,所得结果直接反映了被测样品中具有结合 IL- 2 R活性的 IL-

人热休克因子原核表达及表达产物的研究

利用ＤＮＡ重组技术构建了人ｈｓｐ反式作用因子ＨＳＦ１和ＨＳＦ２的原核表达质粒ｐＥＴ－１１Ｂ／ＨＳＦ１和ｐＥＴ－１１Ｂ／ＨＳＦ２。经ＩＰＴＧ诱导，二者在ＢＬ２１（ＤＥ３）ｐＬｙｓＳ菌株中得到有效表达。利用ｈｓｐ９０β第一内含子ＨＳＥ和合成ＨＳＥ作为探针，对比分析两种表达产物与其特异性顺式作用元件间的结合能力，结果显示，原核表达的ＨＳＦ具有ＨＳＥ结合活性，ＨＳＦ１对ＨＳＥ的亲和力及结合在ＨＳＥ上的分子数明显高于ＨＳＦ２，这种差异可能是两种ＨＳＦ具有不同转录活化功能的分子基础。