脱氢表雄酮对氧化型低密度脂蛋白诱导的平滑肌细胞单核细胞趋化蛋白1表达的影响及其机制

目的观察脱氢表雄酮对氧化型低密度脂蛋白诱导的血管平滑肌细胞分泌单核细胞趋化蛋白1的影响,并探讨其作用机制是否与细胞色素P450芳香酶的催化作用有关。方法使用脂质体转染法将含有细胞色素P450芳香酶基因的质粒和空白对照质粒分别转染至体外培养的血管平滑肌细胞,24h后给予氧化型低密度脂蛋白诱导及脱氢表雄酮刺激,采用逆转录聚合酶链反应、实时荧光定量聚合酶链反应及酶联免疫吸附法检测转染后各组细胞单核细胞趋化蛋白1的基因和蛋白表达水平。结果与氧化型低密度脂蛋白刺激组比较,给予氧化型低密度脂蛋白和脱氢表雄酮后单核细胞趋化蛋白1的分泌明显降低(P<0.05)。转染含有细胞色素P450芳香酶基因的质粒组和空白对照质粒组单核细胞趋化蛋白1的分泌差别不明显(P>0.05)。结论脱氢表雄酮能抑制氧化型低密度脂蛋白诱导的血管平滑肌细胞单核细胞趋化蛋白1的分泌升高,可能是其抗动脉粥样硬化的机制之一。而这一过程可能并不通过转化为雌雄激素而发挥,也许与其本身的生物学活性有关。

宫颈癌前病变和早期浸润性宫颈鳞癌组织中胎盘生长因子的表达及其意义

目的:探讨胎盘生长因子(placental growth factor,PLGF)在宫颈癌前病变和早期浸润性宫颈鳞癌组织中的表达,及其与肿瘤微血管密度(microvessel density,MVD)和微淋巴管密度(lymphatic vessel density,LVD)之间的关系和临床意义。方法:采用免疫组织化学法和RT-PCR法分别检测22例宫颈癌前病变和36例早期浸润性宫颈鳞癌组织中PLGF蛋白和mRNA水平的表达,CD34和D2-40相关免疫组织化学染色法检测MVD和LVD的水平,分析PLGF的表达与MVD和LVD之间的关系及其意义。结果:宫颈癌前病变组织中PLGF蛋白表达阳性率为22.73%(5/22),早期浸润性宫颈鳞癌组织中PLGF蛋白表达阳性率为58.33%(21/36);PLGF蛋白表达水平与临床分期显著相关(P<0.01);PLGF mRNA水平的表达与蛋白一致,且与MVD和LVD水平均呈正相关(P<0.01,P<0.05),尤与MVD的相关性更为密切。结论:PLGF在宫颈癌早期病变组织中的表达水平与临床分期密切相关,且与肿瘤血管新生密切相关,可能成为宫颈癌新辅助化疗的新靶点。

西罗莫司对肝癌HepG2细胞的增殖及mTOR、HIF-1α的抑制作用

目的:观察西罗莫司对体外培养的肝癌HepG2细胞增殖及mTOR、HIF-1α基因的抑制作用,探讨以mTOR为靶点治疗肝癌可能的细胞内信号转导机制.方法:缺氧培养HepG2细胞,外源性给予不同浓度的西罗莫司(0.1-1000nmol/L)刺激细胞24h,MTT法检测不同浓度药物对肝癌细胞增殖的影响.Western blot法检测药物刺激后HepG2细胞内mTOR和HIF-1α蛋白的表达.结果:西罗莫司可显著抑制肝癌细胞HepG2的增殖,其抑制率随药物浓度的增加而上升(均P<0.05).在西罗莫司的干预下,HepG2细胞中mTOR和HIF-1α蛋白的表达水平显著下降,实验组与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05).结论:在缺氧条件下,西罗莫司可通过mTOR信号转导途径下调肝癌HepG2细胞内HIF-1α蛋白表达,诱导细胞凋亡,这可能是西罗莫司发挥抗肿瘤效应的机制之一.

LYVE-1和D2-40在检测早期宫颈鳞状细胞癌和癌前病变微淋巴管中的研究

目的对比分析两种常用的淋巴内皮细胞标记分子LYVE-1和D2-40在检测宫颈癌癌前病变和早期宫颈鳞状细胞癌(简称鳞癌)组织中微淋巴管的异同,结合临床资料分析其与宫颈鳞癌的临床分期,淋巴转移和病理特点之间的关系。方法采用SP法检测抗人淋巴管内皮透明质酸受体-1(lymphatic vessel endothelial HAreceptor-1,LYVE-1)多克隆抗体和D2-40单克隆抗体免疫组织化学染色分别检测22例宫颈癌癌前病变和36例早期宫颈鳞癌组织中的淋巴管密度(lympatic vessel density,LVD),图像分析系统统计LVD的水平。结果1.两种标记分子检测均发现在宫颈癌前病变和早期鳞癌中LVD随着疾病的进展而显著增加(P<0.001),同时均发现LVD与盆腔淋巴结状态密切相关。2.对比两种分子染色效果,两种标记分子各有优劣,联合起来使用更为可靠。结论LYVE-1和D2-40结合使用能更准确反应宫颈淋巴管的情况,宫颈癌前病变和早期宫颈癌组织中高淋巴管分布与淋巴转移和肿瘤分期有关。

脱氢表雄酮对高脂诱导的兔主动脉及人脐静脉内皮细胞VCAM-1表达的影响

目的探讨脱氢表雄酮(dehydroepiandrosterone,DHEA)对高脂诱导的血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)表达的影响,以及全反式维甲酸在这一过程中的作用。方法细胞实验:将培养的人脐静脉内皮细胞(human umbilical ve-nous endothelial cells,HUVEC)分为6组:1.正常对照组;2.ox-LDL组;3.ox-LDL+DHEA(低浓度)组;4.ox-LDL+DHEA(高浓度)组;5.ox-LDL+DHEA+全反式维甲酸组;6.DHEA组。各组均用相应药物作用24h,采用逆转录聚合酶链反应和ELISA法检测各组细胞VCAM-1 mRNA及蛋白的表达情况。动物实验:将大耳白兔分为5组:1.正常对照组;2.高脂组;3.高脂+DHEA组;4.高脂+DHEA+全反式维甲酸组;5.单DHEA组。各组白兔均用相应饲料喂饲2个月后,处死动物。采用逆转录聚合酶链反应和免疫组织化学等方法检测各组白兔主动脉VCAM-1 mRNA及蛋白的表达情况。结果细胞实验:①ox-LDL组VCAM-1的表达明显高于正常对照组(P<0.01)。②与ox-LDL组相比ox-LDL+DHEA组VCAM-1的表达明显降低(P<0.01),并呈现浓度依赖性的特点(P<0.05)。动物实验:①高脂组主动脉VCAM-1的表达明显高于正常对照组(P<0.05)。②与高脂组相比高脂+DHEA组VCAM-1的表达明显降低(P<0.05)。结论DHEA能够抑制高脂诱导的VCAM-1的表达。这可能是其抗动脉粥样硬化的机制之一。而全反式维甲酸对DHEA的这一作用并无明显增强作用。

宫颈癌癌前病变及早期癌组织中微淋巴系统的定量观察

目的:探讨宫颈癌前病变和宫颈癌组织中微淋巴管与宫颈癌发生、发展及转移侵袭的关系。方法:部分宫颈组织流式细胞仪检测LYVE-1阳性细胞和Prox-1阳性细胞。46例宫颈组织采用LYVE-1和Prox-1相关抗原免疫组化染色,统计微淋巴管密度及其面积百分比,结合临床资料进行分析。结果:(1)流式细胞检测宫颈组织中存在LY-VE-1(+)和Prox-1(+)细胞;(2)癌前病变LMVD(16.13±10.96)条/4HP,LVA(2.00±1.51)%与Ⅰ期宫颈癌LMVD(24.4±11.39)条/4HP,LVA(2.10±1.61)%相比无统计学差异(P>0.05),与Ⅱ期宫颈癌(28.58±12.29)条/4HP(P<0.01),LVA(3.12±1.77)%相比有显著差异(P<0.01);(3)有淋巴转移者LMVD为(29±11.42)条/4HP,LVA为(3.30±1.76)%相对无转移者(20.23±11.06)条/4HP(2.07±1.14)%均有显著差异(P<0.01);(4)细胞HG1级者LMVD(17.19±9.08)条/4HP,LVA(2.20±1.53)%相对HG3(37.43±8.54)条/4HPLVA(2.85±2.23)%有显著差异(P<0.05);(5)LMVD与LVA与病理类型和月经状态无明显相关。结论:宫颈癌前病变和早期癌组织中高淋巴管分布与淋巴转移,肿瘤病理分期,肿瘤细胞分化程度有关。

Claudin-7和β-catenin在正常、增生和恶性子宫内膜组织中的表达和意义

目的恶性肿瘤转移过程与细胞间粘附作用的丧失密切相关。本研究旨在探讨细胞间粘附分子claudin-7和β-catenin在正常、增生和恶性子宫内膜组织中的表达及其在子宫内膜癌中的临床病理意义。方法应用免疫组化检测30例正常增生期子宫内膜、27例非典型增生子宫内膜和43例子宫内膜癌组织中claudin-7和β-catenin的表达情况,统计分析它们与子宫内膜癌病理分级、临床分期、浸润深度及淋巴结转移等指标之间的关系,并对二者表达之间的关系进行探讨。结果在正常增生期子宫内膜、非典型增生子宫内膜和子宫内膜癌中,claudin-7的表达依次减低,阳性率分别为96.7%,66.7%和39.5%,三组之间具有显著差异(P<0.05);β-catenin在非典型增生子宫内膜和子宫内膜癌组织中的异位表达率分别为40.7%和74.4%,均显著高于正常增生期子宫内膜(3.3%)(P<0.01),子宫内膜癌组织中β-catenin的异位表达率显著高于非典型增生子宫内膜(P<0.01)。在子宫内膜癌中,claudin-7的表达与临床分期、浸润深度和淋巴结转移有关(P<0.01);β-catenin的异位表达与病理分级、临床分期、浸润深度和淋巴结转移有关(P<0.01);Claudin-7的表达和β-catenin的异位表达呈显著负相关(r=-0.813,P<0.01)。结论Claudin-7和β-catenin的异常表达与子宫内膜癌的发生发展有关,并且在此过程中claudin-7逐渐缺失以及β-catenin的异位表达可能对肿瘤的侵袭和转移产生一定作用。

肝胆胰疾病MDT单中心开展七年经验

目的探讨肝胆胰疾病多学科团队(multi-disciplinary team, MDT)单中心开展的7年总体情况和效果,为国内同行提供参考。方法收集华中科技大学同济医学院附属同济医院肝胆胰疾病MDT病例的基本信息。对MDT工作开展的总体情况,包括病人的地域分布、疾病归类、专家到场情况、讨论结果以及落实情况等进行统计分析。结果成功开展188期,讨论病例数共689例次,按病种分类,肝脏原发疾病占31.2%,肝转移瘤占27.6%,胆道疾病占19.2%,胰腺疾病占16.3%,腹膜后肿瘤占5.8%;按疾病的性质分类,良性疾病占19.0%,恶性肿瘤占81.0%。专家到场参加MDT讨论的平均出场率为92.3%,首席专家及执行组长出场率为83.2%。单例讨论时间由最初的(26.4±11.7) min降至目前的(12.2±4.5) min。讨论结果的落实率为76.5%,反馈率为35.7%。结论稳定的组织框架和长效工作机制是保证MDT高效持续开展的重点。MDT开展过程中,讨论结果的落实以及病人持续性的反馈是工作的难点。

脱氢表雄酮通过抑制血管细胞粘附分子1的表达发挥抗动脉粥样硬化作用

目的研究脱氢表雄酮能否通过抑制血管细胞粘附分子1的表达发挥抗动脉粥样硬化作用以及维甲酸受体激动剂对这一作用有无影响。方法高脂饮食构建兔动脉粥样硬化模型并加脱氢表雄酮干预,10周后检测各组兔血清脂质水平及主动脉斑块情况。采用免疫组织化学及逆转录聚合酶链反应方法观察脱氢表雄酮对高脂喂饲兔主动脉壁血管细胞粘附分子1表达的影响。体外培养THP-1单核细胞,采用免疫细胞化学及逆转录聚合酶链反应方法观察不同浓度脱氢表雄酮对氧化型低密度脂蛋白诱导的THP-1细胞表达血管细胞粘附分子1的影响。结果脱氢表雄酮干预的高脂喂饲兔主动脉内膜厚度及粥样斑块面积相对动脉粥样硬化模型组兔分别降低59%和48%;同时兔主动脉血管细胞粘附分子1蛋白的表达在脱氢表雄酮干预后(0.1920±0.0034)较高脂喂饲兔(0.3846±0.0198)显著减弱,血管细胞粘附分子1 mRNA的表达(0.6856±0.0286)与高脂喂饲兔(1.0893±0.1089)相比也明显减少。体外培养的THP-1细胞中,加入不同浓度的脱氢表雄酮均可降低氧化型低密度脂蛋白诱导细胞的血管细胞粘附分子1表达,在脱氢表雄酮浓度为5μmol/L时THP-1细胞中血管细胞粘附分子1 mRNA的表达(0.2988±0.0312)较氧化型低密度脂蛋白诱导组(0.6236±0.0237)下降明显。加入全反式维甲酸对脱氢表雄酮的作用没有显著影响(P>0.05)。结论脱氢表雄酮能够抑制高脂喂饲兔主动脉壁及氧化型低密度脂蛋白诱导的THP-1细胞内血管细胞粘附分子1的表达,这可能是其发挥抗动脉粥样硬化作用的机制之一,而补充维甲酸受体激动剂对这一过程中血管细胞粘附分子1的表达没有明显影响。

36例Gilbert综合征临床特征分析

目的通过对Gilbert综合征临床病例进行回顾性分析,以提高对该病的诊疗水平。方法回顾性分析华中科技大学同济医学院附属同济医院Gilbert综合征患者的临床资料,包括辅助检查、肝穿病理检查、基因检测结果。结果男性患者明显多于女性(86%vs 14%),患者行饥饿试验后总胆红素(TBIL)、间接胆红素(IBIL)明显升高[TBIL:(39.77±17.88)μmol/L vs(88.97±36.14)μmol/L,P<0.001;IBIL:(30.32±17.47)μmol/L vs(80.61±33.76)μmol/L,P<0.001],行鲁米那诊断性治疗试验后TBIL、IBIL明显降低[TBIL:(107.81±28.24)μmol/L vs(36.67±13.47)μmol/L,P<0.001;IBIL:(99.44±27.67)μmol/L vs(28.20±13.89)μmol/L,P<0.001],基因测序结果为UGT1A1基因启动子碱基序列插入突变和UGT1A1基因第1号外显子突变,患者肝穿刺病理检查多正常或呈慢性炎症改变。结论 Gilbert综合征以慢性间断性IBIL升高为主要特征,进行鲁米那试验、饥饿试验、病理检查可协助诊断,行基因测序可确诊,大部分患者无需特殊治疗,预后良好。

苦参素对人肺癌A549细胞增殖及caspase3/7蛋白活性的影响

目的研究不同浓度的苦参素对人肺癌A549细胞增殖及凋亡执行分子caspase3/7蛋白活性的影响。方法体外复苏与培养人肺癌A549细胞,用不同浓度(0、0.5、1、2g/L)的苦参素处理A549细胞24、48、72h,用噻唑蓝(MTT)比色法检测苦参素对A549细胞增殖的抑制作用,比色法检测培养液中caspase3/7活性。结果苦参素对A549细胞的增殖抑制率呈时间、剂量依赖性;随苦参素浓度的增高及时间的延长,caspase3/7蛋白活性增强(P<0.05)。结论苦参素对人肺癌A549细胞的增殖有明显抑制作用,可能与激活caspase3/7活性,促进细胞凋亡有关。

银杏叶提取物对大鼠肺成纤维细胞表达CTGF和α-SMA的影响

目的观察银杏叶提取物(GBE)对大鼠肺成纤维细胞表达CTGF和α-SMA的影响。方法大鼠气管内一次性滴注博来霉素制备肺纤维化模型,原代培养大鼠肺成纤维细胞,分为4组:对照组、GBE 25,50,100 mg/L组,共培养24 h,采用免疫细胞化学法和流式细胞技术检测GBE对各组细胞表达CTGF和α-SMA的影响。结果与对照组比较,50,100 mg/L组细胞表达CTGF和α-SMA依次降低,各组间比较有统计学意义(P<0.05)。结论银杏叶提取物能部分抑制大鼠肺成纤维细胞的表型转化。

脱氢表雄酮及其硫酸盐的生理及与动脉粥样硬化的关系

脱氢表雄酮（dehydroepiandrosterone，DHEA）及其硫酸盐（dehydroepiandrosterone sulfate，DHEAS）是人类肾上腺分泌的最主要的类固醇激素，其在血浆中的含量也最高。DHEA在胎儿时期受胎盘促肾上腺皮质激素释放激素的影响，产生大量的DHEA，出生后迅速下降，出生后5年内水平很低，然后开始增加，到青春期到达高峰。之后随着年龄的增长明显下降。到90岁下降接近90％。因此它被称为“青春激素”。在成年人中，血浆DHEAS的水平是雄激素的100～500倍，是雌激素的1000～10000倍。

脱氢表雄酮对高脂喂养兔动脉粥样硬化斑块形成的抑制作用

观察脱氢表雄酮（DHEA）对动脉粥样硬化（AS）斑块形成的作用，探讨DHEA是否通过抑制血管细胞黏附分子1（VCAM-1）、单核细胞趋化因子1（MCP-1）表达发挥其抗AS作用以及全反式维甲酸对这一过程有无促进作用。

以颈淋巴结肿大为首发表现的IgG4相关性疾病1例及文献复习

IgG4相关性疾病(IgG4 related disease, IgG4-RD)是一组由IgG4+淋巴细胞介导的多器官全身系统性慢性自身免疫疾病。关于头颈部IgG4相关性淋巴结病国内外鲜有文献报道[1],现报道1例以颈淋巴结肿大为首发表现、以局灶进行性生发中心转化为病理特征的IgG4-RD,并进行文献复习。1 病例报告患者,男,58岁,因"发现右侧颈部包块半年余"入院。患者半年前无意中发现右侧颈部肿块,并逐渐增大。

LIPA基因突变致迟发型胆固醇酯贮积病1例

7岁1月龄患儿因“发现肝功能异常4年”就诊。体格检查发现肝脾肿大,组织病理学表现为肝脂肪变性和肝纤维化。基因检测提示LIPA基因存在复合杂合突变:c.860G>A(p.G287E)和c.796G>T(p.G266*),分别来源于父亲和母亲,进一步完善溶酶体酸性脂肪酶活性测定提示明显降低,诊断为LIPA基因突变导致的迟发型胆固醇酯贮积病。患儿以护肝降酶对症支持治疗为主,随访无肝衰竭的表现。