水稻矮缩病毒非结构蛋白Pns11的核酸结合活性分析

水稻矮缩病毒的非结构蛋白Pns11是一个序列非特异性的核酸结合蛋白 ,其N端有类似锌指蛋白的结构 ,C端富含碱性氨基酸。为了研究Pns11的核酸结合活性 ,构建了两个位于可能的锌指结构内的点突变以及四个分别删除部分碱性区氨基酸片段的缺失突变。经测序验证后分别克隆到大肠杆菌表达载体 pBV2 2 1中 ,温度诱导表达。用提取包涵体的方法初步纯化突变体蛋白 ,Western印迹检测这些突变体和Pns11的抗体均有特异反应。以Southwestern和Northwestern印迹的方法证明六个突变体都保持了核酸结合活性。结果表明N端的类似锌指蛋白的结构不是结合核酸的活性位点 ,部分缺失C端的碱性氨基酸也不影响其结合。

水稻矮缩病毒基因组分析与部分基因片段的表达及功能研究

根据本实验室对水稻矮缩病毒（ＲｉｃｅＤｗａｒｆＶｉｒｕｓ，ＲＤＶ）中国福建分离株基因组全序列的测定，分析了其编码蛋白的功能，并将ＲＤＶＳ６，Ｓ９，Ｓ１０，Ｓ１１编码区ｃＤＮＡ分别克隆到表达载体ｐＴｒｃＨｉｓＡ，ｐＢＶ２２１，ｐＴｒｃＨｉｓＢ和ｐＢＶ２２１中，构建成表达质粒ｐＴＨ－Ｓ６，ｐＢＶＰ９，ｐＴＨ－Ｓ１０，ｐＢ－ＶＰ１１。分别用ＩＰＴＧ或温度诱导大肠杆菌ＤＨ５α，经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ及相应抗体的Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｉｎｇ检测证明Ｓ６，Ｓ９，Ｓ１０，Ｓ１１编码蛋白在大肠杆菌中获得成功表达。另外，还将ＲＤＶ外层外壳蛋白基因Ｓ８、微核心蛋白基因Ｓ７及编码非结构蛋白基因Ｓ９通过基因枪导入到水稻植株中，抗病性正在研究之中。