蜜环菌菌丝体液体培养条件的优化

目的:对蜜环菌的液体培养条件进行优化,确定蜜环菌菌丝体的适宜培养条件。方法:通过测定菌丝体生物量的方法,利用液体摇瓶培养方式,筛选适宜的碳源、氮源、无机盐和生长因子,用统计学方法确定液体发酵培养基中碳源、氮源、无机盐和生长因子的最适浓度,最终确定蜜环菌的液体培养基配方。结果:碳源的最适种类为糊精,氮源最适种类为豆饼粉提取液,玉米浆、硫胺素都有促生长作用,乙醇作为小分子碳源对蜜环菌菌体生长有显著促进作用,培养基中添加硫酸铵和硝酸钠对菌体生长有抑制作用,添加磷酸二氢钾促进菌体生长。结论:通过对液体发酵培养条件优化,蜜环菌液体培养的培养基配方如下:25%的豆饼粉提取液,2%的玉米浆,2.5%的糊精,0.06%的硫胺素,1.0%的乙醇,0.3%的磷酸二氢钾,pH值6.0。以此培养基培养蜜环菌,最终菌丝体收率可达到1.9 g/100m l。

蛹虫草对锌的耐性与富集特征

在培养基内添加不同量的锌,研究其对蛹虫草子实体的形成、子实体和菌丝体生物量、子实体多糖含量和葡萄糖含量的影响,以及蛹虫草子实体和菌丝体对锌的富集能力。结果表明锌对上述各项都有影响。液体培养条件下,锌浓度在453906mg/L范围内可以促进菌丝体生长,锌浓度超过4077mg/L时,菌丝生长受到抑制。培养基锌的浓度在4077mg/L以下时,蛹虫草菌丝体锌的富集量随着液体培养基锌浓度的提高而提高。固体培养条件下,锌含量在226453mg/kg范围内可以促进蛹虫草子实体生长,并且在此含量范围内,蛹虫草子实体中葡萄糖含量较高。培养基锌含量在680906mg/kg时,子实体多糖含量较高。培养基锌含量在2038mg/kg以下时,蛹虫草子实体中锌的富集量随着培养基锌含量的提高而提高,在培养基锌含量为2038mg/kg时,子实体中锌的含量达到28570mg/kg(干重)。

不同酵母菌对白兰地挥发性成分的影响

研究不同酵母菌株对白兰地挥发性成分形成的影响,用3种商品化的葡萄酒酵母发酵白玉霓葡萄汁,用气质联用方法测定了葡萄汁发酵前后以及葡萄酒蒸馏前后成分的差异,检测到35种挥发性成分中主要的成分是5种醇类、5种酯类和5种酸类。高级醇中异戊醇的产生量较高,甲醇生成量相近,但产酒精的能力不同,酯类成分的种类和数量差别较大。不同酵母菌种类会影响白兰地的挥发性风味成分。

蜜环菌固体培养特性

目的 研究蜜环菌的固体培养特性。方法利用半固体琼脂培养基对蜜环菌进行暗培养，观测不同培养基、不同碳源、不同氮源、不同温度对蜜环菌生长和形态的影响。测定蜜环菌不同发育阶段菌体中多糖、还原糖、葡萄糖和甘露醇的含量变化。结果蜜环菌在不同培养基上的生长量差别较大，形态也有差别。蜜环菌对糖的利用明显优于相应的糖醇，对小分子的乙醇和甘油都能够利用，对于淀粉则利用较慢。蜜环菌对有机氮源和无机氮源都能很好利用。VitB1对蜜环菌生长没有明显促进作用。蜜环菌在麦芽汁培养基上30℃培养的生长周期比25℃条件下缩短7d左右。蜜环菌在对数生长期和稳定生长期多糖含量分别为9．29％和4．70％，甘露醇含量分别为10．08％和10．58％，生长期中葡萄糖和总还原糖的含量则一直很低。结论碳源因素对蜜环菌生长的影响大于氮源因素。蜜环菌适宜生长温度为20-30℃。甘露醇是蜜环菌体内积累较多的小分子糖类成分。

猪苓菌丝固体培养特性研究

利用固体琼脂培养基对猪苓暗培养,观测不同培养基、不同碳源、不同氮源、不同温度对猪苓生长和菌丝形态的影响,并测定猪苓在两种不同培养基上菌丝产生猪苓酮类成分的差异。结果表明:1.猪苓菌的营养需求比较简单,在只有碳源和氮源的简单培养基上均能生长;2.麦芽汁培养基、GPY培养基和GPC培养基比较适合于猪苓菌固体培养;3.玉米浆、酵母膏、奶粉、硫胺素、伴生菌提取物、蜜环菌提取物、活性白土、硅藻土、高岭土等对猪苓生长都显示出促进作用;4.固体培养猪苓菌丝能分泌黑色素;5.麦芽汁培养以及以甘油、甘露醇为碳源的培养基,都可以诱导猪苓菌丝形成菌核;6.麦芽汁培养基和甘油培养基上培养获得的菌丝体中含有猪苓酮类成分。

蜜环菌子实体的诱导和发生条件

研究蜜环菌子实体在人工诱导下的发生规律,主要包括子实体发生与培养基种类、培养基量、培养时间等的关系.麦芽汁培养基是适合蜜环菌子实体发生的培养基,在该培养基上蜜环菌子实体发生率可以达到100%,子实体最短可以在45天发生.子实体发生与培养基瓶装量有关,每瓶中培养基总固形物（琼脂除外）达到6.75g才足以发生子实体.子实体发生时间与25℃的培养时间有关系,培养时间不足使子实体发生时间延迟.菌体总生物量对培养基中总营养成分的转化率可以达到65.90%,子实体生物量对培养基中总营养成分的转化率为1.52%～9.11%.

蜜环菌不同特化菌体的HPLC-DAD图谱比较

采用麦芽汁液体培养基培养蜜环菌获得菌丝体,采用麦芽汁半固体培养基培养蜜环菌获得蜜环菌菌索、皮壳状菌丝和子实体。以高效液相色谱-二极管阵列检测法(High Performance Liquid Chromatography-Diode Array detector,HPLC-DAD)比较四种菌体的甲醇提取物的成分差异。液体培养的蜜环菌菌丝体与固体培养的蜜环菌菌索、皮壳状菌丝和子实体的蜜环菌素类成分有明显差别。图谱分析表明,菌索与皮壳状菌丝的成分接近,与子实体和液体培养菌丝体之间有较大差别。

短小芽孢杆菌固态发酵生产木聚糖酶的培养条件优化

采用单因素试验和正交试验的方法研究了短小芽孢杆菌固态发酵生产木聚糖酶的培养条件,确定了利用麸皮作为在主要基质进行固态发酵生产木聚糖酶的适宜条件:pH 9、温度35℃、料液比1∶2、接种量10%。在500mL三角瓶中固态培养72h左右,木聚糖酶的活力可达4915U/g干曲。

两种大型真菌菌丝体对重金属的耐受和富集特性

用平板培养法检测大型真菌秀珍菇和猪肚菇菌丝体对重金属铬、铅和锰的耐受及富集特性。分别测定了3种重金属不同浓度处理下秀珍菇和猪肚菇的菌落直径、菌丝体干重和菌丝体中的重金属含量。结果表明:秀珍菇和猪肚菇菌丝体对Cr的耐受特性和耐受能力相当,二者的菌落直径和菌丝体干重均随Cr处理浓度的增加先升高后降低,生长抑制率为50%的Cr浓度都约为200 mg/L,对铬的最大耐受浓度都为500 mg/L。秀珍菇菌丝体对Pb敏感,100 mg/L的Pb即可极显著的抑制秀珍菇菌丝的生长,而猪肚菇则直到500 mg/L的Pb,菌丝体的生长都未受显著影响;二者生长抑制率为50%的Pb浓度分别为100 mg/L和700 mg/L,最大耐受浓度分别为1000 mg/L和2000 mg/L;因此,猪肚菇对Pb的耐受能力比秀珍菇强。秀珍菇不耐锰,而猪肚菇对锰表现出相对较高的耐受能力,生长抑制率为50%的Mn浓度约为1000 mg/L,最大耐受能力为6000 mg/L。秀珍菇菌丝体对Cr和Pb、猪肚菇菌丝体对Cr和Mn均没有达到超富集。但猪肚菇菌丝体中Pb的含量可达1125.56 mg/kg(干重),达到超富集水平,暗示猪肚菇可能是铅超富集大型真菌。

两种大型真菌子实体对Cd^(2+)的生物吸附特性

对两种多孔菌科大型真菌槐栓菌(Trametes robiniophila)和木蹄层孔菌(Fomes fomentarius)子实体生物吸附Cd2+的影响因素(包括吸附剂用量、初始pH、吸附时间、初始Cd2+浓度)和吸附特性进行分析。结果表明,槐栓菌和木蹄层孔菌对低浓度的Cd2+(10 mg/L)吸附的最适pH为6;Cd2+的去除率随吸附剂用量和吸附时间的增加而增大,槐栓菌和木蹄层孔菌均在吸附剂用量为2g/L时达到吸附平衡,槐栓菌在吸附时间为30 min时达到吸附平衡,而木蹄层孔菌在吸附时间为60 min时达到吸附平衡;槐栓菌和木蹄层孔菌对10 mg/L Cd2+的最大去除率分别为98%和94%。Langmuir等温吸附平衡模型比Freundlich等温吸附平衡模型能更好的拟合两种大型真菌对Cd2+的吸附过程;槐栓菌和木蹄层孔菌对10 mg/L Cd2+的最大吸附量分别为17.40mg/g和8.91 mg/g。对实验数据进行动力学模型拟合可知,两种大型真菌对Cd2+的生物吸附过程均符合准二阶动力学模型。槐栓菌和木蹄层孔菌生物吸附低浓度Cd2+的化学反应机理可能为离子交换。

分子对接和荧光光谱法研究麦角甾醇与牛血清白蛋白的相互作用

用分子荧光光谱实验法和分子对接理论研究麦角甾醇与牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA)的相互作用。荧光光谱实验结果表明:麦角甾醇能猝灭BSA的内源性荧光,其猝灭类型为静态猝灭;通过考察猝灭过程中热力学函数的变化初步推断麦角甾醇与BSA的结合是自发的熵增过程,驱动力主要为疏水相互作用。运用分子对接技术研究了麦角甾醇与BSA的相互作用,结果表明:麦角甾醇与BSA相结合,主要的作用力类型为疏水相互作用;并获得了麦角甾醇在BSA中的作用位点,麦角甾醇处在一个疏水性的结合口袋中,结合稳定性强。荧光光谱的实验结果与分子对接的理论结果总体上一致,说明结合过程是一个自发的过程,BSA可以携带和运输麦角甾醇,同时从分子对接中获得了麦角甾醇在BSA中详细的结合位点和结合模式。

樱桃果酒发酵工艺研究

研究了以樱桃为主要原料,采用控温发酵技术酿制樱桃果酒的工艺流程,通过对比试验确定最佳工艺参数为:果胶酶用量100mg/L,SO_2添加量为50mg/L～100mg/L,发酵温度26℃,发酵前果汁调糖至19%,酵母接种量为5%。

白葡萄酒废酵母蛋白及多糖的提取工艺研究

本实验主要研究了从白葡萄酒废酵母中提取蛋白和多糖的方法。结果表明:经处理后的酵母悬浮液在超声波功率600W,作用时间4s,间歇时间2s,作用90次的条件下,促溶效果最好。经超声波处理后,再添加0.6%(W/V)的木瓜蛋白酶,在55℃,pH5.5下,反应时间为30h,提取液中蛋白含量达到9.84g/L。提取蛋白后的残渣,用碱法提取多糖,含量达58.69%。

碳源对γ-聚谷氨酸发酵的影响

以γ-聚谷氨酸生产菌yt102为供试菌株,研究了碳源对γ-聚谷氨酸发酵的影响。首先通过摇瓶实验确定发酵的最佳碳源为葡萄糖和柠檬酸,二者按一定的比例混合更有利于聚谷氨酸的产生,进一步利用10L发酵罐补料分批发酵确定碳源的最佳用量为40g/L,继续优化培养条件,确定采用溶氧控制的脉冲补料方式可有效延续γ-聚谷氨酸的合成。在最优发酵条件下,通过10L发酵罐补料分批发酵50h,γ-聚谷氨酸产量可达34.5g/L。

中国金顶侧耳菌株遗传多态性的ISSR分析

金顶侧耳是重要的食药用真菌。本实验收集全国各地18种金顶侧耳菌株,通过ISSR分子标记技术分析金顶侧耳菌株种内遗传多态性,11种引物扩增出102个条带,其中78个条带具有多态性,多态率为76.4%。结果表明,金顶侧耳菌株内具有丰富的遗传多样性,遗传相似系数在0.50～0.96。采用平均分类法UPGMA分析表明,在遗传相似系数为0.62时,18种菌株分为两大类。当遗传相似系数增大到0.75时,它们分为7类。16号菌株具有独立的遗传体系。

真菌对重金属生物吸附机理的研究进展

对真菌生物吸附重金属的吸附机理进行了综述。从是否消耗能量和吸附作用发生的位置2方面对吸附机理做出简单分类,依据吸附作用发生在吸附剂细胞的不同位置,分别从细胞表面、细胞外和细胞内3个方面对吸附机理展开探讨。同时指出了真菌吸附重金属机理研究中存在的问题,并对今后的研究方向提出展望。

羊肚菌的研究进展

综述了羊肚菌种类、分布、生态环境、形态特征、人工栽培技术、液体培养、营养成分、食用药用价值以及开发利用等方面的研究进展。

gacS基因插入失活对绿针假单胞菌G-05的两种胞外次生代谢物合成的影响

一株来自大棚温室甜椒根际的绿针假单胞菌Pseudomonas chlororaphis G-05,可分泌抗生物质吩嗪-1-羧酸,并具有抑制辣椒疫霉的生物防治功效。【目的】为了系统研究该菌株的生物防治功能及抗生物质合成与分泌机制。【方法】首先通过生化法和16S rDNA同源比对法对该菌株进行系统分类的初步鉴定,再根据基因的同源性从G-05基因组DNA中克隆长1.4 kb的gacS基因的部分保守区段,采用抗庆大霉素基因(gentamycin resistance cassette,aacC1)插入失活的策略构建了该基因突变株G-05S。【结果】在King's B(KMB)或PPM培养基中,突变株G-05S合成吩嗪-1-羧酸的能力受到明显抑制。然而,突变株G-05S分泌的吲哚乙酸与野生株相比无显著差异。互补实验表明,gacS基因的表达可以使突变株G-05S的吩嗪-1-羧酸的合成恢复到野生株水平。【结论】由此推测,GacS(Global activator sensor)对不同次生代谢物的调控具有特异性。

九州虫草菌丝体对Mn的耐性及富集

重金属耐性真菌的研究是生物修复的重要研究内容。研究了九州虫草(Cordyceps kyusyuensis)对于Mn的耐性及富集。在液体培养基中添加不同浓度(0—60 g/L)的Mn离子,测定其菌丝生物量、菌丝Mn含量、菌丝抗氧化酶活性和过氧化水平以及菌体细胞离子交换量、Mn在细胞中的分布的变化情况。实验结果表明九州虫草菌丝生物量与Mn浓度呈显著负相关,Mn浓度60 g/L为九州虫草菌丝生长极限浓度。菌丝中Mn含量随培养基中Mn浓度的增大而显著升高,10 g/L Mn时,菌丝细胞中Mn积累量达到细胞干重的1.0013%。九州虫草菌丝中过氧化产物丙二醛(MDA)、可溶性蛋白(SP)含量、可溶性糖浓度与培养基中Mn浓度呈负相关,实验组与对照组差异显著。抗氧化酶(过氧化氢酶(CAT)、过氧化物酶(POD)、超氧化物歧化酶(SOD))活性随着培养基中Mn浓度增大而显著升高,但变化趋势不同。九州虫草菌丝细胞不可溶性组分中Mn的量(91.51%—98.6%)显著高于可溶部分(1.40%—8.49%)。九州虫草菌丝细胞壁离子交换量(CEC)随着培养基中Mn浓度的升高变化不明显。说明在九州虫草菌丝对Mn的富集过程中,其细胞壁、细胞膜和细胞器对于Mn结合发挥了主要作用,细胞质中可溶性成分对Mn的结合发挥次要作用。在Mn的胁迫下,增强抗氧化酶系统的协同作用以清除大量自由基是细胞对锰耐性的重要机制。

雷丸研究进展

从雷丸的临床应用、有效成分及其药理作用、人工培养等方面综述了近年来雷丸的研究进展。