人参皂苷Rh_2抗肿瘤转移的功能研究进展

人参皂苷Rh2（ginsenoside-Rh2,G-Rh2）是一种含有达玛烷型骨架的四环三萜类皂苷单体,属于人参二醇型。人参皂苷Rh2是人参皂苷Rg3在体内的主要活性降解产物,二者均属于人参中的稀有皂苷,是白参蒸制为红参的过程中生成的次生皂苷[1]。药理学研究表明,G-Rh2药理作用广泛,对中枢神经系统、心血管系统、消化系统、免疫系统、内分泌系统等均有显著的调节功能,可显著提高患者的免疫能力,

元胡主要病虫害的鉴别与防治技术

元胡是著名的"浙八味"药材之一,在浙江地区种植历史悠久,市场需求量大,是农户种植致富的好产业。但在长期的种植栽培过程中,缺乏必要的病虫害防治的措施,新发展的元胡产区的农户对元胡病虫害种类认识不足,防治不当,导致元胡的产量和质量下降,影响了农户的收益。本文以此为背景,对元胡主要病虫害的鉴别特征和发病规律进行总结,结合课题组的前期研究,对元胡病虫害的综合防控措施给出建议,以期提高元胡的产量和质量,增加种植户的收益。

细菌非编码小RNA分子RyhB的结构与功能

RyhB是一种大小为90个核苷酸的细菌非编码小RNA分子(small noncoding RNA,sRNA).当铁缺乏时,RyhB通过下调一系列与铁的储存和利用相关蛋白的表达水平以维持体内的铁平衡,而其本身的表达则受到负调控因子Fur(ferric uptake regulator)的调节.在体内,RyhB与Hfq蛋白和核糖核酸酶E(ribonuclease E,RNase E)形成核蛋白复合物sRNP来发挥活性.sRNP通过RyhB与靶基因的互补配对序列作用于靶基因的核糖体结合位点,阻断靶mRNA的翻译,并迅速引起靶mRNA的降解.此外,RyhB还可以通过影响致病菌的生物膜形成、趋化性、耐酸性等方面的能力对细菌的致病力进行调节.本文综述了RyhB的结构、功能及作用机制方面的研究进展,并对其存在的生理意义进行了探讨.

线粒体DNA标记在头足纲动物分子系统学中的应用

动物线粒体DNA(mt DNA)具有在细胞中大量存在、缺少重组、多为母系遗传、缺少内含子以及进化速率高等特点,广泛应用于比较和进化基因组、种群遗传、物种鉴定和不同分类水平上的系统发生学研究。头足类作为软体动物门中的重要经济种类,其分类和系统进化研究历来是热点领域。本研究主要对头足类动物mt DNA组成与特点(包括基因组成、重排等)、常用mt DNA标记对其不同分类阶元的适用性以及线粒体基因片段和全基因组在头足类系统演化中的作用进行了阐述,并对其未来发展进行展望。

茅莓总皂苷和高三尖杉酯碱、阿糖胞苷体外协同诱导白血病细胞凋亡的机制研究

目的:探讨茅莓总皂苷(TSRP)抑制K562和人原代白血病细胞及分别与化疗药高三尖杉酯碱(Hom)、阿糖胞苷(Ara-c)的协同作用,并探讨其协同作用的可能机制。方法:MTT法和PHA-LCM液相-半固体二步培养法检测不同浓度的TSRP对K562和人原代白血病细胞增殖及其与化疗药联用后的影响;观察TSRP分别和Hom、Ara-c联用的抑制作用,用药物相互作用指数评价药物协同作用;DAPI染色法观察一定浓度下TSRP协同化疗药诱导K562细胞凋亡;Western blot检测促凋亡蛋白Cleaved caspase-3、Cleaved caspase-9和Cleaved PARP以及抗凋亡蛋白Survivin的表达。结果:TSRP能够抑制K562和人原代白血病细胞的增殖,呈浓度依赖性,在一定浓度范围内TSRP和化疗药有显著的协同作用;DAPI染色法观察TSRP和化疗药协同较单用化疗药出现明显凋亡现象,诱导细胞发生凋亡;Western blot检测TSRP联合Hom较单用Hom显著提高了K562细胞内PARP、Cleaved caspase-3和Cleaved caspase-9的活性;TSRP联合Ara-c较单用Ara-c显著提高了K562细胞内PARP和Cleaved caspase-3的活性,但是对Cleaved caspase-9的活性影响差别不大;TSRP联合Hom或Arac对Survivin的活性影响均未见明显差别。结论:TSRP分别和化疗药Hom或Ara-c联用对K562和人原代白血病细胞有明显的增殖抑制和诱导凋亡作用,且主要是通过线粒体途径增强凋亡效应,从而增加化疗药物的敏感性,具有良好的临床应用前景。

三氧化二砷联合丹参酮对肝癌的作用效果与机制研究

[目的]考察三氧化二砷(arsenic trioxide,As2O3)联合丹参酮对肝癌裸鼠移植瘤的作用效果并初步探讨其可能的分子机制。[方法]建立裸鼠人肝癌移植瘤模型,待瘤体生长到体积100mm3左右,将裸鼠随机分为5组,分别为模型对照组、As2O3单用组(As2O3低剂量组,2.5mg/kg)、阳性对照组(As2O3高剂量组,5.0mg/kg)、丹参酮单用组(500mg/kg)、As2O3-丹参酮组(As2O32.5mg/kg+丹参酮500mg/kg),每组8只,每天腹腔注射给药,共19d。比较各组肿瘤生长曲线和瘤体质量;采集血液进行血常规和生化常规分析;以原位末端转移酶标记(TdT-mediated dUTP nick end labeling, TUNEL)法检测瘤体组织细胞凋亡情况;免疫组化和Western blot检测凋亡相关蛋白的表达。[结果]随着给药时间的延长,与模型对照组比较,As2O3单用组、丹参酮单用组、As2O3-丹参酮组以及阳性对照组均表现出一定的抑瘤效果(P<0.01)。与阳性对照组比较,As2O3-丹参酮组的抑瘤效果更显著(P<0.05)。与模型对照组比较,As2O3单用组、阳性对照组、As2O3-丹参酮组白细胞(white blood cell,WBC)计数均上调,其中As2O3单用组差异具有统计学意义(P<0.05);As2O3单用组、阳性对照组红细胞(red blood cell,RBC)计数显著下调(P<0.05,P<0.01);各治疗组血红蛋白(hemoglobin,HGB)水平均下调,其中阳性对照组差异有统计学意义(P<0.01);As2O3单用组、阳性对照组、As2O3-丹参酮组血小板(platelet,PLT)计数均上调,其中As2O3单用组和阳性对照组差异具有统计学意义(P<0.01);与阳性对照组比较,As2O3-丹参酮组WBC、RBC计数和HGB水平均上调,但差异无统计学意义(P>0.05)。与模型对照组比较,As2O3单用组、阳性对照组与As2O3-丹参酮组丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase,ALT)水平上调,但差异无统计学意义(P>0.05);各治疗组中天门冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)水平下调,其中丹参酮单用组差异有统计学意义(P<0.01);各治疗组中尿素氮(blood urea nitrogen,BUN)水平下调,其中丹参酮单用组差异有统计学意义(P<0.05);阳性对照组、丹参酮单用组和As2O3-丹参酮组肌酐(creatinine,CREA)水平均下调(P<0.05,P<0.01)。与模型对照组比较,各治疗组凋亡率均明显上调(P<0.01);与阳性对照组比较,As2O3-丹参酮组凋亡率上调显著(P<0.01)。与模型对照组比较,各治疗组中促凋亡蛋白Bax表达上调,其中阳性对照组、丹参酮单用组和As2O3-丹参酮组差异有统计学意义(P<0.01);丹参酮单用组和As2O3-丹参酮组靶向聚ADP核糖聚合酶(poly ADP-ribose polymerase,PARP)表达明显上调(P<0.01);阳性对照组、丹参酮单用组和As2O3-丹参酮组抗凋亡蛋白X连锁凋亡抑制蛋白(X-linked inhibitor of apoptosis protein,XIAP)表达明显下调(P<0.01)。[结论]As2O3与丹参酮联用抗肝癌具有协同增效、减毒的作用,丹参酮可以减轻As2O3造成的血常规改变和肝肾功能损伤。

隐丹参酮诱导肿瘤细胞凋亡的分子机制研究进展

隐丹参酮是丹参中主要的活性物质之一,具有显著的抗肿瘤效果,并能够诱导细胞发生凋亡。综述了隐丹参酮在诱导肿瘤细胞凋亡分子机制方面的最新研究进展。

茅莓总皂苷联合化疗药通过Fas途径协同诱导白血病HL-60细胞凋亡研究

目的 :探讨茅莓总皂苷(TSRP)抑制HL-60细胞及分别与化疗药高三尖杉酯碱(Hom)、阿糖胞苷(Ara-c)的协同作用,并探讨其协同作用的可能机制。方法 :MTT法检测不同浓度的TSRP与化疗药联用对HL-60细胞增殖影响;DAPI染色法观察一定浓度下TSRP联合化疗药诱导HL-60细胞凋亡的形态变化;Annexin V-FITC/PI检测不同浓度的TSRP与化疗药联用对HL-60细胞凋亡情况;RT-PCR检测TSRP联合化疗药干预HL-60白血病细胞后Fas和Caspase-3 mRNA表达。以上实验均用药物相互作用指数(CDI)评价药物协同作用。结果:MTT显示在一定浓度范围内TSRP和化疗药有显著的协同作用;DAPI染色法和Annexin V-FITC/PI法检测到一定浓度范围内TSRP联合化疗药后显示明显的凋亡,CDI均<1,具有协同作用;RT-PCR检测到在一定浓度范围内TSRP联合化疗较单用TSRP的FasmRNA表达明显增加和Caspase-3 mRNA表达明显减少,CDI均<1,具有协同作用。结论:TSRP分别和化疗药Hom或Ara-c联用对HL-60细胞有明显的协同增殖抑制和诱导凋亡作用,可能是通过Fas-Caspase途径增强凋亡效应,从而增加化疗药物的敏感性,具有良好的临床应用前景。

萝卜硫素增加HL-60和人原代白血病细胞对化疗药敏感性实验研究

目的:探讨萝卜硫素(SF)对白血病细胞化疗药物敏感性的作用。方法:琼脂半固体集落培养法和MTT法检测不同浓度的萝卜硫素对HL-60细胞增殖的影响及协同化疗药对细胞生长的抑制作用;PHA-LCM液相-半固体二步培养SF协同化疗药抑制人原代白血病细胞生长。结果:琼脂半固体集落培养法和MTT法证实在一定浓度范围内SF对HL-60细胞增殖抑制(P<0.05,P<0.01),呈剂量依赖性,SF能够增强HL-60细胞对化疗药物高三尖杉酯碱(Hom)和阿糖胞苷(Ara-c)敏感性(P<0.05);PHA-LCM液相-半固体二步培养法证实SF在一定浓度范围内对人原代白血病细胞有抑制作用(P<0.05,P<0.01),呈剂量依赖性,并增加人原代白血病细胞对化疗药Hom和Ara-c敏感性。结论:萝卜硫素在一定浓度下有效抑制白血病细胞增殖,并能增强化疗药物的敏感性。

萝卜硫素诱导白血病细胞K562凋亡及其与化疗药协同作用的实验研究

目的:探讨萝卜硫素诱导K562白血病细胞作用及其与化疗药的协同作用。方法:琼脂半固体集落培养法和MTT法检测不同浓度的萝卜硫素对K562细胞增殖的影响;倒置显微镜观察萝卜硫素对细胞形态的影响,Annexin V-FITC/PI双标记法检测细胞凋亡情况;Western blot检测凋亡调控蛋白PARP的活性;观察萝卜硫素分别和高三尖杉酯碱、阿糖胞苷联合的抑瘤作用,用药物相互作用指数评价药物协同作用。结果:萝卜硫素能够抑制白血病K562的增殖,呈剂量依赖性;萝卜硫素引起了K562细胞形态的明显改变,显著提高了细胞的早期凋亡率,增加了促凋亡蛋白PARP的表达水平;萝卜硫素与化疗药物高三尖杉酯碱和阿糖胞苷存在明显的协同作用,其协同系数分别为0.64和0.66。结论:萝卜硫素可以诱导K562细胞发生凋亡,增加化疗药物的敏感性,具有良好的临床应用前景。

混凝土无缝施工法在超长蓄水池工程冬季施工中的应用

本文介绍了天津大港区较大型蓄水池冬季混凝土无缝施工法的施工方案及施工工艺。采取加入UEA混凝土膨胀剂、防冻剂和粉煤灰等外加剂 ,实行一次性整体浇筑的方法 ,达到提高混凝土的抗裂防渗性能和早期强度 ,免遭冻害 ,提高密实度和强度 ,改善混凝土的和易性的目的。该工程完工后 ,经多方检查均未发现裂缝和渗水现象 ,混凝土质量优良 ,达到设计要求。而且该混凝土无缝施工方法工艺简便、安全可靠 。

哈巴苷对急性脑缺血及线粒体介导的Caspase依赖性细胞凋亡信号通路的影响

目的探讨哈巴苷对急性脑缺血及线粒体介导的caspase依赖性细胞凋亡通路的影响。方法采用MCAO法建立小鼠急性脑缺血模型,造模后各组立即尾静脉注射(iv)哈巴苷(4、8、12 mg·kg^(-1))、依达拉奉(3.2 mg·kg^(-1)),模型组及假手术组同法给予等量生理盐水,0.1 mL·(10 g)^(-1)。造模6h后,观测小鼠神经功能评分、脑梗死体积及脑组织形态病理学变化;采用Western blot法测定各组脑组织线粒体中Cyt C及胞质中pro-caspase-3的含量。结果造模6 h后,哈巴苷各剂量组均能明显降低因缺血而增加的小鼠神经功能评分及脑梗死体积(P<0.01,P<0.05);均能不同程度减轻脑组织神经元核固缩、核溶解程度,改善脑组织因缺血造成的病理损伤;能明显上调脑组织线粒体中Cyt C及胞质中pro-caspase-3的表达。结论哈巴苷对急性脑缺血具有保护作用,其保护作用可能与抑制线粒体介导的caspase依赖性细胞凋亡信号通路相关。

三叶青化学成分和抗肿瘤作用研究进展

三叶青为葡萄科崖爬藤属植物三叶崖爬藤,研究表明其具有广谱的抗肿瘤作用。三叶青的化学成分主要包括黄酮类、三萜及甾体类、酚酸类、脂肪酸类化合物,可通过抑制肿瘤细胞增殖、诱导细胞凋亡、调节机体免疫功能和协同化疗药物等途径发挥抗肿瘤作用。三叶青在抗肿瘤药物开发方面显示了良好的应用前景,本文综述了三叶青的化学成分及抗肿瘤功能方面的研究进展,为其进一步的开发利用提供了资料参考和理论支持。

松茸水提物提取工艺优化及其单糖组成分析

目的优化松茸水提物提取工艺,并分析其单糖组成。方法以提取温度、液料比、提取时间、提取次数为影响因素,多糖提取率为评价指标,正交试验优化提取工艺。水提醇沉法得到粗多糖后用三氟乙酸水解,加入1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)进行衍生化,HPLC法分析单糖组成。结果最佳条件为药材加入50倍量水,90℃下回流提取2 h,重复3次,多糖提取率为17.44%。多糖主要由甘露糖、葡萄糖、半乳糖、木糖、岩藻糖组成,摩尔比为1:3.39:1.19:0.24:0.40。结论该方法快速稳定,准确简便,可用于松茸及其相关制剂的质量控制。

响应面法优化结香花总黄酮提取工艺及其抗氧化活性

采用响应面法优化结香花中总黄酮的提取工艺,评价其抗氧化活性。在单因素实验的基础上,以乙醇浓度、液料比、提取温度、提取时间为优化因素,总黄酮得率为评价指标,采用Box-Behnken法优化结香花总黄酮的提取工艺;利用DPPH和ABTS自由基清除实验检测结香花总黄酮的抗氧化能力。结果表明,结香花总黄酮的最佳提取工艺为乙醇浓度80%,液料比35∶1,提取温度83℃,提取时间85 min,总黄酮得率22.76 mg·g^(-1)。最佳工艺条件下得到的提取物具有一定的清除自由基能力,且与总黄酮含量呈明显的浓度依赖性,体外清除DPPH自由基和ABTS自由基的IC_(50)值分别为0.75和0.98 mg·mL^(-1)。

大孔吸附树脂纯化刺梨多酚工艺的优化

目的优化大孔吸附树脂纯化刺梨多酚工艺。方法以吸附率、解吸率为评价指标,考察4种大孔吸附树脂(ADS-17、HPD-600、AB-8、NKA-9)的吸附、解吸性能。然后,响应面法优化上样液质量浓度、pH、体积流量,以及解吸液(乙醇)体积分数、pH、体积流量。结果 AB-8型大孔吸附树脂的吸附、解吸性能最佳,最大静态吸附量、解吸率分别达8. 11 mg/g、94. 39%。最佳吸附条件为上样液质量浓度0. 7 mg/mL,pH 5. 9,体积流量2. 6 mL/min;最佳解吸条件为解吸液体积分数69%,pH 6. 3,体积流量2. 7 mL/min,多酚回收率20. 37%,含有量36. 33%,是纯化前的4. 9倍。结论该方法稳定可靠,可用于大孔吸附树脂纯化刺梨多酚工艺,也能为该类成分后续开发利用提供技术保证。

刺梨不同提取成分对B16细胞增殖及酪氨酸酶活性的影响

[目的]评价刺梨不同提取成分对小鼠黑色素瘤B16细胞增殖和细胞内酪氨酸酶活性的影响,为刺梨在美白化妆品领域的开发应用奠定基础。[方法]分别采用水提法、醇提法和超声提取法获得刺梨多糖、黄酮和多酚,分别采用苯酚-硫酸法、亚硝酸钠-硝酸铝-氢氧化钠法和Folin-Ciocaltean法检测其纯度。以刺梨多糖(200、400、800、1 600μg·mL-1)、刺梨黄酮(30、60、120、240μg·m L-1)、刺梨多酚(40、80、160、320μg·mL-1)及维生素C干预B16细胞,采用MTT法检测B16细胞增殖活性,倒置显微镜观察B16细胞形态和数量,多巴氧化法检测酪氨酸酶活性。[结果]刺梨多糖的提取率最高,可达45.33%;刺梨黄酮的纯度最高,可达52.50%。刺梨不同提取成分对B16细胞增殖和酪氨酸酶活性均有一定的抑制作用,且呈现显著的浓度依赖性,与正常组比较,具有统计学差异(P<0.05)。刺梨不同提取成分各剂量组均可抑制B16细胞的增殖,增加细胞碎片,且呈显著的浓度依赖性;药物处理48h后,刺梨多糖、刺梨黄酮和刺梨多酚抑制B16细胞增殖的IC50分别为649.83、105.87、134.16μg·m L-1,抑制酪氨酸酶活性的IC50分别为376.13、57.51、82.42μg·mL-1,其中刺梨黄酮(60、120、240μg·mL-1)和刺梨多酚(80、160、320μg·mL-1)对B16细胞酪氨酸酶的抑制作用优于阳性对照维生素C,具有统计学差异(P<0.05)。[结论]刺梨的不同提取成分对小鼠黑色素瘤B16细胞增殖和酪氨酸酶活性均有一定的抑制作用,其中刺梨黄酮的活性最佳,刺梨多酚次之,提示刺梨在皮肤美白等方面具有潜在的研究价值。

小构树总黄酮提取工艺优化及其抗氧化、美白活性

目的优化小构树总黄酮提取工艺,并评价其抗氧化、美白活性。方法在单因素试验基础上,以乙醇体积分数、液料比、提取温度、提取时间为影响因素,总黄酮得率为评价指标,Box-Behnken响应面法优化提取工艺。检测总黄酮对DPPH、ABTS自由基的清除能力,以及对酪氨酸酶活性的抑制作用。结果最佳条件为乙醇体积分数90%,液料比35∶1,提取温度85℃,提取时间80 min,总黄酮得率为55.14 mg/g。总黄酮对DPPH、ABTS自由基及酪氨酸酶单酚酶、二酚酶的IC50值分别为151.70、242.20、24.37、15.64μg/m L。结论该方法稳定可靠,可用于提取具有良好抗氧化、美白活性的小构树总黄酮。

响应面法优化三叶青总黄酮提取工艺及不同产地三叶青的质量评价

目的:优化三叶青总黄酮的提取工艺,比较不同产地三叶青的总黄酮得率,并采用指纹图谱结合化学模式识别的方法对其质量进行综合评价。方法:在单因素实验的基础上,以三叶青总黄酮得率为评价指标,运用BoxBehnken法优化三叶青总黄酮的提取工艺;在最佳提取工艺下,测定不同产地三叶青的总黄酮得率;在建立三叶青HPLC指纹图谱的基础上,采用相似度评价、聚类分析和主成分分析,对不同产地三叶青的质量进行综合性评价。结果:确定三叶青总黄酮的最佳提取工艺为提取时间65 min、提取温度83℃、料液比1:30 g·mL-1、乙醇浓度60%,该条件下总黄酮得率为37.89 mg·g-1;测得不同产地三叶青总黄酮得率差异较大,其中以云南楚雄、福建福州、贵州黔西南产三叶青的总黄酮得率较高;建立了全国9个不同产地的三叶青总黄酮HPLC指纹图谱,共标定11个共有峰,其相似度为0.770~0.961;聚类分析和主成分分析结果一致,可将不同产地的三叶青样品分为4类;主成分分析表明,前3个主成分的累积方差贡献率为84.92%,选择该3个因子对三叶青进行综合性评价;根据综合评价得分可知,浙江台州产三叶青质量最佳,云南楚雄次之,广东清远质量最差。结论:本研究结果为不同产地三叶青的质量评价提供参考,并为三叶青销售市场的规范和后续资源开发提供技术支撑。

松针的显微及分子鉴别研究

目的:利用显微和分子鉴定技术对不同植物基源的松针药材进行鉴别,为松针的鉴别提供科学依据。方法:采用基源、显微鉴定的方法研究马尾松(Pinus massoniana Lamb.)、黑松(Pinus thunbergii Parl.)和华山松(Pinus armandii Franch.)的特征;利用PCR扩增和双向测序分析植物DNA条形码ITS2和rbc L序列特征;采用分子进化遗传分析(MEGA)6.0软件进行种间、种内Kimura2-parameter(K2P)遗传距离计算,并构建邻接系统聚类树。结果:三种松针数目及长度、维管束数、气孔线的分布、树脂道数目及分布等具有明显区别。马尾松、黑松和华山松的ITS2序列长度分别为470、469和470 bp,rbc L序列长度均为553 bp;ITS2序列在马尾松、黑松和华山松的种内变异率分别为0%、0.2%和2.8%,rbc L序列在这三种松针样品的种内变异率分别为0%、2.4%和1.1%。ITS2序列在松针的种内和种间遗传距离中不存在显著的条形码间隔;而rbc L序列的种内和种间距离存在一定的条形码间隔。邻接系统树结果表明,三种松针药材聚为不同的分支,rbc L条形码序列可鉴别马尾松、黑松、华山松及其近缘的植物。结论:利用基源、显微及分子鉴定技术可准确、快速地鉴别马尾松、黑松和华山松,为松针的质量评价和分类鉴别提供了方法和依据。