Notch1蛋白在人心脏瓣膜间质细胞凋亡与钙化关系中的作用

目的用人心脏瓣膜间质细胞(hVICs)在体外培养并用钙化诱导液建立瓣膜钙化模型,观察hVICs钙化过程中Notch1蛋白表达及细胞凋亡情况,探讨Notch1蛋白在hVICs凋亡与钙化关系中的作用。方法将体外培养的hVICs随机分为两组,钙化组用含钙化诱导液的培养基培养,以建立钙化模型,并按1~7天分别诱导细胞,观察钙化的动态过程;空白组用正常培养基(I-GRO PLUS)培养。所有hVICs均培养7天。检测两组细胞钙化结节数目、BMP-4蛋白、Notch1蛋白的表达及hVICs凋亡率。然后将钙化组中诱导钙化细胞再随机分脂多糖组(LPS)、Notch1抑制剂组(γ分泌酶抑制剂,DAPT)、对照组(只加钙化诱导液)体外培养3天,检测BMP-4、Notch1、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase3)的表达。结果与空白组细胞比较,钙化组细胞钙化及Notch1蛋白的表达均高于空白组,且随着诱导天数的增加而增加;细胞凋亡率在钙化诱导3天时最高,随后逐渐下降。LPS组与对照组比较,细胞凋亡和钙化均随着Notch1蛋白的表达增加而增加;DAPT组与对照组比较,细胞凋亡和钙化均减少。结论hVICs钙化与细胞凋亡有着密切的关系,且Notch1蛋白在hVICs凋亡与钙化关系中起着重要的作用。

血管紧张素Ⅱ通过ERK1/2通路促进血管内皮细胞钙化

目的探讨血管紧张素II通过ERK1/2通路促进血管钙化的病理生理学机制。方法体外培养HUVECs 5 d后,用不同浓度梯度血管紧张素Ⅱ刺激内皮细胞,筛选出诱导血管内皮细胞钙化的最适浓度。用血管紧张素Ⅱ刺激内皮细胞不同时间点(0、15、30、45、60 min),检测细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)通路磷酸化水平。用血管紧张素Ⅱ诱导5 d的钙化内皮细胞分为4组:对照组(用5%胎牛血清的ECM培养液)、血管紧张素Ⅱ组(100 nmol/L AngⅡ)、氯沙坦组(100 nmol/L AngⅡ+1μmol/L Losartan)、U0126组(100 nmol/L AngⅡ+U01261μmol/L)。通过Western blot、ELISA检测骨形态发生蛋白-2、4(BMP2、BMP4)钙化因子表达来探讨血管紧张素Ⅱ对血管内皮钙化的影响及其信号通路。结果血管紧张素Ⅱ增加人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的BMP2、BMP4钙化因子表达(P<0.05);而血管紧张素Ⅱ1型受体阻断剂和ERK1/2通路抑制剂U0126可下调血管紧张素Ⅱ对血管内皮BMP2、BMP4的表达(P<0.05)。结论血管紧张素Ⅱ可诱导HUVECs钙化,其途径是通过ERK1/2通路促进血管内皮细胞钙化。

睾酮对维生素D3和尼古丁诱导的主动脉血管钙化的影响

目的建立SD大鼠血管钙化模型,并观察睾酮在主动脉血管钙化中的作用。方法将10周龄SD雄性大鼠分为:对照组、钙化组、钙化+低剂量睾酮组和钙化+高剂量睾酮组,每组8只。除对照组外,其余三组采用维生素D3(300 k U/kg一次肌肉注射)和尼古丁(25 mg/kg溶于花生油中早、晚各灌胃1次)诱导大鼠血管钙化模型;低剂量睾酮组注射1 mg/kg外源性睾酮(隔日注射1次),高剂量睾酮组注射2 mg/kg睾酮(隔日注射1次),持续8周后处死。采用ELISA法测定大鼠血清睾酮和骨形态发生蛋白4(BMP-4)含量,采用试剂盒检测血管组织钙离子及碱性磷酸酶(ALP)含量,蛋白免疫印迹分析(Western blot)检测主动脉血管组织BMP-4、骨桥蛋白(OPN)的蛋白表达水平,Von Kossa染色法观察血管钙化情况。结果 (1)成功制备了大鼠血管钙化模型:Von Kossa染色可见钙化组大鼠血管中膜大量黑色颗粒样钙盐沉积,而对照组血管结构完好,未见黑色钙盐沉积物。(2)睾酮对血管钙化的影响:睾酮组钙含量、ALP、BMP-4、OPN水平显著低于钙化组(P<0.01),且高剂量睾酮组低于低剂量睾酮组,对照组水平最低; Von Kossa染色可见钙化组血管中膜出现大量黑色颗粒样钙盐沉积,而低剂量睾酮组和高剂量睾酮组均见少量钙盐沉积,对照组无钙盐沉积。结论外源性睾酮能一定程度上减轻维生素D3和尼古丁诱导的大鼠血管钙化。

钙化性主动脉瓣膜病的分子生物学机制及展望

钙化性主动脉瓣膜病(CAVD)是中老年人最常见的心脏瓣膜病。随着人类寿命的增加,CAVD患病率预计将上升。三分之一老年人的超声心动图或X线检查发现主动脉瓣钙化的证据,是CAVD早期的亚临床形式。在全世界范围内,年龄、性别、吸烟、高胆固醇血症、高血压和II型糖尿病都是CAVD的危险因素。钙化性主动脉瓣狭窄是该病进展的最严重形式,而且有2%>60岁的人受到主动脉狭窄的影响,在一定程度上施行手术干预是必需的。在CAVD的临床进展的阶段没有有效的药物治疗。在最初阶段,发病机制类似于动脉粥样硬化,其特征是基底膜破裂,炎症反应、浸润、脂质沉积、钙化。骨桥蛋白在钙化主动脉瓣膜上的表达表明出现了病理性钙化,同时钙化瓣膜中有骨的形成。钙化的矿物质沉积在心血管软组织可破坏这些组织的正常生物力学功能,导致如心力衰竭、心肌梗死、中风并发症。本文重点阐述了CAVD分子和细胞水平的最新研究进展,并对未来的治疗方法进行了展望。

Ghrelin在维生素D3和尼古丁诱导大鼠血管钙化中的作用

目的建立大鼠血管钙化(VC)模型并探讨Ghrelin在VC中的作用。方法将40只8周龄SD大鼠随机分为4组:钙化组、对照组、钙化+低浓度Ghrelin组、钙化+高浓度Ghrelin组。钙化组用尼古丁灌胃(溶解于花生油中)联合维生素D 3(VD 3)溶解于无水乙醇肌肉注射,对照组仅用花生油和无水乙醇做相同处理,钙化+低浓度Ghrelin组和钙化+高浓度Ghrelin组分别在VD 3和尼古丁处理基础上分别腹腔注射50 μg/kg、100 μg/kg剂量的Ghrelin每日1次,连续4周。用Von Kossa染色观察大鼠胸主动脉VC程度,ELISA法测血清钙离子(Ca^2+)、碱性磷酸酶(ALP)及胸主动脉骨形态发生蛋白-2、4(BMP-2、BMP-4)含量,免疫组化法检测胸主动脉BMP-2、BMP-4表达。Western blot法检测4组BMP-2、BMP-4和Ghrelin的表达。结果钙化组和对照组Von Kossa染色证实VC模型建立成功,且高浓度Ghrelin比低浓度Ghrelin有更明显的抑制VC作用,ELISA法测得血清Ca 2+、ALP、胸主动脉BMP-2、BMP-4含量以及免疫组化法、Western blot法测BMP-2、BMP-4蛋白表达验证Ghrelin有抑制VC的作用,高浓度Ghrelin抑制VC更加明显( P <0.05)。Western blot检测4组Ghrelin表达情况,其中钙化组和对照组相比较差异无统计学意义( P >0.05)。结论维生素D 3联合尼古丁可以成功建立大鼠VC模型,Ghrelin能够在一定程度上抑制VC的发展。

重组人脑利钠肽结合硝普钠治疗急性失代偿性心力衰竭的效果分析

探讨急性失代偿性心力衰竭选择重组人脑利钠肽、硝普钠联合治疗方案的应用价值。方法 研究对象为我院急性失代偿性心力衰竭患者,总计60例,实验时间段为2021年02月到2023年01月,分组方法为计算机表法,研究组30例,实施重组人脑利钠肽结合硝普钠治疗,对照组30例,实施硝普钠治疗方式。对比两组心功能指标[左心室舒张末期容积(Left ventricular end diastolic volume,LVEDV)、左心室收缩末期容积(Left ventricular end systolic volume,LVESV)以及射血分数(Ejection fraction,LVEF)]、疗效。结果 LVEDV、LVESV水平对比,研究组数值显著更低,P<0.05;LVEF水平对比,研究组更高,P<0.05;疗效对比,研究组更高,(97.67%)VS(66.67%),P<0.05。结论 急性失代偿性心力衰竭选择重组人脑利钠肽联合硝普钠治疗方案,可切实改善患者病症,提升疗效,可推广。