共转化Atpsy和folE基因提高生菜类胡萝卜素和叶酸含量

通过农杆菌介导的遗传转化法将拟南芥八氢番茄红素合成酶基因(phytoene synthase,Atpsy)和按照拟南芥偏爱密码子人工合成的编码三磷酸腺苷环化水解酶(GTP cyclohydrolase,GCHI)的folE基因共同转入罗曼生菜中,通过Realtime-PCR、HPLC、干酪乳杆菌发酵法分别测定了转基因生菜中目标基因的表达量、叶黄素和β-胡萝卜素含量以及总叶酸含量。实验结果表明:转基因生菜中Atpsy基因表达量为野生型的43.54倍,folE基因表达量为野生型的38.05倍;转基因生菜植株叶黄素和β-胡萝卜素含量与野生型相比均有提高,含量最好的转基因植株L13中叶黄素含量为7.1mg/kg(鲜重,下同),是野生型对照6.8mg/kg的1.1倍,β-胡萝卜素含量为592.6mg/kg,是野生型对照196.9 mg/kg的3倍;叶酸含量最高是2 083.4 mg/kg,为野生型对照1 129.1mg/kg的1.85倍。该研究为通过基因工程手段改良类胡萝卜素和叶酸在植物体内的代谢途径,获得同时富含类胡萝卜素和叶酸的新型生菜品种打下了基础。

高效液相色谱法测定利福拉齐的有关物质

目的建立高效液相色谱法测定利福拉齐的有关物质。方法采用Diamonsil C18色谱柱（250min×4．6mm，5um），以0．02mol／L柠檬酸缓冲液（含0．1mol／LNaClO4，pH2．8）．乙腈（35：65，V/V）为流动相，流速为1mL／min，检测波长为230nm，柱温为35℃，进样体积为10uL。结果利福拉齐与各有关物质分离良好；利福拉齐在1．05～787．80ug／mL浓度范围内，峰面积与浓度呈良好的线性关系，相关系数为1．0000，利福拉齐的检测限为0．4ng。结论该方法快速、专属、准确、可靠，可用于利福拉齐有关物质的测定。

干旱胁迫对转拟南芥Atpsy基因生菜的影响

干旱胁迫处理转拟南芥Atpsy基因的T1代生菜和野生型生菜,测定各转基因株系与野生型生菜的各项生理生化指标、目的基因的表达量和类胡萝卜素的含量。结果显示:正常情况下,转基因株系与野生型植株的各项生理指标之间没有明显的差异,随胁迫程度加深,转基因株系在发芽率、发芽指数和净光合速率的下降幅度方面小于野生型;同等胁迫强度下,转基因株系的脯氨酸、可溶性糖含量和超氧化物歧化酶活性高于野生型植株;转基因株系植物体内丙二醛的快速积累程度和叶绿素降解速率小于野生型对照组。干旱胁迫处理下,转基因株系Atpsy基因的表达量和类胡萝卜素的含量均有所提高。

非水滴定法测定酮苯丙氨酸钙等4种酮氨基酸钙的含量

目的建立了分别测定4种酮氨基酸钙含量的非水酸碱返滴定法。方法取样品,加入过量高氯酸滴定液(0.1mol/L)至完全溶解,再以丙酮作稀释剂,以甲醇钠滴定液(0.1mol/L)进行非水电位滴定,用一阶导数法确定滴定终点,结合两次滴定结果计算含量。结果 4种酮氨基酸钙含量测定重复性试验的RSD分别为0.28%、0.30%、0.37%和0.33%。结论本法准确、重复性好,可用于4种酮氨基酸钙的含量测定。