内脏肥胖对结直肠癌根治手术操作及患者预后影响的关联性分析

目的分析内脏肥胖对腹腔镜结直肠癌根治手术操作及患者预后影响的关联性。方法选择该院2012-02~2013-10接受腹腔镜结直肠癌根治手术的结直肠癌患者103例,根据SMA角大小将研究对象分为内脏肥胖组(SMA角≥51.75°,n=52)和非内脏肥胖组(SMA角<51.75°,n=51)。分析内脏肥胖与结直肠癌根治术手术时间、术中出血量、中转开腹率、淋巴结转移率、术后住院时间、术后并发症及术后生存时间之间的关联性。结果SMA角可用于诊断内脏肥胖,其ROC曲线下面积为0.771(95%CI:0.680~0.863,P<0.05),截断值为51.75°,灵敏度为75.00%,特异度为74.50%。内脏肥胖组男性、年龄≥60岁的人数比例大于非内脏肥胖组,而淋巴结转移率≥18%的人数比例小于非内脏肥胖组,差异有统计学意义(P<0.05)。内脏肥胖组的手术时间长于非内脏肥胖组,中转开腹率高于非内脏肥胖组,差异有统计学意义(P<0.05)。内脏肥胖组的并发症发生率高于非内脏肥胖组(P<0.05),但两组Clavien-Dindo分级情况差异无统计学意义(P>0.05)。内脏肥胖组的术后住院时间长于非内脏肥胖组,差异有统计学意义(P<0.05)。内脏肥胖组的中位生存期(OS)为40个月,非内脏肥胖组的中位OS为38个月,两组OS差异有统计学意义(P<0.05)。单因素分析结果显示,年龄、淋巴结转移、TNM分期和肿瘤分化程度与结直肠癌患者的OS具有关联性(P<0.05)。Cox回归分析结果显示,TNM分期=Ⅲ,肿瘤高、中分化程度和内脏肥胖是结直肠癌根治术后OS的保护因素,而有淋巴结转移为危险因素。结论SMA角可作为内脏肥胖的诊断指标,且当SMA角为51.75°时诊断效能最大。同时,内脏肥胖会影响结直肠癌手术操作,增加术后并发症发生率,但可改善患者远期预后,延长患者生存时间。

结直肠癌患者肿瘤静脉血CTCs和CEA mRNA水平对异时性肝转移的预测价值

目的:探讨检测结直肠癌患者肿瘤静脉血CTCs、CEA mRNA对异时性肝转移的预测价值。方法:选取2017年3月至2018年12月无同时性肝转移的结直肠癌患者75例,检测患者肿瘤静脉血CTCs和CEA mRNA水平,随访半年,分析CTCs和CEA mRNA水平与异时性肝转移和TNM分期的关系。结果:CTCs、CEA mRNA和两者联合检测预测异时性肝转移的敏感性分别为86.7%(13/15)、73.3%(11/15)、90.9%(10/11),特异性分别为90.0%(54/60)、83.3%(50/60)、92.2%(59/64);CTCs、CEA mRNA水平与TNM分期密切相关(P<0.05)。结论:结直肠癌异时性肝转移与肿瘤大小、浸润深度、分化程度、淋巴结转移、TNM分期有关;CTCs、CEA mRNA可检测肿瘤早期转移,作为结直肠癌异时性肝转移的预测指标;与单独检测CTCs和CEA mRNA水平相比,联合检测的敏感性与特异性更高,可为预测结直肠癌异时性肝转移提供更有价值的参考。

CTCs监测肿瘤转移机制及在结直肠癌诊疗中的应用

肿瘤发生远处转移是导致肿瘤患者死亡的主要原因,外周血中循环肿瘤细胞(CTCs)的存在可能是肿瘤远处转移的基础。CTCs是实体肿瘤远处播散的种子,通过对外周血CTCs水平的动态监测,可以早期发现肿瘤的微转移。结直肠癌是一种全球高发病率和高致死率的恶性肿瘤,因此对结直肠癌的早期诊断以及患者的治疗效果评价和复发风险评估显得尤为重要。随着实验技术的不断发展,CTCs作为结直肠癌临床诊疗及患者预后评估等方面的肿瘤组织替代物的重要应用价值逐渐显现。

胃癌的脉管侵犯及预后影响因素

目的分析胃癌的脉管侵犯(LBVI)及预后的影响因素。方法选择2015年6月~2018年6月在武汉大学人民医院行胃癌根治术的患者356例,根据是否发生LBVI分为LBVI阳性者(221例,中位生存时间26个月)、LBVI阴性者(135例,中位生存时间31个月),采用单因素及多因素分析胃癌发生LBVI的影响因素;应用Kaplan-Meier法对LBVI阳性与阴性者绘制生存曲线,Log-rank检验进行比较,采用单因素及多因素COX比例风险回归模型分析预后影响因素。结果单因素分析显示,性别、超敏CRP、CEA、分化程度、肿瘤直径、浸润深度、淋巴结转移、TNM分期是胃癌发生LBVI的影响因素(P均<0.05);多因素分析显示,肿瘤分化不良、直径大、浸润深度深、淋巴结转移及TNM分期晚是胃癌LBVI的危险因素(P均<0. 05)。单因素分析显示,肿瘤分化程度、肿瘤直径、浸润深度、淋巴结转移、TNM分期是胃癌预后的影响因素(P均<0. 05);多因素分析显示,肿瘤分化不良、浸润深度深、淋巴结转移、TNM分期晚、LBVI是胃癌预后的危险因素(P均<0.05)。结论肿瘤分化不良、直径大、浸润深度深、淋巴结转移及TNM分期晚的胃癌更易发生脉管浸润;肿瘤分化不良、浸润深度深、淋巴结转移及TNM分期晚的胃癌预后较差。

肿瘤标志物和Ki67在结直肠癌中的表达及预后因素分析

目的探讨术前血清肿瘤标志物与术后Ki67联合检测对结直肠癌病人预后评估的价值。方法收集2012年1月至2014年6月在武汉大学人民医院胃肠外科就诊的结直肠癌病人的临床病理资料和随访资料。癌胚抗原(CEA)>5μg/L定义为阳性,癌抗原(CA)19-9>35 kU/L定义为阳性。Ki67 LI大于其对应截断值定义为高表达(阳性)。绘制受试者工作特征(ROC)曲线寻找Ki67 LI的截断值[曲线下面积(AUC)最大时];Cox回归分析寻找影响结直肠癌病人预后的独立危险因素。结果研究共纳入311例结直肠癌病人,截至2019年6月1日,中位随访67个月(3~89个月),随访率94.2%,病死率32.5%。单因素生存分析提示,CEA阳性、CA19-9阳性,Ki67高表达与结直肠癌病人预后不良相关(均P<0.01)。联合血清肿瘤标志物和Ki67的生存分析结果提示,均阴性时病人预后最好,单阳性时次之,均阳性时最差(均P<0.01)。Cox回归结果提示:CEA[HR=6.461,95%CI(3.693,11.304),P<0.01]、CA19-9[HR=2.046,95%CI(1.214,3.449),P=0.007]、TNM[HR=2.104,95%CI(1.597,5.242),P=0.028]、CEA+Ki67[HR=9.992,95%CI(5.337,18.706),P<0.01]、CA19-9+Ki67[HR=5.345,95%CI(2.282,12.521),P<0.01]是影响预后的独立危险因素。结论联合检测术前血清肿瘤标志物和术后Ki67指标对评估结直肠癌病人预后具有重要价值。

结直肠癌系膜癌结节相关的病理因素及预后分析

目的探讨结直肠癌病人肠系膜癌结节(tumor deposit,TD)数目对预后的影响。方法回顾性分析2011年3月至2014年11月于武汉大学人民医院胃肠外科行结直肠癌根治术病人的临床病理资料,对病人生存情况进行随访,并对TD有无以及根据TD的截断值(cutoff值)分组的病人进行生存分析。结果TD阳性、T3~4期、N1和N2期、神经侵犯阳性、癌胚抗原(CEA)阳性以及肿瘤病理分化为低分化是结直肠癌病人预后不良的独立危险因素(均P<0.05)。根据TD的cutoff值分组行生存分析,发现TD数目总体上与结直肠癌病人预后呈负相关,且TD数目4~5组病人死亡风险较TD1~3组高[HR=7.596,95%CI(3.147,18.333),P<0.01],TD≥6组病人较TD4~5组病人更高[HR=41.976,95%CI(12.343,142.754),P<0.01]。结论肠系膜TD为结直肠癌病人预后的独立不良因素,且不同TD数目对预后的影响不同,简单将TD阳性(淋巴结转移阴性)划分至N1c期或许不能精确地评估病人预后。

基于神经层面指引的腹腔镜全直肠系膜切除术

目的研究基于神经层面指引的腹腔镜直肠癌根治术(NP0+LTME)对患者术后排尿和性功能的保护效果。方法采用回顾性队列分析2016年1月至2018年12月在武汉大学人民医院接受手术治疗的直肠癌患者,其中NP0+LTME组114例,腹腔镜下TME联合盆自主神经保留术(LTME+PANP)组92例,比较两组患者手术及肿瘤相关指标,并随访患者术后排尿和性功能。结果两组手术时间分别为(150±7)min和(154±7)min,差异有统计学意义(t=3.585,P<0.05);术中出血量分别为(9±3)ml和(15±6)ml,差异有统计学意义(t=7.654,P<0.05)。术后3个月,NPO+LTME组排尿功能障碍率低于LTME+PANP组,差异有统计学意义(Z=2.549,P<0.05),但术后6、12个月时,两组排尿功能障碍率差异无统计学意义(Z=0.814,P>0.05;2=1.275,P>0.05)。术后3、6、12个月时NPO+LTME组的男性勃起功能均优于LTME+PANP组,差异均有统计学意义(2=4.917,P<0.05;Z=4.947,P<0.05;Z=4.081,P<0.05);射精功能障碍率均低于LTME+PANP组,差异均有统计学意义(Z=4.464,P<0.05;Z=4.948,P<0.05=4.434,P<0.05);术后3、6、12个月时,女性性功能均优于LTME+PANP组,差异均有统计学意义(Z=2.532,P<0.05;Z=2.364,P<0.05;Z=2.076,P<0.05)。结论NPO+LTME具有较好的手术安全性,同时对患者性功能和早期排尿功能保护具有一定优势。

癌结节在局部进展期胃癌患者中的预后意义

目的分析癌结节与局部进展期胃癌患者临床病理特征之间的关系,评价癌结节的危险因素及其在局部进展期胃癌患者预后中的价值.方法收集2014年1月至2017年7月武汉大学人民医院胃肠外科行胃癌根治术的300例局部进展期胃癌患者的临床资料,分析癌结节与局部进展期胃癌患者临床病理特征及预后的关系.结果 300例局部进展期胃癌患者中癌结节阳性者65例(21.7%).单因素分析结果显示,肿瘤浸润深度、淋巴结转移、pTNM分期、肿瘤大小、脉管浸润、术前血清CA72-4及CA199均与癌结节状态有关(均P<0.05);多因素Logistic回归分析结果显示,淋巴结转移、pTNM分期、脉管浸润及肿瘤浸润深度均是癌结节发生的独立危险因素(均P<0.05).单因素分析结果显示,病灶位置、肿瘤分化程度、淋巴结转移、pTNM分期、肿瘤大小、有无癌结节、癌结节个数及脉管浸润均与局部进展期胃癌患者的预后有关(均P<0.05);多因素分析结果显示,癌结节数>3个是局部进展期胃癌患者预后的独立危险因素(HR=2.242,95% CI:1.484~3.386,P=0.000).癌结节阳性组患者的中位生存时间短于癌结节阴性组患者(χ^2 =91.077,P<0.001).癌结节>3个组患者的中位生存时间短于癌结节数为1~3个组患者和癌结节阴性组患者(χ^2=192.969,P<0.001).结论癌结节与局部进展期胃癌患者的肿瘤分期关系密切,癌结节状态是局部进展期胃患者预后的独立危险因素,癌结节阳性个数多提示患者的预后较差.

构建模拟人散发性结直肠癌及其肝转移的小鼠模型

目的构建模拟人散发性结直肠癌(CRC)发生发展及其肝转移的Apc^loxp/loxp+Kras^LSL-G12D/-+Smad4^loxp/loxp转基因小鼠模型。方法将C57BL/6-Apc^tm1Tyj/J(Apc^loxP)、B6.129S4-Kras^tm4Tyj/J(Kras^LSL-G12D)及129S6-Smad4t^m2.1Cxd/J(Smad4^loxP)、C57BL/6J小鼠杂交并筛选出基因型为Apc^loxP/loxP+Kras^LSL-G12D/-和Apc^loxP/loxP+Kras^LSL-G12D/-+Smad4^loxP/loxP的小鼠,以PCR和qPCR鉴别小鼠基因型。实验分Apc^loxP/loxP+Kras^LSL-G12D/-+Smad4^loxP/loxP组(n=20)和Apc^loxP/loxP+Kras^LSL-G12D/-组(n=24),小鼠结肠镜下向小鼠结直肠黏膜下注射前期构建表达Cre酶和IRES-luciferase的慢病毒(Lentivirus^Cre-IRES-luciferase),每4周小鼠腹腔注射D-luciferase,用小动物活体成像系统(IVIS)成像,对小鼠肿瘤大小、成瘤率以及转移情况进行统计分析。至20周末取小鼠肿瘤灶及转移组织行苏木素-伊红(HE)染色观察其病理改变情况。结果成功培育出基因型为Apc^loxP/loxP+Kras^LSL-G12D/-+Smad4^loxP/loxP和Apc^loxP/loxP+Kras^LSL-G12D/-的转基因小鼠,转基因小鼠结直肠在Lentivirus^Cre-IRES-luciferase的诱导下发生CRC及其肝转移,经病理组织学证实为腺癌和腺癌肝转移。Apc^loxP/loxP+Kras^LSL-G12D/-+Smad4^loxP/loxP组与Apc^loxP/loxP+Kras^LSL-G12D/-组小鼠原发肿瘤大小分别为(3.52±0.26)、(3.45±0.20)mm,差异无统计学意义(t=0.872,P=0.388);成瘤率分别为70.0%、50.0%,差异无统计学意义(χ^2=0.440,P=0.507);转移率分别为58.3%、8.3%(Fisher确切概率法,P=0.027)。结论本研究构建的转基因小鼠结直肠可在LentivirusCre-IRES-luciferase的诱导下发生癌变并可自发转移至肝脏,较真实地模拟了人散发性CRC的发生发展及其肝转移。

ApcloxP/loxP+ KrasLSL-G12D/-转基因小鼠模拟人散发性结直肠癌

目的构建能模拟人散发性结直肠癌发生发展的ApcloxP/loxP+ KrasLSL-Gl2D/-双转基因小鼠模型.方法将C57 BL/6-Apctm1Tyj/J小鼠(ApcloxP)、B6.129S4-Krastm4Tyj/J(KrasLSL-G12D)小鼠与C57 BL/6小鼠转换遗传背景后再杂交建系,通过聚合酶链反应(PCR)和荧光定量PCR鉴定小鼠及其子代基因型,筛选出基因型为Apclox/loxP+ KrasLSL-G12D/-的双转基因小鼠.将小鼠分为两组C57BL/6J(10只)和ApcloxP/loxP+ KrasLSL-G12D/-(10只),在小鼠结肠镜下向小鼠肠黏膜内注射表达Cre重组酶和Luciferase的慢病毒,通过小动物活体成像系统(IVIS)动态观察小鼠成瘤情况,对小鼠瘤变组织取材进行苏木精-伊红(HE)染色观察其组织病理学变化情况,两组比较采用t检验.结果本研究成功培育出双转基因ApcloxP/loxP+ KrasLSL-G12D/-小鼠品系共24只,实验组与对照组小鼠日龄分别为(62±2)、(63±2)d,差异无统计学意义(t=0.343,P> 0.05);两组小鼠体重分别为(21.39±1.40)、(22.35±1.37)g,差异无统计学意义(t=0.682,P>0.05).向小鼠肠黏膜内注射慢病毒后,至12周末经IVIS观察及组织病理学证实,ApcloxP/loxP+KrasLSL-G12D/-组10只中有4只小鼠结直肠发生突变而形成肿瘤病灶,成瘤率40%,而C57BL/6J组小鼠未发生肿瘤.结论本研究成功通过表达Cre酶的慢病毒诱导ApcloxP/loxP+KrasLSL-G12D/-双转基因模型小鼠结直肠发生癌变,较好地模拟了人散发性结直肠癌的发生发展过程.

构建靶向血管内皮生长因子受体2可调控活性的嵌合抗原受体T细胞及其体外功能验证

目的构建靶向血管内皮生长因子受体2(VEGFR2)可调控活性的小分子门控嵌合抗原受体T(smgCAR-T)细胞系统并在体外验证其抗肿瘤和可调节活性。方法采用基因全长合成和磷酸钙转染法构建smgCAR-T及其阳性(CAR+-T)和阴性(CAR--T)对照细胞。同时构建表达VEGFR2的小鼠结直肠癌细胞(MCA38VEGFR2+)。验证并筛选构建成功的细胞后再体外验证CAR-T细胞靶向结合能力。在不同的效靶比下检测白细胞介素-2和肿瘤坏死因子-γ的浓度来评估CAR-T细胞的体外分泌功能,用乳酸脱氢酶浓度评估CAR-T细胞的体外抗肿瘤活性。组间的比较采用t检验或单因素方差分析。结果基因测序和流式细胞术证实CAR-T细胞和靶细胞构建成功。与对照组比较,CAR+-T细胞+MCA38VEGFR2+组具有最强的靶细胞杀伤能力。在smgCAR-T细胞+MCA38VEGFR2+组中,随着C16-(S)-3-甲基吲哚雷帕霉素(Rapalog)滴度升高靶细胞杀伤率逐渐升高;当Rapalog为40 nmol/L时杀伤率达到最大值,为(66.25±13.20)%。分别向smgCAR-T细胞+MCA38VEGFR2+细胞组(A和B组)加入40 nmol/L的Rapalog后,在24 h时可观察到两组杀伤率出现同步升高[(44.25±6.24)%比(49.25±5.56)%,t=1.197,P>0.05],差异无统计学意义。在置换培养基后,再次添加了Rapalog的A组中观察到靶细胞杀伤率升高明显;而未再次添加Rapalog的B组中靶细胞杀伤率升高缓慢;此时,A和B组杀伤率差异有统计学意义[(89.00±3.16)%比(56.50±6.61)%,t=8.873,P<0.01]。结论构建的smgCAR-T细胞在体外展现出一定的抗肿瘤活性,且其活性受小分子化合物Rapalog的可逆调控。

SMAD同源物4抑癌基因在小鼠散发性结直肠癌模型中的作用

目的构建Apc^loxP/loxP+SMAD同源物4(Smad4)^loxP/loxP双转基因小鼠模拟人散发性结直肠癌,观察Smad4在结直肠癌发生发展中的作用。方法分别将Apctm1Tyj/J小鼠、Smad4tm2.1Cxd/J小鼠与C57BL/6J小鼠(均购自美国杰克逊实验室)杂交和回交转换遗传背景形成杂合子小鼠C57BL/6-ApcloxP/-/J(记为ApcloxP/-)、C57BL/6-Smad4loxP/-(记为Smad4loxP/-),将ApcloxP/-和Smad4loxP/-小鼠杂交建系并通过聚合酶链反应(PCR)筛选出Apc^loxP/loxP+Smad4loxP/loxP小鼠。通过小鼠结肠镜分别向Apc^loxP/loxP+Smad4loxP/loxP小鼠和C57BL/6J小鼠(各12只)结直肠黏膜下注射前期构建好慢病毒LentivirusCre-IRES-Luciferase,腹腔注射荧光素酶D(D-luciferase)后在小动物活体成像系统(IVIS)下成像并通过结肠镜动态观察成瘤情况。最后对小鼠瘤灶取材行苏木精-伊红(HE)染色观察其病理改变。组间比较采用t检验。结果成功培育出Apc^loxP/loxP+Smad4loxP/loxP双转基因小鼠22只。在LentivirusCre-IRES-Luciferase诱导下发生突变并形成散发性结直肠肿瘤病灶,经病理组织学证实为腺癌,可通过IVIS系统及小鼠结肠镜动态观察其情况,至12周末成瘤率33%(4/12),C57BL/6J小鼠未观察到瘤变。两组体重分别为(22.58±1.21)、(21.36±1.01)g,比较差异无统计学意义(t=0.892,P>0.05);日龄分别为(63±1)、(62±1)d,差异无统计学意义(t=0.121,P>0.05)。结论本研究构建的Apc^loxP/loxP+Smad4loxP/loxP双转基因小鼠结肠组织在LentivirusCre-IRES-Luciferase诱导下发生癌变,成功模拟人散发性结直肠癌的发生过程,证实Smad4抑癌基因的条件性敲除可促进结直肠癌的发生。