阴沟肠杆菌临床分离株对第三代头孢菌素的耐药机制研究

目的探讨阴沟肠杆菌临床分离株对第三代头孢菌素的耐药机制。方法运用双纸片协同试验和正交三维试验检测耐药菌株的产酶情况,通过接合传递试验和质粒谱分析等方法探讨耐药性播散的规律。结果37株耐药菌中,产ESBLs的有21株菌,占56.8%;产去阻遏型AmpC酶的有13株菌,占35.1%;两种酶均阳性的菌株有2株,均阴性的有1株。在同时产两种酶的2株菌中,其中1株菌CH29的两种酶均在质粒上,耐药表型可通过质粒传递到受体菌株大肠埃希氏菌ECNK5449,属于超超广谱β-内酰胺酶(SSBLs)。结论产生ESBLs和去阻遏型AmpC酶是阴沟肠杆菌临床株对第三代头孢菌素耐药的主要机制。发现1株产SSBLs的临床分离株,可能与耐药性的水平传播有关。

肠杆菌科细菌外排泵AcrAB-TolC调控机制的研究进展

Acr AB-Tol C外排泵广泛存在于肠杆菌科细菌中,其基因表达水平的提高对临床菌株多重耐药起重要作用。细菌Acr AB-Tol C外排泵系统产生多重耐药性的机制是将细菌细胞内的抗生素主动泵出,使细胞内药物浓度下降。外排泵Acr AB-Tol C的调控主要有局部调控和全局调控两种方式,调节基因AcrR、mar OR、ramR及soxRS的突变可以导致Acr AB操纵子过表达,有助于细菌产生多重耐药表型。

阴沟肠杆菌感染的临床分布与耐药性分析

目的 :调查近期天津市社区和院内获得性阴沟肠杆菌感染的临床分布与耐药情况 ,为临床合理选用抗菌药物提供科学依据。方法 :收集天津市八家三级甲等医院于2001年2月—2002年2月分离的95株阴沟肠杆菌。琼脂纸片扩散法进行药敏试验 ,用WHONET5软件分析。结果 :阴沟肠杆菌感染中患者以60岁以上的老年人多见 ,占53 7%。主要疾病是肺感染 ,占85 3%。阴沟肠杆菌临床株对头孢唑啉的耐药率最高 ,其次是阿莫西林 +克拉维酸和氨苄西林 ,对三代头孢菌素的耐药率在44 4%～66 7 %。对亚胺培南的敏感性最高 ,对环丙沙星和阿米卡星耐药率分别为25 %和29 5 %。结论 :治疗阴沟肠杆菌引起的感染要根据药敏结果选择使用三代头孢菌素、喹诺酮类及氨基糖甙类抗菌药 。

碳青霉烯耐药高毒力肺炎克雷伯菌的研究进展

肺炎克雷伯菌是临床常见的条件致病菌。近年来,越来越多的整合高毒力和碳青霉烯耐药表型的临床株,即碳青霉烯耐药的高毒力肺炎克雷伯菌(CR-hvKP)被分离出并导致难以治愈的侵袭性感染,甚至在医院内暴发流行。本文主要针对其流行病学特点及对碳青霉烯类抗生素的耐药机制进行总结。目前ST11-CR-hvKP在我国流行率最高。CR-hvkp主要是通过移动遗传元件如质粒、整合接合元件(ICE)、整合子、插入序列(IS)和转座子在细菌中转移耐药基因和毒力基因。同时CR-hvKP的环境定植以及由此导致的感染和传播风险无疑对感控工作带来巨大挑战。对于碳青霉烯耐药的高毒力肺炎克雷伯菌(CR-hvKP)的临床特点和耐药机制的深入研究有助于寻求可行的方法来根除或阻止菌株的进一步进化和播散。

志贺菌主动外排系统对氟喹诺酮类抗生素耐药性的影响

目的探讨主动外排系统AcrAB—TolC在志贺菌对氟喹诺酮类抗生素耐药性中的作用。方法K．B纸片扩散法及MIC测定2009-2011年天津地区临床分离的144株志贺菌的药敏情况；加入泵抑剂UCCCP（羰基氰氯苯腙）检测耐药菌株对氟喹诺类抗生素敏感性的变化；应用定量PCR研究外排泵基因acrAB-tolC表达以探讨外排泵在菌株对氟喹诺酮耐药中的作用。结果144株志贺菌中，共有5株志贺菌对环丙沙星等氟喹诺酮类抗生素耐药，均为福氏志贺菌。加入泵抑制剂后，5株志贺菌对5种氟喹诺酮类抗生素的MIC下降了4-16倍，而对照菌株对上述药物的MIC没有变化或仅下降至原值的1／2。实时定量PCR结果表明耐药菌株外排泵基因acrA、ac坷和细，c的mRNA水平显著高于敏感野生株（P〈0．05）。结论本地区志贺菌临床株对氟喹诺酮类抗生素环丙沙星及氧氟沙星耐药率最高，为3．47％。AcrAB-TolC外排泵基因的高表达是导致志贺菌对氟喹诺酮类抗生素耐药的主要原因之一。

志贺菌临床株耐药性分析及对氟喹诺酮类抗生素耐药机制的研究

目的:了解本地区志贺菌抗生素耐药情况,探讨志贺菌对氟喹诺酮类药物的耐药机制和耐药基因的突变及流行情况。方法:K-B纸片扩散法测定2009—2010年天津地区临床分离的119株志贺菌的药敏情况,对氟喹诺酮耐药志贺菌的gyrA、parC基因及质粒介导的喹诺酮耐药(PMQR)基因qnrA、qnrB、qnrS、aac(6′)-ib-cr、qepA进行扩增、测序,将PMQR阳性菌株与大肠埃希菌J53ARZ进行质粒接合试验,比较接合前后受体菌对抗菌药物的敏感性变化。结果:119株志贺菌对萘啶酸敏感率最低(1.72%),其次为氨苄西林(2.52%)及复方磺胺甲口恶唑(3.36%)。福氏志贺菌与宋内氏志贺菌对氟喹诺酮耐药性差别较大,5株志贺菌对环丙沙星等氟喹诺酮耐药,均为福氏志贺菌,其中2株对左氧氟沙星耐药。4株同时存在gyrA83、87位点及parC80位点突变,1株缺乏gyrA87位点突变。PMQR基因阳性菌3株,包括1株qnrS及2株aac(6′)-ib-cr阳性菌,接合菌对多种抗生素的敏感性降低。结论:本地区志贺菌临床株对多种抗生素的多重耐药率较高,对氟喹诺酮耐药率低于5%。喹诺酮耐药机制既有染色体介导靶位酶突变,也存在质粒介导喹诺酮耐药。

临床诊断成人细菌性痢疾414例的流行病学、临床及病原学特征

目的了解某地区细菌性痢疾的临床及流行病学特点、致病菌群分布及耐药情况。方法以2010年7—9月就诊于某院肠道门诊的414例临床诊断细菌性痢疾患者为研究对象,对患者一般资料、症状体征、病原检测等结果进行统计分析。结果临床诊断细菌性痢疾患者以青壮年居多(50岁以下者322例,占77.78%);左下腹压痛、脓血便、里急后重等典型临床表现较少见;志贺菌培养阳性率为16.43%(68/414),其中宋内志贺菌65株(95.59%),福氏志贺菌3株(4.41%)。志贺菌株对氨苄西林、复方磺胺甲口恶唑、庆大霉素等耐药率均>95%,甚至高达100.00%;对头孢菌素及部分喹诺酮类抗菌药物敏感,但对环丙沙星、洛美沙星敏感性较以往下降。结论该地区临床诊断细菌性痢疾患者的临床和流行病学特点较以往有所不同,志贺菌流行菌型变迁、耐药菌株增加,应引起医务工作者注意。

天津地区耐甲氧西林葡萄球菌的分子流行病学研究

目的:了解天津地区葡萄球菌的耐药状况、分子分型及遗传学特点。方法:受检菌株94株,抗生素药敏试验测定;应用PCR及多重引物PCR技术对耐甲氧西林葡萄球菌中的葡萄球菌盒染色体mec(SCCmec)以及盒染色体重组酶基因(ccr)进行基因分型;8株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)进行脉冲场凝胶电泳分型;6株做多位点测序分型(MLST)。结果:8株MRSA对包括苯唑西林在内的多种抗生素耐药,但MRSA和耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌(MRCNS)对糖肽类和新的抗革兰阳性菌药物均敏感;天津地区MRSA多含有Ⅲ型SCCmec,MLST分型以ST239为主;MRCNS中的SCCmec类型复杂,用现有的方法大多不能分型。结论:天津地区葡萄球菌中耐药情况较为严重,本地区MRSA所携带的SCCmec并非来自MRCNS,而MRCNS含有更为复杂的SCCmec。

志贺菌属外排泵AcrAB-TolC及其调控基因突变与氟喹诺酮耐药性的关系

目的探讨临床分离耐氟喹诺酮志贺菌外排泵Acr AB-Tol C基因及其调控基因mar OR、acr R、sox S突变与耐药性的关系。方法使用K-B纸片扩散法筛选临床耐药菌,测定加入泵抑制剂羰基氢氯苯腙(CCCP)后萘啶酸、左氧氟沙星、氧氟沙星、环丙沙星、诺氟沙星的最低抑菌浓度(MIC)的变化,PCR扩增外排泵基因acr A、acr B及其调控基因mar OR、acr R、sox S并测序。结果 159株志贺菌中共筛选出11株氟喹诺酮耐药菌株;加入质子泵抑制剂后2株耐药菌株对氟喹诺酮类抗菌药的MIC下降;7株耐药菌对氟喹诺酮类抗菌药的MIC不变;2株耐药菌对氟喹诺酮类抗菌药的MIC上升。基因测序发现氟喹诺酮耐药菌株外排泵Acr AB-Tol C调控基因mar OR第36、37、38、39位存在CATT碱基缺失。结论泵抑制剂可部分抑制外排泵的活性。mar OR突变可能与志贺菌对氟喹诺酮类抗菌药耐药有关。

天津部分地区志贺菌临床株血清分型及抗生素耐药性分析

目的:比较天津部分地区不同时期分离的志贺菌临床株的血清型及耐药状况。方法:应用志贺菌分型血清对不同时期分离的154株志贺菌临床株进行分型,并采用K-B纸片扩散法测定其对12种抗生素的药敏情况。结果:2009-2011年分离的宋内志贺菌占90.91%(140/154),较上世纪80年代初明显增加,成为近年来的优势菌群。药敏结果示1981-1983年分离的志贺菌仅对四环素、链霉素耐药率较高,分别为93.10%(27/29)、72.41%(21/29),对三代头孢、亚胺培南、阿米卡星及喹诺酮类药物100%敏感。2009-2011年分离的志贺菌除了对四环素、链霉素耐药率仍较高外,对氨苄西林、庆大霉素、复方磺胺甲恶唑的耐药率也出现了不同程度的升高,分别为96.75%(149/154)、77.27%(119/154)、96.10%(148/154)。福氏志贺菌对部分三代头孢、诺氟沙星的耐药率高于宋内志贺菌,对庆大霉素的耐药率低于宋内志贺菌,二者对其他抗生素的耐药率相仿。2009-2011年分离的志贺菌多重耐药率为96.10%(148/154),明显高于1981-1983年分离株(31.03%,9/29)。结论:近年来天津市部分地区志贺菌优势菌型以宋内志贺菌为主,有逐渐多样化趋势,耐药率也发生了显著变化,并且多重耐药情况日趋严重。

耐三代头孢菌素阴沟肠杆菌临床株中CTX-M型ESBLs与Ⅰ类整合子的相关性

目的研究CTX-M型超广谱β内酰胺酶(ESBLs)及Ⅰ类整合子在耐三代头孢菌素阴沟肠杆菌中的分布,进一步探讨Ⅰ类整合子与CTX-M型ESBLs的关系。方法运用K-B法检测阴沟肠杆菌临床株的耐药表型,双纸片协同试验(DDST)初筛产ESBLs的菌株,聚合酶链反应(PCR)扩增确证产CTX-M型ESBLs和含有Ⅰ类整合子的临床菌株,套式PCR及序列测定寻找携带CTX-M型ESBLs基因盒的Ⅰ类整合子。结果37株耐药菌中,21株菌产生CTX-M型ESBLs;20株菌含有Ⅰ类整合子;在13株同时产生Ⅰ类整合子和CTX-M型ESBLs的临床株中,3株菌CH4、CH11和Q1的CTX-M型ESBLs基因盒分布在Ⅰ类整合子上。结论Ⅰ类整合子的存在增加了ESBLs在临床株中水平播散的危险,是造成多重耐药株在院内暴发流行的重要原因。

marA-soxS-rob调控系统对不同时期宋内志贺菌多重耐药性变迁的影响

志贺菌是导致细菌性痢疾的病原体，每年约有1．65亿人感染此病，尤其在发展中国家，细菌性痢疾已成为影响全球公共健康卫生的重要问题。自20世纪70年代以来，抗菌药物的广泛应用导致志贺菌的耐药率逐年上升，多重耐药菌株比例随之增多。细菌外排泵表达水平的提高可导致多种抗菌药物在其胞内浓度下降，包括β-内酰胺类抗菌药物、大环内酯类、四环素、氯霉素和喹诺酮类抗菌药物，从而导致细菌产生多重耐药性。

AcrAB-tolC外排泵及marA-soxS-rob调控系统对福氏志贺菌环丙沙星耐药性的影响

目的 探讨AcrAB-tolC外排泵及mar A-soxS-rob调控系统对福氏志贺菌环丙沙星耐药性的影响.方法 连续收集45株2009至2013年分离自天津地区多家三级甲等医院肠道门诊患者粪便样本的福氏志贺菌.采用改良Kirby-Bauer纸片扩散法对菌株进行药物敏感性试验.随机选择10株环丙沙星耐药株和10株环丙沙星敏感株,分析其靶位酶基因（gyrA和parC）,质粒介导的喹诺酮耐药基因（PMQR）,外排泵基因（acrA和acrB）及调控基因（marA、soxS和rob）的携带情况,并进行序列分析.通过泵抑制剂羰基氰氯苯腙（CCCP）抑制试验检验外排泵基因及调控基因对菌株最低抑菌浓度（MIC）的影响,同时应用实时荧光定量PCR（RT-PCR）方法检测外排泵基因及调控基因的表达水平,并采用t检验比较这些基因在环丙沙星耐药株和敏感株中表达水平的差异.结果 10株环丙沙星耐药株均存在gyrA和parC突变,环丙沙星耐药株CR2同时携带qnrS1,环丙沙星耐药株CR5同时携带aac（6＆#39;）-Ib-cr基因.10株环丙沙星敏感株均未检测到外排泵基因及调控基因突变;而10株环丙沙星耐药株中,除CR10外,其余菌株均检出soxRS突变.加入CCCP后,喹诺酮类药物对10株环丙沙星耐药株的MIC均下降至原值的1/4 ～ 1/8,而对10株环丙沙星敏感株的MIC无变化或仅下降至原值的1/2.与环丙沙星敏感株相比,环丙沙星耐药株acrA、acrB、marA和soxS基因的表达水平明显升高（P ＜0.05或P＜0.01）.结论 外排泵机制可能在福氏志贺菌对环丙沙星耐药中发挥重要作用,mar A-soxS-rob调控系统发挥着调节泵基因表达的作用,且soxRS基因序列的改变可能是影响此调控系统的重要原因.

在MRSA中鉴定出变异型SCCmec遗传元件

近年来，耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（methicillin resistant Staphylococcus aureus，MRSA）所致感染的发生率无论在医院内或社区中都有很快的上升，给临床治疗带来极大的困难。我们应用PCR及多重引物PCR技术、脉冲场凝胶电泳分析和多位点序列分型（muhilocus sequencing typing，MIST）对8株临床分离的MRSA菌株进行SCCmec及ccr基因的分子分型，分析并了解本地区MRSA的主要型别特点及其遗传背景。