鸡伤寒沙门菌减毒株1009ΔspiCΔcrp的保护效力评价

目的为研制安全有效的鸡伤寒沙门菌减毒活疫苗,该实验对鸡伤寒沙门菌减毒株1009ΔspiCΔcrp的安全性及保护力进行观察。方法以1×108集落形成单位的1009ΔspiCΔcrp对3日龄雏鸡口服免疫,在7 d后进行再次免疫,测定雏鸡的体质量变化、血清抗体水平和细胞因子水平,并对SG9强毒株攻毒后的保护力进行评价。结果免疫组鸡的体质量增长与对照组无明显差异,血清IgG水平持续上升并显著高于对照组,白细胞介素4(IL-4)、IL-6和IL-1β的水平也升高。以SG9强毒株攻击后,免疫组的保护率为100%,而对照组为20%。HE染色结果显示,免疫组鸡无病变,而对照组鸡脏器病变明显。结论1009ΔspiCΔcrp具有良好的安全性和免疫原性,是防治鸡伤寒理想的疫苗候选株。

沙门菌分型技术研究进展

沙门菌在自然界广泛分布,是人和动物常见的病原菌,可引起人和动物伤寒、副伤寒、胃肠炎、败血症和局部感染等多种疾病。沙门菌分型方法分为以表型特征为依据的表型分型和以基因或基因组结构特征为依据的分子分型。本文不仅回顾了传统的分型方法,还重点介绍了最近发展迅速的多种分子分型方法,可为沙门菌的分型研究提供参考。

鸡白痢沙门菌中三型分泌系统-2效应蛋白基因分布研究

为了解鸡白痢沙门菌中三型分泌系统-2（T3SS2）效应蛋白基因的分布情况。本研究采用PCR方法检测了在1962~2013年间从我国分离的237株鸡白痢沙门菌中25个T3SS2效应蛋白基因的分布特征;同时,通过序列比对分析了这25个基因在18株不同血清型沙门菌中的流行特征,它们的全基因组序列来自GenBank。PCR结果显示,在这237株菌株中,cigR、pipB、pipB2、slrP、sopD、sopD2、spiC、sseF、sseG、sseJ、sseK1、sseL、steA、steB、steC和steD均存在,gogB和sspH1均缺失,其它基因分布水平在5.9%~99.6%之间。序列比对分析结果显示,有15个基因在这18株菌株中均存在,sifB、sseK1、sspH2和steC在一些菌株中是假基因。结果表明,gtgE、sseI和sseK2在这237株菌株中分布具有一定的年代规律性;大部分被检测基因在鸡白痢沙门菌中具有广泛分布;一些基因在微进化过程中形成了假基因。

鸡伤寒沙门菌双基因缺失株1009ΔspicΔcrp的构建及鉴定

为研制安全有效的鸡伤寒沙门菌减毒株,首先利用自杀质粒介导的同源重组技术构建鸡伤寒沙门菌1009株的spic基因缺失株1009Δspic,在此基础上,运用λ噬菌体同源重组系统进一步敲除crp基因,以构建鸡伤寒沙门菌双基因缺失株1009ΔspicΔcrp。PCR和测序鉴定结果表明,成功构建出双基因缺失株1009ΔspicΔcrp。生物学特性研究结果显示,1009株spic和crp基因的缺失能够得到稳定的遗传,部分生化特性发生了变化,生长速度较缓慢,对雏鸡的LD50升高了107倍。本研究获得的高度安全的鸡伤寒沙门菌减毒株为进一步研制鸡伤寒沙门菌减毒疫苗奠定了基础。

肠炎沙门菌lpfC基因缺失株的构建及基本生物学特性研究

[目的]为研究与Lpf菌毛合成相关的lpfC基因对肠炎沙门菌致病性的影响。[方法]利用自杀质粒介导的同源重组技术构建肠炎沙门菌C50041株的lpfC基因缺失株C50041ΔlpfC,并进行PCR和测序鉴定。同时,将lpfC基因克隆至质粒pBR322并电转入缺失株中,构建回复株C50041ΔlpfCR。比较野生株C50041、缺失株C50041ΔlpfC及回复株C50041ΔlpfCR的基本生物学特性。[结果]成功构建了缺失株C50041ΔlpfC及回复株C50041ΔlpfCR,且lpfC基因的缺失不影响C50041的生长特性和生化特性。该缺失株具有良好的遗传稳定性,但缺失株对BALB/c小鼠的LD50是野生株的2倍。[结论]lpfC基因的缺失使肠炎沙门菌对BALB/c小鼠的毒力降低,为进一步研究肠炎沙门菌Lpf菌毛的功能奠定了基础。

雏沙门菌S06004株毒力岛1缺失株的构建及其基本生物学特性的测定

为了解毒力岛1(SPI1)对雏沙门菌致病性的影响,初步探索研制安全有效的雏沙门菌减毒株,采用λ-red同源重组系统成功构建了雏沙门菌S06004株的SPI1(约40kb)缺失株S06004ΔSPI1。进一步的生物学特性研究显示,SPI1的缺失不影响雏沙门菌的生化特性和生长特性,且该缺失株具有良好的遗传稳定性,它对3日龄雏鸡的LD50是野生株的21倍。结果表明,SPI1的缺失则引起雏沙门菌毒力明显下降,这为进一步研究雏沙门菌SPI1的功能及制备减毒活疫苗奠定了一定的基础。