NLRP3-CAMKⅡ-IRE-1α通路激活诱导氧化应激增强对糖尿病大鼠心室重构的影响

目的探讨核苷酸结合寡聚结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎性小体通过钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)激活肌醇需求激酶-1α(IRE-1α)促进氧化应激增强在糖尿病大鼠心室重构中的作用及机制。方法36只健康雄性Sprague-Dawley大鼠按随机数字表法分为对照组(CTL组)、糖尿病组(DM组)和糖尿病+格列苯脲组(GLB组),每组12只。大鼠通过单次腹腔注射55 mg/kg链脲佐菌素制备糖尿病模型,GLB组于造模成功后给予NLRP3抑制剂格列苯脲(1.25 mg/kg),连续灌胃8周。CTL组不进行任何干预。8周后记录各组血糖、血压、体质量,计算心室体质量比,测量血流动力学指标;心脏超声检查评估肺动脉血流加速时间、平均肺动脉压、收缩期与舒张期室间隔、心室前壁和心室后壁厚度;心外膜激活映射标测进行心外膜传导速度、绝对不均匀性和不均匀指数测定;采用蛋白免疫印迹检测NLRP3、胱天蛋白酶(caspase)-1、CaMKⅡ、IRE-1α、还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶(NOX)2、NOX4的蛋白水平;荧光染色法测定活性氧(ROS)含量;HE及Masson染色观察心室组织细胞形态和纤维化。结果与CTL组相比,DM组的血糖升高,心室体质量比增大,收缩期和舒张期室间隔厚度、左心室前壁厚度增加,体质量降低,左、右心室心外膜传导速度减慢,右心室不均匀指数增加,NLRP3、caspase-1、CaMKⅡ、IRE-1α、NOX2和NOX4蛋白表达水平升高,心室肌ROS产生增多,CVF升高(P<0.05),心室肌细胞排列紊乱,纤维化更明显;与DM组比较,GLB组收缩期和舒张期室间隔厚度、左心室前壁厚度降低,左、右心室心外膜传导速度增快,左心室绝对不均匀性和不均匀指数降低,NLRP3、caspase-1、CaMKⅡ、IRE-1α、NOX2和NOX4蛋白表达水平下降,ROS产生减少,CVF降低(P<0.05),心室肌纤维化程度减轻。结论糖尿病大鼠心室肌细胞NLRP3-CAMKⅡ-IRE-1α通路激活,促进氧化应激增强,参与心室重构,GLB可改善此变化。

中等强度恒定磁场作用下的神经元钠通道特性

为了从离子通道的角度研究中等强度恒定磁场(静磁场)对神经细胞的影响,利用线圈及磁铁产生3 mT、30 mT和100 mT的恒定磁场,作用于急性分离的小鼠前额叶皮层锥体神经元,应用全细胞膜片钳技术精密测量其钠通道的电流情况.实验发现:不同中等强度的恒定磁场均使神经细胞钠通道激活电位向超极化方向移动,钠电流峰值随磁场强度、暴露时间的改变而不同程度地增大.100 mT恒定磁场作用可改变激活和失活过程,使激活/失活曲线的半数激活/失活电压和斜率因子发生变化(激活曲线的半数激活电压由(-33.73±0.42)mV变为(-37.06±1.03)mV,斜率因子由(4.19±0.32)mV变为(6.79±0.93)mV,而失活曲线的半数失活电压由(-54.35±0.46)mV变为(-51.43±0.36)mV,斜率因子由(6.54±0.40)mV变为(7.31±0.31)mV).结果表明,3 mT、30 mT和100mT恒定磁场均可改变神经元钠通道特性,从而影响神经元的生理功能.本实验为深入探讨恒定磁场对细胞离子通道的影响与作用提供了一定的实验基础.

一株木霉可湿性粉剂的载体和润湿分散剂初步研究

采用菌丝生长速率测定法和孢子萌发率法,对可湿性粉剂中常用的几种载体、润湿剂和分散剂与一株生防木霉(酷绿木霉Trichoderma atroviride P.Karsten)TR1的生物相容性进行了研究。结果表明:5种载体中,高岭土、滑石粉、活性白土与TR1具有较好的生物相容性;8种润湿剂中,吐温80对TR1菌丝生长和孢子萌发影响较小,与对照相比无显著差异;而4种分散剂中有3种(亚甲基二萘磺酸钠、聚乙烯醇和聚乙二醇)与TR1具有良好的生物相容性。

昭通天麻种子萌发菌的筛选

自昭通本地野生乌天麻原球茎上分离获得的两株天麻种子萌发菌(SNm-01、SNm-02)。研究了它们的生长特性及促进天麻种子萌发的效果。结果显示,两株菌的生长特性相似,在PDA上生长时,菌落白色、绒毛状,菌丝分枝、无色透明,具有分隔和锁状联合,均具有气生菌丝。SNm-01菌落生长速度较快,室内促天麻种子萌发效果好。与传统的天麻种子播种方法相比,SNm-01在野外林间大田萌发试验中表现优良,天麻种子的萌发率较高,空穴率为零,原球茎平均这100个/塘,而且对萌发后原球茎的生长也具有较好的促进作用,所以菌株SNm-01是一株优良的昭通本地萌发菌。

1株生防木霉菌可湿性粉剂中助剂的筛选

继初步研究酷绿木霉TR1与多种常用载体和润湿分散剂的生物相容性后,通过菌丝生长速率测定法和孢子萌发率法进一步对与TR1有良好生物相容性的稳定剂、紫外保护剂和保水剂进行筛选。结果表明:4种稳定剂中,CMC-Na对TR1菌丝的生长无明显影响,在低浓度下对孢子萌发的影响与对照没有显著差异;5种紫外保护剂中,糊精和黄原胶对TR1菌丝生长和孢子萌发没有影响,与TR1具有良好的生物相容性;保水剂在碳源不充足的情况下可给菌丝的生长提供碳源,在含保水剂的培养基上,空气湿度对孢子萌发的影响较小。

4个天麻品种种植效果对比研究（英文）

[目的]为不同地区天麻的栽培及药用开发提供理论基础。[方法]以4个天麻品种乌天麻、红天麻、绿天麻和乌红杂交天麻试材,采用箱栽的种植方法和毛细管电泳检测法,对比分析了4个天麻品种在相同条件下的种植效果及毛细管电泳测定的生化指纹图谱。[结果]种植5个月后米麻数量上不存在显著差异,米麻生长势最好的是红天麻;种植17个月后产生的白头麻数量上不存在显著差异,白头麻的重量上存在着明显差异,重量最大的是红天麻,均值达到3 042.20 g。4个天麻品种种植17个月后的白头麻采用毛细管电泳测定的生化指纹图谱中可见4个较大的峰,其中峰4与峰1的特征明显,乌天麻峰4与峰1面积比≥1,未表现出种内变异。[结论]对乌天麻生长适宜环境和变异发生时期的研究可以为天麻栽培提供理论基础。

珍稀濒危植物珙桐研究进展

珙桐是我国特有的珙桐科单属植物,是国家一级保护植物和世界著名观赏植物,具有极高的观赏价值、特殊的科学研究价值和较高的经济价值。本文对珙桐的自然分布和生物学特性、繁育研究、植物化学成分和分子生物学遗传信息4个方面进行了综述,并对未来的研究进行了展望。

天麻共生萌发菌栽培种生产工艺条件优化

经试验对天麻共生萌发菌MY-001的栽培种生产的工艺条件进行了优化,结果显示,既能降低生产成本又能提高生产效率的液体发酵条件为:液体菌种培养器的气压为0.020MPa,发酵液主要成分中红糖、麦麸和蛋白胨的最佳比例为红糖10g/L、麦麸15g/L、蛋白胨1g/L,萌发菌菌丝生物量随时间的变化符合逻辑斯蒂增长模型,其观测值与逻辑斯蒂方程拟合值的拟合度较高(R2=97.7%),发酵培养144h后生物量趋于稳定,栽培种基质最合适的比例为壳斗科植物树叶60%、阔叶树木屑30%和麦麸10%。

光叶珙桐内生真菌的分离及其多样性研究

以光叶珙桐(Davidiainvolucratavar.vilmoriniana)为研究对象,分离了62株珙桐内生真菌,并根据菌株形态学方法,对分离的内生真菌进行了种属鉴定和多样性分析。结果表明,42株珙桐内生真菌分属于6个属,shannon多样性指数为1.52。

昭通乌天麻共生萌发菌优良菌株筛选试验

研究了自昭通本地分离获得的4株天麻共生萌发菌的生长特性和对昭通乌天麻产量的影响,并与一株外地优良天麻共生萌发菌8103进行了对比。结果表明:各菌株间存在明显差异,菌丝平均生长速率和生物量依次为8103>MH-013>MY-001>XCB017>MY-002;室内萌发试验显示拌种乌天麻种子后萌发效果依次为MY-001>MH-013>8103>MY-002>XCB017,拌种MY-002后种子的生长势最好,MY-001次之;大田栽培试验表现最好的是MH-013,其次为MY-001和8103,MY-002和XCB017较差。4株昭通天麻共生萌发菌中MH-013和MY-001较适合在昭通乌天麻有性繁殖生产中大面积推广。

昭通天麻多糖含量测定及超声辅助提取条件优化

采用苯酚—硫酸法对昭通天麻多糖含量测定,结果显示:在490nm波长处测定吸光度,在浓度0～0.0175mg/mL线性关系良好,建立回归方程y=79.186x+0.0005(r=0.9990);经精密度、稳定性、加标回收率以及重现性等实验证明,该方法可用于天麻多糖含量的测定。通过正交实验研究昭通天麻多糖的超声提取条件,并采用苯酚—硫酸法对多糖含量进行测定,超声辅助提取的最佳提取条件组合为:提取温度45℃,提取时间55min,料液比1∶35(g/mL)。

乌天麻仿野生高产栽培技术

阐述了乌天麻的栽培技术,主要包括栽培地点的选择、栽培时期、菌材准备、麻种的选择、栽培方式、田间管理和采收等。

异丙肾上腺素对兔离体颈上神经节神经元延迟整流钾通道特性的影响

目的探讨异丙肾上腺素（ISO）对兔离体颈上神经节（SCG）神经元延迟整流钾通道电生理学特性的影响。方法选取无特定病原体级雄性大耳白兔幼兔共8只，通过急性分离方法获得单个的SCG神经元，采用全细胞膜片钳技术记录神经元在正常状态（对照组，n=10）、ISO 10 μmol/L直接作用20~60 min（ISO作用组，n=10）以及ISO 10 μmol/L作用60 min并洗脱30 min后（ISO洗脱组，n=10）延迟整流钾通道电流（IK）特性的变化，观察指标包括IK曲线、IK的I-V曲线及稳态激活曲线。结果ISO作用组较对照组的IK曲线幅度明显增大，而ISO洗脱组的IK曲线幅度接近对照组水平。对照组、ISO作用组和ISO洗脱组的最大峰值电流密度分别为（81±23）、（201±81）、（105±18）pA/pF；其中ISO作用组明显高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）；ISO洗脱组与对照组比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。对照组、ISO作用组和ISO洗脱组的半数激活电压分别为（9.86±0.40）、（3.61±0.28）、（6.56±0.26）mV，斜率因子分别为（19.66±0.53）、（15.63±0.33）、（15.12±0.31），3组间比较差异无统计学意义（P＞0.05）。结论ISO的作用会对SCG神经元IK的特性产生影响，使峰值电流浓度增大及激活曲线发生移动，但这种影响具有可逆性。

一株木霉菌SWFC1511原生质体形成及再生条件的研究

研究了一株木霉菌SWFC1511菌株原生质体的制备及再生条件,并观察其原生质体释放过程。结果表明:木霉菌SWFC1511原生质体制备的最佳条件为:菌丝培养20 h后,用比例为1∶3的2%溶菌酶与2%蜗牛酶为酶解液,在35℃下酶解3 h后,原生质体的产量较高。所形成的原生质体在再生培养基1上的再生率较高。

应用多目标决策法对天麻种子萌发菌的评价

研究了5株萌发菌菌株的7个单一性状,结果显示,不同菌株各性状存在明显差异。为避免采用单一性状指标判断菌株的优劣造成偏差,运用基于熵权的多目标决策分析模型,结合模糊数学和熵的思想,对菌株进行综合评价,结果显示,5株萌发菌菌株由优到劣依次为MY-001>MH-013>8103>MY-002>XCB017,为优良菌株的筛选提供了理论依据。

小鼠海马神经元急性分离和膜片钳技术的应用

为了获得适用于膜片钳实验技术的单个海马神经元,应用酶消化及机械分离法,急性分离出生10～13 d的昆明小鼠得到单个海马神经元.通过倒置显微镜直接观察和全细胞膜片钳技术分别对分离得到的海马细胞的形态学和电生理学特征进行研究.通过实验可得,急性分离所得活性较好的海马神经元胞体具有锥形胞体和顶树突特征,立体感强.在全细胞膜片钳记录模式下可记录到全细胞电流及钠、钾通道电流.由实验结果可知,该方法可以得到形态和生理特征良好的单个海马神经元,证实该方法适用于膜片钳技术的研究,对深入探讨药物、物理因子等对海马离子通道及信号转导机制的作用有重要的应用价值.

脉冲磁场对神经元瞬时外向钾电流的影响

实验研究了脉冲磁场对小鼠皮层细胞的瞬时外向钾离子通道的影响。采用频率为15 Hz、强度为1.4 mT的超低频脉冲磁场对小鼠的脑皮层神经细胞进行刺激,而后应用全细胞膜片钳技术测量其瞬时外向钾电流特性。实验发现,超低频脉冲磁场对瞬时外向钾电流IA有一定的抑制作用,脉冲磁场作用可显著地影响通道的激活,对照组和脉冲磁场作用组通道半数激活电压分别为(13.25±2.22)mV和(30.98±4.11)mV(n=6,P<0.05),斜率因子分别为(24.00±2.05)mV和(23.30±2.13)mV(n=6,P>0.05)。结果表明,脉冲磁场作用皮层神经细胞可以改变其瞬时外向钾通道的特性,调节神经元的生理功能。

2株优良天麻共生蜜环菌生长条件筛选

筛选出2株昭通本地天麻共生蜜环菌(SNA03、SNA04)菌索生长的最佳条件。采用单因素试验和正交试验法进行筛选,以生物量为考察指标。2株菌菌索生长的最适温度为25℃,暗培养下菌索生长速度最快;单糖(葡萄糖)为2菌株生长的最佳碳源,有机氮中的酵母膏和蛋白胨为最佳氮源,最适无机元素为K2SO4(SNA03)和KH2PO4(SNA04),最适维生素为VB2;最佳营养条件组合为葡萄糖∶酵母膏∶K2SO4(SNA03)或KH2PO4(SNA04)∶VB2=15g·L-1∶3g·L-1∶2g·L-1∶0.005g·L-)1,氮源(酵母膏)是影响菌索生长的最主要因素。来自昭通的2株天麻共生蜜环菌对营养和环境条件的要求基本一致。最佳生长条件的确定,对昭通蜜环菌快速工业化制种及天麻的大规模生产将起到一定的推动作用。

恒定磁场对神经元延迟整流钾通道特性的影响

为了研究中等强度恒定磁场(静磁场)对神经细胞离子通道特性的影响,利用线圈及磁铁产生3 mT、30.mT和100.mT的恒定磁场,作用于急性分离的小鼠额叶皮层锥体神经元,应用全细胞膜片钳技术研究其延迟整流钾通道特性.实验发现,中等强度恒定磁场使神经细胞延迟整流钾通道电流峰值减小.磁场作用可显著改变激活过程,使激活曲线的半数激活电压和斜率因子发生改变.结果表明,3 mT、30.mT和100.mT恒定磁场可改变神经元延迟整流钾通道特性,从而影响神经元的生理功能.

低功率2450MHz射频磁场对神经元延迟整流钾通道的抑制作用

由于电子设备的广泛使用,人类已经越来越多地暴露在射频磁场的辐射下,但射频磁场的辐射效应却一直不明确.采用全细胞膜片钳技术,记录2 450 MHz射频磁场辐射对小鼠脑皮层神经元延迟整流钾电流IK的影响.利用Ansoft HFSS软件对6 dB全向天线建模仿真,验证距天线2～3 cm处磁场分布均匀,使用Agilent E5070B网络分析仪经该天线发射出2 450 MHz输出功率为39.81mW电磁场,对细胞进行刺激.实验发现,2 450 MHz低功率射频磁场暴露5、10和15 min对IK均有明显的抑制作用;显著影响IK激活特性,对照组与磁场暴露组半数激活电压分别为(-1.13±2.32)mV和(19.52±1.03)mV(n=10,P<0.05);斜率因子分别为(23.21±3.29)mV和(13.95±1.27)mV(n=10,P<0.05).结果表明,低功率射频磁场通过减小延迟整流钾通道电流,影响神经元的生理功能,为进一步研究电磁辐射所引发的生物学效应提供了一种新的方法.