SPARCL1在动脉粥样硬化斑块形成中的作用研究

目的探讨富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白类似蛋白1(SPARCL1)对动脉粥样硬化(AS)斑块形成的影响。方法采用病例对照研究,选取394例AS确诊患者作为病例组,年龄、性别相匹配的394例健康对照者作为对照组。利用酶联免疫吸附试验测定血清SPARCL1表达水平;免疫组织化学实验评估SPARCL1蛋白在AS斑块区的表达水平及定位,同时检测AS患者和正常对照人群外周血的中性粒细胞及单核细胞的SPARCL1蛋白表达情况;构建SPARCL1过表达及抑制表达的重组腺病毒载体,以小鼠巨噬细胞(J774A.1)为靶细胞,进行细胞划痕实验观察SPARCL1对细胞迁移的影响。结果AS患者组的血清SPARCL1水平低于健康组(P<0.05);在AS斑块中检测到SPARCL1高表达,且主要表达在泡沫细胞胞浆;AS患者的外周血中性粒细胞及单核细胞SPARCL1表达水平低于正常对照(P<0.05);SPARCL1过表达及抑制表达的重组腺病毒构建成功;抑制SPARCL1表达的J774A.1细胞中的细胞迁移率降低,过表达SPARCL1的J774A.1细胞中的细胞迁移率增加(P<0.05)。结论SPARCL1在AS病变部位泡沫细胞高表达,这可能来自于外周血单核细胞和中性粒细胞的代偿性募集,SPARCL1可能作为血管保护因子参与抑制AS斑块的发生发展。

SPARCL1基因多态性与动脉粥样硬化遗传易感相关性分析

目的探讨富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白类似蛋白1(SPARCL1)的单核苷酸多态性(SNP)位点rs7695558、rs1049539与动脉粥样硬化(AS)的遗传易感相关性。方法采用病例对照研究,选取209例AS患者作为病例组,年龄、性别相匹配的208例健康体检者作为对照组。利用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定血清SPARCL1表达水平,使用线性和Logistic回归分析评估SPARCL1水平和血管危险因素、生活方式、人口统计学变量之间的相关性。通过免疫组织化学实验评估发生粥样硬化病变的动脉组织和相对正常动脉组织中的SPARCL1蛋白的表达水平及定位,随后用高分辨率熔解曲线法对51例AS患者和50例健康对照者DNA的SPARCL1基因的两个SNP位点rs7695558(A/G)、rs1049539(T/C)进行基因分型,使用Pearsonχ2检验分别分析rs7695558、rs1049539多态性与AS患者易感性之间的关系。结果AS患者的SPARCL1血清表达水平低于对照组(Z=-2.916,P=0.004)。SPARCL1水平与患者年龄(P=0.027)、舒张压(P=0.008)有关,而与患者的性别及部分心血管危险因素无明显相关(P>0.05)。冠状动脉组织中粥样硬化病变部位的SPARCL1表达水平增高。rs7695558和rs1049539在病例组和对照组间的基因分布差异无统计学意义(P>0.05)。rs7695558的隐性遗传模型中,含A和不含A的基因分布有差异,不含A等位基因(GG)的患者比含A等位基因(AA+AG)的患者的AS发病风险低,OR值为0.417,95%CI:0.184~0.945,在10%的置信水平上显著(P=0.034)。结论首次在中国安徽人群中鉴定了位于人类SPARCL1基因内含子内的与AS风险相关的新易感位点rs7695558,同时提示SPARCL1可能作为血管保护因子发挥抗AS作用。

高脂血症模型兔血清肌酸激酶活性和C反应蛋白含量的动态变化

目的分析兔饮食性高脂血症形成过程中血清肌酸激酶活性和C反应蛋白含量的动态变化。方法高胆固醇饮食诱发兔高脂血症,检测高胆固醇饮食7、14、17、21、25、28d兔血清总胆固醇(CHO)、甘油三酯(TG)及肌酸激酶(CK)和C反应蛋白(CRP)的变化。结果成功建立高脂血症兔模型,大耳白兔在喂食高胆固醇饲料7、14、17、21、25、28d后血液中CHO和TG浓度逐渐升高(P<0.05),CK活性和CRP含量随着高脂血症的进程而逐渐升高,变化有显著性差异(P<0.05)。结论提示兔血清CK活性和CRP含量与高脂血症的进程相关。

消化系统肿瘤与MTHFR基因多态性相关研究

目的研究消化系统恶性肿瘤患者群体中的亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)编码基因677位点多态性发生频率,并考察性别、年龄和体重指数对消化系统恶性肿瘤患者MTHFR基因遗传多态性发生频率的影响。方法选取消化系统恶性肿瘤患者42例,取外周血,采用基因芯片的方法检测MTHFR基因多态性,应用单样本Kolmogorov-Smirnov法进行拟合优度检验,运用χ2检验研究性别对基因型发生频率的影响,运用One-Way ANOVA分别研究年龄和BMI对基因型发生频率的影响。结果 MTHFR C677T的3种不同基因型(野生型CC、突变杂合型CT、突变纯合型TT)在本次研究对象中的优势基因型为CT型(P<0.001),而不同性别、年龄和体重指数对基因型的发生频率差异无统计学意义。结论初步推断,性别、年龄和体重指数可能不是消化系统肿瘤MTHFR基因遗传多态性发生频率的主要影响因素。

乙肝血清学指标多组合模式联合检测的意义

目的探讨乙肝血清学指标多组合模式联合检测的临床意义,为乙肝的诊断和疗效的动态监测提供更准确的临床依据。方法回顾性分析575份疑似乙肝患者的血清学指标检测结果。结果 575例患者血清学指标乙肝6项多组合模式之间HBV-DNA与PreS1Ag存在较高一致性;不能单纯以HBeAg是否阳性作为判断HBV感染、传染性及HBV是否复制的指标;HBsAg、HBsAb可同时阳性;HBsAg阴性时,可检测到HBV-DNA为阳性;HBeAb(+)HBc Ab(+)组别中,有42.86%患者HBV-DNA阳性;肝功能5项指标与对应阴性组相比差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论联合检测乙肝6项、HBV-DNA与肝功能能更好地判断乙肝病毒的复制状态和传染性以及乙肝的疗效评估。

医学检验专业分子诊断学应用型实验整体优化教学研究

分子诊断学是临床检验诊断的重要手段之一,分子诊断学实验技能的训练就直接决定了培养的医学检验学生能否胜任未来的工作,为了实现分子诊断学基本技术与临床诊疗的相互渗透,我们拟进行分子诊断学应用型实验整体优化教学研究,以培养学生分析问题和临床应用能力,并能加以创新。为了后续学科的学习和为培养适应新世纪医学发展要求的高级检验医学人才奠定良好基础,使教学方法和教学内容的运用趋于综合化,不断提高学生的创新科学思维素质,进一步加强学生创新能力和综合分析问题的能力。

临床医学和检验医学本科跨专业教育新模式探讨

目的本科阶段的跨专业教育有望促进未来职业生涯中的良好协作,跨专业教育在临床医生和检验医生之间扮演的作用在本科阶段还没有被探究过。该次教育新模式探讨的目的是评估为临床医学和检验医学专业的学生引入跨专业教育环节是否可以帮助他们消除定型观念,增进对相互专业的理解和尊重,促进专业知识的互补。方法该计划采用课程设置、问卷调查和采访的方式进行,临床和检验医学专业的学生能够一起讨论实验结果,相关文献以及交流开发新诊疗工具的理念。结果受访者大都支持跨专业教育,认为这有助于提升专业间的角色认同感和知识互补,但是两个专业的学生观念还是会存在分歧。临床专业学生的观点较为积极,但是认为检验医学专业的学生沟通方式有障碍。检验医学学生观点较为批判,认为他们的专业角色经常被误解,被定型为"实验室技术员",希望有更明确的学习目标。结论定型观念会阻碍临床医生和检验医生之间的有效协作,应该在本科阶段尽早给予临床医学和检验医学的学生充分有效的跨学科联合教育以消除定型观念的产生,同时更为各自未来专业角色的无障碍沟通打下良好的协作基础。

循环肿瘤DNA的临床应用研究进展

近年来,基因组的深入研究和各种分子生物学新技术的快速发展使得循环肿瘤DNA(ctDNA)的检测分析正在从研究领域向临床应用过渡。大量研究结果表明ctDNA在肿瘤的预测诊断、病情监测和预后判断等多方面显示出广阔的发展前景。ctDNA是肿瘤患者血液中存在的异常的细胞游离DNA(cfDNA),尽管cfDNA的生物学机制还不甚清楚,但ctDNA分析已经开始在临床上应用,这有助于推进肿瘤精准医疗的发展。本文主要从ctDNA的检测方法、ctDNA在肿瘤精准医疗中的应用及ctDNA检测分析面临的挑战等方面进行了综述,以期进一步探讨ctDNA切实可行的临床应用方向。

褪黑素对动脉粥样硬化模型兔动脉肌球蛋白轻链激酶表达及活性的影响

目的探讨褪黑素(melatonin,MLT)对动脉粥样硬化模型兔动脉肌球蛋白轻链激酶(MLCK)表达与活性的影响。方法复制动脉粥样硬化兔模型,采用免疫组化和Western blot分析主动脉MLCK蛋白表达,γ-32P-ATP参入法检测MLCK活性。结果成功建立动脉粥样硬化兔模型,高脂喂食12wk,兔主动脉MLCK蛋白表达水平增加,活性上升,经MLT治疗后动脉粥样硬化斑块减少,MLCK蛋白表达下降,活性下降。结论动脉粥样硬化的形成与MLCK蛋白表达与活性升高有关,MLT能降低动脉MLCK蛋白表达和活性。

安徽汉族冠心病患者CYP2C19基因多态性研究

目的分析安徽地区汉族冠心病患者CYP2C19基因多态性,并比较在不同人群之间基因表型差异与基因频率分布的差异,为冠心病患者个体化用药提供依据。方法采用DNA微阵列芯片技术检测244例安徽地区汉族冠心病患者CYP2C19的基因型及等位基因分布特征。并比较与其他不同地区汉族人群和不同民族之间CYP2C19基因分布多态性的差异。结果 CYP2C19*1、CYP2C19*2和CYP2C19*3 3种等位基因的频率分别为60.66%、31.76%和7.58%;快代谢型(*1/*1)92例,发生率37.7%,中间代谢型112例(*1/*2、*1/*3),发生率45.91%,慢代谢型40例(*2/*2、*2/*3、*3/*3),发生率16.39%。不同性别之间基因型及代谢型分布差异无统计学意义;安徽汉族冠心病人群与健康汉族人群代谢型分布差异无统计学意义;我国不同地区汉族人群快代谢型(P<0.05)及中代谢型分布差异有统计学意义(P<0.05);不同民族在快、中、慢代谢型分布比较差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论安徽汉族冠心病人群CYP2C19位点存在基因多态性,与其他地区汉族人群及各民族之间基因多态性分布存在差异,以中快代谢型为主,为氯吡格雷个体化用药提供参考。

结核分枝杆菌CFP10、ESAT6蛋白的原核表达、纯化及ELISPOT检测方法的建立与应用

以结核分枝杆菌CFP10、ESAT6蛋白原核表达、纯化体系为基础,建立稳定的ELISPOT方法;检测164份疑似结核患者标本的外周血ELISPOT,与临床诊断及T-SPOT·TB结果对比。表达所得重组蛋白浓度和纯度如下:CFP10为0.5 mg/ml,84%;ESAT6为4 mg/ml,98%。ELISPOT方法最佳实验条件为每孔细胞密度2×105/孔,CFP10、ESAT6蛋白抗原浓度分别为10μg/孔,细胞孵育时间20 h。ELISPOT的灵敏度与特异度分别为88.50%、82.35%,检测结果与TSPOT·TB方法结果一致(χ2=0.57)。

褪黑素通过p38／MAPK信号通路调控oxLDL诱导的人脐静脉内皮细胞MLCK的表达

目的探讨褪黑素(MLT)通过p38/MAPK信号通路调控oxLDL诱导的人脐静脉内皮细胞肌球蛋白轻链激酶(MLCK)的表达。方法体外培养人脐静脉内皮细胞(HU-VEC),分空白对照组、DMSO对照组、DMSO+oxLDL组、DM-SO+oxLDL+SB203580组、DMSO+oxLDL+MLT组、DMSO+oxLDL+MLT+SB203580组。RT-PCR、Western blot、γ-32P-ATP掺入法分别检测各组HUVEC MLCK转录、表达和活性及MLT对p38磷酸化的影响。结果RT-PCR显示oxLDL组MLCK转录增强,MLT组与SB203580组均抑制MLCK的转录;Western blot结果表明oxLDL组MLCK表达、p38磷酸化增强,MLT组与SB203580组均抑制MLCK的表达及p38磷酸化;γ-32P-ATP掺入法检测MLCK活性提示oxLDL组MLCK活性增强,MLT与SB203580降低MLCK活性。结论MLT可能通过p38/MAPK通路调控MLCK的转录、表达和活性。

高脂血症对大鼠动脉肌球蛋白轻链激酶活性及表达的影响

目的探讨高脂血症对大鼠动脉肌球蛋白轻链激酶活性及表达的影响。方法胆固醇喂食大鼠4周和12周,颈动脉取血后检测血清标本中血脂成分的变化,免疫组化和Westernblot分析动脉肌球蛋白轻链激酶的表达,γ32P参入法检测动脉肌球蛋白轻链激酶活性。结果血清中各种脂质发生显著变化,大鼠在喂食胆固醇膳食4周和12周后动脉肌球蛋白轻链激酶表达显著增强,肌球蛋白轻链激酶活性显著升高。结论胆固醇对大鼠动脉肌球蛋白轻链激酶的表达与活性变化相关,肌球蛋白轻链激酶表达与活性变化可能是高脂血症形成的因素。

腺样体肥大或伴扁桃体肥大的睡眠呼吸障碍儿童平均血小板体积和血小板分布宽度变化的临床意义

目的探讨腺样体肥大或伴扁桃体肥大的睡眠呼吸障碍(SDB)儿童的平均血小板体积(MPV)和血小板分布宽度(PDW)变化的临床意义。方法选择2018年1月至2019年1月安徽医科大学附属巢湖医院耳鼻咽喉-头颈外科住院患儿99例,均诊断为SDB(腺样体肥大或伴扁桃体肥大),设为病例组。另选取同时期因SDB以外原因(包括先天性耳前瘘管,鼻骨骨折,先天性鳃裂瘘管,颈部良性肿瘤,外耳道异物)而收住入院的51例患儿为对照组,并经过仔细询问病史,否认有SDB,体格检查均无腺样体肥大或伴有扁桃体肥大。记录病例组与对照组的血常规各项指标数值,比较两组血常规相关指标的差异。结果病例组平均血小板体积(MPV)为(10.89±1.30)fL,对照组为(11.38±1.28)fL,差异有统计学意义(P<0.05)。对照组血小板分布宽度(PDW)为[13.60(12.00,15.90)]fL,病例组为[12.70(10.85,15.35)]fL,差异有统计学意义(P<0.05)。其余血常规指标在病例组与对照组间差异均无统计学意义(P>0.05)。Pearson积差相关分析显示,病例组的MPV和PDW均与年龄呈正相关,Spearman秩相关显示,MPV和PDW均与腺样体肥大等级呈负相关。结论MPV和PDW可能作为判断腺样体肥大或伴有扁桃体肥大SDB患儿病情严重程度的潜在指标。

阿伐他汀对高胆固醇血症ApoE基因敲除小鼠肝脏骨桥蛋白表达的影响

目的探讨阿伐他汀对高胆固醇血症ApoE基因敲除小鼠肝脏骨桥蛋白(OPN)表达的影响。方法18只4周龄ApoE基因敲除小鼠,随机分为正常组、高胆固醇组、高胆固醇+阿伐他汀组。高胆固醇+阿伐他汀组给予阿伐他汀5mg/(kg·d),12周后获取血和肝脏。分析血清胆固醇和低密度脂蛋白浓度。肝脏组织切片用于HE染色以观察肝脏组织学病变;应用免疫组化PV法检测肝脏组织中OPN的表达;从冰冻肝脏组织中提取蛋白,用Western blot方法检测OPN变化。结果阿伐他汀有显著降血清胆固醇和抑制肝脏的脂肪病变的作用;免疫组织化学和Western blot检测结果显示,高胆固醇+阿伐他汀组OPN表达比高胆固醇组显著降低(P<0.05)。结论阿伐他汀可降低高胆固醇血症ApoE基因敲除小鼠血清胆固醇浓度,抑制肝脂肪变性,下调OPN的表达。

PFNA治疗高龄股骨粗隆间骨折30例疗效分析

目的：评价应用股骨近端防旋髓内钉（ PFNA）治疗高龄股骨粗隆间骨折患者的临床疗效。方法回顾性分析2011-2013年间应用PFNA治疗高龄股骨粗隆间骨折患者30例的临床资料。结果30例均获得随访，随访时间3～24个月，平均9个月，术后X线定期复查显示骨折均临床愈合，愈合时间为12～19周，平均愈合时间为15周，并发1例下肢深静脉血栓形成。术后进行Harris髋关节评分：优20例，良8例，中2例，优良率93．3％。结论 PFNA是一种新型的髓内固定系统，具有创伤小、术中出血少，术后并发症少、并可早期活动等优点，是高龄股骨粗隆间骨折患者的一种较好的治疗方案。

ESAT-6刺激结核患者CD4^+ T淋巴细胞前后释放IFN-γ mRNA差异表达及信号通路变化

目的利用全基因组表达谱芯片对早期分泌靶向抗原6(ESAT-6)刺激结核患者外周血CD4^+T淋巴细胞前后释放γ-干扰素(IFN-γ)mRNA进行检测,并对mRNA在刺激过程中可能涉及到的信号通路变化进行分析。方法抽取3例初诊结核患者外周静脉血各10 ml,密度梯度离心法分离获得外周血单个核细胞(PBMC),ESAT-6刺激PBMC,6 h后磁珠法分选CD4^+T淋巴细胞,提取细胞总RNA,全基因组表达谱芯片检测刺激前后差异表达基因。利用GO分析对差异表达的基因进行功能分类,KEGG进行信号通路分析。结果 ESAT-6刺激后差异表达的mRNA共有2 297条,相对高表达的mRNA有1 071条,相对低表达的mRNA有1 226条(>2倍变化且P<0.05)。信号通路分析显示差异表达的mRNA参与了17条信号通路的调控,其中JAK-STAT信号通路、Toll样受体信号通路、NF-κB信号通路、MAPK信号通路、PI3K-Akt信号通路等5条信号通路与结核释放IFN-γ关系密切。结论 ESAT-6刺激后的CD4^+T淋巴细胞有大量mRNA发生差异表达,其在多个与结核释放IFN-γ密切相关的信号通路中发挥着重要的调控作用。