SARS-CoV-2 ORF7a通过靶向IKKβ激活NF-κB信号通路促进细胞炎症因子释放

目的:探究SARS-CoV-2辅助蛋白ORF7a介导NF-κB激活,进而诱导炎症因子产生的分子机制。方法:双荧光素酶报告基因试验检测ORF7a对NF-κB激活的影响,qRT-PCR检测ORF7a对细胞中炎症因子表达的影响,Western blot、核质分离及免疫荧光技术检测ORF7a蛋白对p65磷酸化及入核的影响,免疫共沉淀及免疫荧光技术检测ORF7a的作用靶标蛋白。结果:报告基因试验表明ORF7a显著激活NF-κB启动子活性,并呈剂量依赖性(P<0.001),而对AP-1报告基因的激活无明显影响。ORF7a显著上调细胞因子TNF-α、IL-β及IL-8 mRNA表达(P<0.05)。Western blot结果显示ORF7a显著增强p65蛋白磷酸化(P<0.05)及p65的入核(P<0.01)。免疫共沉淀实验发现ORF7a与NF-κB信号通路分子IKKβ蛋白存在相互作用,免疫荧光实验也证实ORF7a与IKKβ具有共定位。结论:SARS-CoV-2 ORF7a通过靶向IKKβ激活NF-κB信号通路,进而促进细胞中炎症因子的释放。

纯植物原料籽粒苋酸乳的研制

研究全部以籽粒苋为原料,不加入任何动物成分,加工酸乳的方法,同时对产品进行了检测分析。实验使用嗜酸乳杆菌和植物乳杆菌,产品检测结果表明,这2个菌种可应用于籽粒苋酸乳的发酵。籽粒苋酸乳的发酵工艺为嗜酸乳杆菌与植物乳杆菌活化后体积比为1∶1,接种量3%,发酵温度37℃,发酵时间为12 h。

籽粒苋桃酥的研制

利用籽粒苋的营养优势,使"籽粒苋桃酥"在不添加任何化学添加剂的前提下(与不加籽粒苋的桃酥比较),蛋白质、赖氨酸、不饱和脂肪酸分别提高27.27%、170.00%、17.12%;Ca、Zn、Fe分别提高640.73%、71.08%、139.51%;V B1、V B2分别提高179.31%、64.44%。

籽粒苋食品的发展及其产业化开发前景

籽粒苋不仅是优质的青饲料，而且是很好的食品原料。叶和籽实的蛋白质含量高且质量好，尤其是赖氨酸含量高；钙、锌、铁含量丰富，可以生产各种各样的发酵食品、面制品、保健食品及其他食品。籽粒苋在吉林省白城市已发展十几年，研究出了适合吉林省应用的籽粒苋新品种及其高产栽培、种养模式和多种食品加工技术，并已形成较完整的推广体系。种植籽粒苋，发展养殖业和食品加工业，降低养殖成本，增加农民收入，对调整种植业结构、促进畜牧业和食品工业的发展有积极的意义。

籽粒苋富纤维营养面包的研制

研究以添加籽粒苋、玉米、大豆、胡萝卜等五谷杂粮及蔬菜等天然添加剂,并经过特殊的技术处理,加工富纤维营养面包的方法。检测结果表明籽粒苋面包比对照总膳食纤维、β胡萝卜素、蛋白质、18种氨基酸、8种必须氨基酸、钙、锌、铁、硒、Vв2、Vв6分别提高了9.5%、27.12%、11.7%、11.5%、27.4%、77.7%、45.8%、45.6%、21.2%、75%、33.3%;Vв1降低了68.7%。

粮、饲、菜兼用作物-籽粒苋在吉林省的发展与展望

经过十年的探索,科研人员研究出了适合吉林省应用的籽粒苋高产栽培技术、三种种养模式技术和"苋香饼"的加工技术,并已形成完整的推广体系。种植籽粒苋,发展养殖业,降低养殖成本,增加农民收入,对调整种植业结构和促进畜牧业发展有积极的意义。

关东2号籽粒苋籽实品质分析

试验分析了日本关东2号籽粒苋籽实蛋白质和氨基酸的营养价值以及常规营养成分,为其加工利用提供理论依据。检测结果显示关东2号籽粒苋籽实蛋白质含量为15.0%。同时分析评价了其必需氨基酸和氨基酸的价值,8种必需氨基酸占蛋白质的总量是421.3 mg/g。并对关东2号籽粒苋籽实蛋白质的氨基酸进行评分和分析,最后得出必需氨基酸指数(EAAI)是0.969 4,这一结果充分说明了日本关东2号籽粒苋籽实是优质的蛋白质资源。

白纹伊蚊唾液腺serpin1基因的可变剪接分析与原核表达

目的克隆并原核表达白纹伊蚊唾液腺丝氨酸蛋白酶抑制剂基因1(Aalbserpin-1)。方法根据NCBI网站上白纹伊蚊Aalbserpin-1(AY826096.1)的序列设计引物,用RT-PCR从白纹伊蚊广州株中获取Aalbserpin-1全长基因序列,并进行生物信息学分析。将目的片段克隆到原核表达载体pET28a(+),转化到大肠杆菌中诱导表达。利用实时荧光定量RTPCR分析Aalbserpin-1_2基因在白纹伊蚊不同组织中的表达差异。结果 PCR扩增获得Aalbserpin-1基因两个转录本(Aalbserpin1_1和Aalbserpin1_2),Aalbserpin1_1的基因序列为1 260bp,编码419个氨基酸;Aalbserpin1_2的基因序列为1 332bp,编码443个氨基酸,均具有seprin结构域,Aalbserpin1_1和Aalbserpin1_2与Aalbserpin-1(AY826096.1)相比,相似性分别为95%和90%。两个转录本比较,Aalbserpin1_2中含有24个氨基酸的可变剪接子正好位于其功能活性中心环(RCL)上。以Aalbserpin1_2序列为模板,成功构建pET28a-Aalbserpin-1_2重组质粒。SDS-PAGE结果显示目的基因在Origami(DE3)中表达,重组蛋白相对分子量(Mr)约为50 000Da,经亲和层析获得目的蛋白。组织表达谱显示Aalbserpin-1_2在唾液腺(SG)、中肠(MG,P>0.05)丰富表达,脂肪体低表达(FB,P<0.05)。结论白纹伊蚊广州株Aalbserpin-1基因具有两个可变剪接子,其中Aalbserpin-1_2在唾液腺、中肠丰富表达,成功构建pET28a-Aalbserpin-1_2重组质粒并获得重组蛋白。

绿色植物基微生态食品的产业化开发——以籽粒苋为例

籽粒苋子实是优质的食品原料,其蛋白质含量高且质量好,尤其是赖氨酸含量高;钙、锌、铁含量丰富,还含有类胰岛素、角鲨烯等医疗保健成分。植物基微生态食品中的籽粒苋酸乳及其复合酸乳已获得两项国家发明专利,该专利产品全部使用植物原料,利用现代生物技术发酵而成。产品在不添加稳定剂的情况下不沉淀、含活菌、低脂肪,无胆固醇及乳糖,风味独特,非常适合"三高"人群食用。籽粒苋在吉林省已初步形成了较完整的技术支撑和推广体系,只要有企业接产,"农户+公司"的产业化格局即可形成,实现公司增效、农民增收。

籽粒苋种养模式技术——园栏养鹅

籽粒苋种养模式技术中的——"园栏养鹅"模式,在吉林省进行推广,其效益显著,提高了农民的养鹅积极性,深受广大农民欢迎,现将"园栏养鹅"模式技术介绍如下: "园栏养鹅"模式:农户在园子里种0.5亩地籽粒苋,配合其它饲料喂养100只鹅,100天(6月10日—9月20日),纯效益可达1000元左右。此模式技术包括四项内容:籽粒苋种植技术、养殖技术、防疫技术和效益分析。

籽粒苋种养模式技术“园栏养鸡”

籽粒苋种养模式技术是吉林省科技厅项目"籽粒苋产业化技术研究与开发"项目的研究内容之一。籽粒苋种养模式有三种:"123工程"、"园栏养鸡"和"园栏养鹅"模式。此三种模式已在吉林省进行了推广,效益显著,深受广大农民欢迎。

腺苷脱氨酶、C型凝集素及丝氨酸蛋白酶抑制剂基因在白纹伊蚊唾液腺中的表达

目的了解腺苷脱氨酶(adenosine deaminase,ADA)基因、C型凝集素(C-lectin)基因和丝氨酸蛋白酶抑制剂(serine protease inhibitor,serpin)基因在白纹伊蚊唾液腺中的表达情况。方法分别制备未吸血雌蚊唾液腺(SG组)和吸血雌蚊唾液腺(BSG组)、雌蚊躯体(无头无唾液腺,C组)和雄蚊组织(无头含唾液腺,M组)的总RNA,采用实时荧光定量RT-PCR技术,以β肌动蛋白(β-actin)基因作为内参,根据GenBank公布的ADA、C-lectin和Serpin基因序列设计特异性引物进行RT-PCR,分析以上基因在不同组织中的表达情况。结果与雌蚊躯体和雄蚊组织中相对表达量相比,ADA基因在雌蚊唾液腺中的表达分别提高了545倍和123倍(P<0.01);C-lectin基因在雌蚊唾液腺中的表达分别提高了3929倍和4973倍(P<0.01);Serpin基因在雌蚊唾液腺中的表达分别提高了1911倍和2978倍(P<0.01)。吸血前后雌蚊唾液腺中ADA、C-lectin和Serpin等3个基因的表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论 ADA在蚊虫组织中均有表达,在雌蚊唾液腺中高表达;C-lectin和serpin基因在雌蚊唾液腺中特异高表达。

白纹伊蚊基因表达定量PCR内参基因的选择

目的筛选白纹伊蚊基因表达定量PCR研究中适合的内参基因。方法采用实时荧光定量PCR技术,对β-ac-tin、BTF3a、rsp5、rsp27a、superoxide、rspL40六个看家基因的mRNA表达水平进行了探讨。结果除rsp27a基因扩增效率高于设定值被剃除外,余5个基因在不同组织中的表达稳定度为rspL40,BTF3a>rsp5>β-actin>superoxide;吸血不同时相表达稳定度为rspL40,rsp5>superoxide>BTF3a>β-actin。结论 rspL40,BTF3在不同组织中表达最稳定;rspL40,rsp5在吸血不同时相表达最稳定。

贵阳市家蝇对拟除虫菊酯类杀虫剂的抗性现状与kdr（L1014F）等位基因频率分析

探讨贵阳市区家蝇对拟除虫菊酯类杀虫剂抗药性水平与kdr等位基因上的L1014F点突变频率相关性，为贵阳市科学合理使用卫生杀虫剂控制家蝇提供科学依据。本研究采用WHO推荐的微量点滴法进行抗性测定。结果显示贵阳市4城区家蝇对氯菊酯和高效氯氰菊酯的LD50分别为0．00620～0．013339μg／雌蝇、0．02298～0．03614μg／雌蝇，抗性系数分别为3．35～7．56、7．38—11．62。采用特异性等位基因PCR法测定基因频率，结果显示4城区家蝇种群的L1014F点突变频率在29％～37％。相关性分析显示L1014F点突变等位基因频率与高效氯氰菊酯LD50值之间存在直线相关。研究结果表明贵阳市家蝇对氯菊酯、高效氯氰菊酯已经产生了抗药性，击倒抗性是其抗性机理之一。

白纹伊蚊唾液腺黏蛋白相关蛋白基因1的克隆、表达分析

目的克隆白纹伊蚊唾液腺黏蛋白相关蛋白基因1(Aamucin1)的全长cDNA序列,并分析白纹伊蚊吸血前后基因表达的差异。方法根据白纹伊蚊罗马株Aamucin1基因序列(GenBank序列号为AY826068)设计特异引物,提取白纹伊蚊广州株唾液腺总RNA,PCR扩增Aamucin1全长基因序列,并进行生物信息学分析。实时荧光定量RT-PCR分析白纹伊蚊吸血前后Aamucin1基因表达差异。结果成功克隆白纹伊蚊广州株基因,并获得全长为849 bp的基因序列,编码283个氨基酸。白纹伊蚊广州株与罗马株Aamucin1基因序列比对在C端少了13个氨基酸。与罗马伊蚊同源序列的一致性为58%;该基因具有1个可变剪接子;Protscan分析示有苏氨酸丰富区,可变剪接子恰位于此区;饱血零时(吸血2 h,腹部饱胀者,为BSG_0组),Aamucin1基因表达显著下调,是吸血前(SG组)的0.39倍(P<0.01);饱血24 h(饱血后24 h,为BSG_24组),Aamucin1基因表达较饱血零时有回升,是吸血前(SG组)的0.61倍(P>0.05)。结论获得白纹伊蚊广州株Aamucin1基因全长序列,并证实其在mRNA水平受到吸血调控。

白纹伊蚊β-actin基因实时荧光定量RT-PCR方法的建立

目的建立白纹伊蚊β-actin基因实时荧光定量RT-PCR法。方法根据GenBank上白纹伊蚊β-actin基因的序列（GenBank accession number：DQ657949）,利用Primer Express3.0软件设计并合成一对引物,采用SYBRGreen I作为染料建立实时荧光定量RT-PCR法。以Ct值为纵坐标,以稀释倍数的对数为横坐标,建立标准曲线,并进行溶解曲线分析。结果标准曲线Ct值检测范围为15~30,扩增效率为97.9%,相关系数为0.996,溶解曲线分析结果显示产物为特异的单峰,其Tm值为86.4℃。结论成功建立白纹伊蚊β-actin基因实时荧光定量RT-PCR法,为β-actin基因作为内参基因进行白纹伊蚊功能基因表达差异研究奠定基础。

贵阳市常见蚊虫共生菌沃尔巴克体的初步调查

目的:了解贵阳市常见蚊虫种群中沃尔巴克体(Wolbachia)的感染情况及基因型。方法:采用勺舀法采集贵阳市6城区(云岩区、南明区、花溪区、修文县、息烽县和开阳县)的蚊虫并鉴定;选用Wolbachia表面蛋白基因(wsp),利用PCR方法对单只雌蚊进行扩增、测序并做系统发育分析。结果:在贵阳市6城区不同水体采集到的常见蚊种有3种,分别是白纹伊蚊、致倦库蚊和骚扰阿蚊,3种蚊虫种群Wolbachia的核酸阳性率为42.9%~95.0%;获得13条目的基因序列、序列长度为572~602 bp,系统发育树显示这些序列分别属于A和B两个超群,白纹伊蚊Wolbachia基因型为w Alb A和w Alb B,致倦库蚊Wolbachia基因型为w Pip,骚扰阿蚊Wolbachia基因型为w Alb A。结论:贵阳市白纹伊蚊、致倦库蚊和骚扰阿蚊普遍感染Wolbachia,其基因型为wAlb A、wAlb B和wPip。

籽粒苋营养面包酵母菌的分离与鉴定

从自然发酵的籽粒苋营养面包的生面团中分离得到一株具有潜在应用价值的产香味酵母菌Y-21菌株。通过常规的形态和生理生化特性以及ITS r DNA鉴定为葡萄汁有孢汉逊酵母(Hanseniaspora uvarum),并对其菌株进行发酵性能测试。结果表明Y-21菌株的最适发酵温度为30℃,p H为5.5,在籽粒苋杂粮面包发酵与烘焙应用的初步研究中,面团发酵效果良好,可以充分发挥籽粒苋面包的独特风味,具有潜在的应用价值。