基于蛋白组学分析旋毛虫原肌球蛋白过表达对小细胞肺癌NCI-H446细胞蛋白组分的影响

目的研究旋毛虫原肌球蛋白(tropomyosin,Tm)过表达对人小细胞肺癌(small cell lung cancer,SCLC)NCI-H446细胞蛋白组分的影响。方法本研究通过串联质谱标记(Tandem mass tags,TMT)技术结合生物信息学分析旋毛虫Tm过表达对NCI-H446细胞蛋白组分的影响。比较旋毛虫Tm(Tm-pcDNA3.1)过表达和转染空载体(pcDNA3.1)48 h后NCI-H446细胞的蛋白组分,利用Uniprot数据库检索差异表达蛋白(Differentially expressed protein,DEPs)并对所得DEPs进行基因本体论(GO)富集分析。从STRING数据库获得DEPs相互作用数据,利用Cytoscape 3.9.0软件构建蛋白互作网络并筛选中心节点蛋白。通过Western blot对随机选取的中心节点蛋白NDRG1进行验证。结果旋毛虫Tm转染NCI-H446细胞48 h后,筛选出DEPs 70个,其中34个上调,36个下调;GO功能富集分析显示,DEPs主要涉及转录后的调控、免疫应答的调节等生物学功能;分析蛋白互作网络获得5个下调的中心节点蛋白:细胞周期蛋白G相关激酶(GAK)、组蛋白H3-7(H3-7)、辛普勒金Symplekin(SYMPK)、N-myc下游调节因子1(NDRG1)、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶N2(PKN2);Westrne blot结果显示旋毛虫Tm降低NCI-H446细胞中NDRG1的表达。结论旋毛虫TM能引起NCI-H446细胞蛋白组分的显著变化;旋毛虫Tm可能通过下调NCI-H446细胞中GAK、H3-7、SYMPK、NDRG1、PKN2的表达发挥其生物学作用。

褪黑素调控下丘脑PI3K/Akt/mTOR信号延缓雌性小鼠青春期启动的机制

目的探讨褪黑素(MLT)对雌性小鼠青春期启动的影响以及对下丘脑磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路表达水平的影响。方法78只20日龄雌性KM小鼠,随机分为褪黑素(MLT)组和生理盐水(NS)组,每组39只。22日龄开始,给予MLT组皮下注射1 mg/kg褪黑素,给予NS组注射等体积的生理盐水。青春期启动前选取32日龄为取材点,两组分别处死13只小鼠,青春期启动后选取37、42日龄为取材点,两组分别处死13只小鼠。观察小鼠阴门开启时间;取卵巢、子宫称重计算器官指数;HE染色观察卵巢黄体数量;ELISA法检测血清黄体生成素(LH)水平;Real-time PCR和Western blotting检测下丘脑PI3K/Akt/mTOR通路mRNA和蛋白表达水平。结果与生理盐水组相比,褪黑素组小鼠阴门开启时间显著推迟(P<0.05);卵巢、子宫的大小和指数明显下降(P<0.05);血清LH水平明显下降(P<0.05);下丘脑PI3K/Akt/mTOR通路mRNA和蛋白的表达水平显著下降(P<0.05)。结论褪黑素可以延缓小鼠青春期启动,机制可能与抑制下丘脑PI3K/Akt/mTOR信号通路相关。

一个未知的子宫雌激素反应蛋白ULF-250的鉴定

鉴定一个未知的子宫雌激素反应蛋白ULF-250.去卵巢大鼠补充给予雌二醇造成子宫产生大量宫腔液(uterine luminal fluid,ULF),受雌激素调节的蛋白分泌其中.收集ULF分别进行SDS-PAGE和双向电泳(2-DE)分离;通过Western印迹和2D-Western确认抗ULF-250抗体识别的蛋白成分并与凝胶上的条带或斑点相对应;对目标蛋白分别用MALDI-TOF-MS和HPLC-ESI-MS/MS两种方法进行质谱分析并获得肽段序列数据;与蛋白数据库比对及文献检索鉴定未知蛋白.2D-Western显示抗ULF-250抗体特异识别的蛋白成分.从2D胶上切下对应的蛋白斑点进行MALDI-TOF-MS,结果提示:ULF-250是ebnerin/DMBT1.经SDS-PAGE分离的250 kD蛋白条带进行液-质联用分析,结果同样提示:ULF-250是ebnerin/DMBT1.与文献报道比较,ULF-250与ebnerin/DMBT1在子宫的组织定位和调节是相同的,认为ULF-250是子宫表达的ebnerin/DMBT1.通过2-DE结合质谱分析以及查阅文献,确认未知的雌激素反应蛋白ULF-250是ebnerin/DMBT1.此外,研究提示,该蛋白不仅在子宫上皮细胞表达而且分泌到子宫腔液中,其功能值得进一步研究.

CBL与PBL教学法在医学免疫学课程中的效果评价

目的探讨以案例为基础的教学方法 (CBL)与以问题为导向的教学方法 (PBL)在医学免疫学教学中的应用效果。方法通过随机抽取学院2011级临床医学生各83人,通过问卷调查形式、统计学分析评价教学效果。结果与CBL教学法相比,PBL有15个项目相对于CBL具有更大优势(P<0.05)。结论在医学免疫学教学中,学生更认同PBL教学法。

“三位一体”教学模式在免疫学课程中的实践研究

医学免疫学是生命科学中的前沿科学,是联系基础医学与临床医学无可替代的桥梁学科[1]。但医学免疫学的理论相对独立,内容抽象深奥,并与其它学科联系紧密,初学者普遍反映医学免疫学是基础医学中比较难学的课程之一。在多年的教学实践中,我教研室本着教学方法、教学技术及教学资源应以教学实效为最终目标的原则,将多元化的教学方法与多种考核形式有机结合起来,形成了教学、实验、考核＂三位一体＂的教学模式。

大鼠侧脑室注射瘦素对卵巢摘除给予雌激素子宫腔液2-DE图谱分析

瘦素(leptin)通过动物下丘脑-垂体轴对其生殖活动予以调节,但瘦素通过下丘脑对子宫调节作用仍不清楚.本研究在大鼠侧脑室微量注射瘦素6 h后,采用双向凝胶电泳(2-DE)结合基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)技术分离、鉴定了卵巢摘除给予雌激素的子宫腔液蛋白质表达谱.我们获得了分辨率较高、重复性较好的2-DE图谱;质谱分析结合Swiss Prot蛋白数据库检索,共鉴定了24个差异表达的蛋白质与生理盐水注射(对照)比较,侧脑室微量注射瘦素引起22个蛋白质分子显著上调,2个显著下调.重要的是,在上调的蛋白质分子中包括转铁蛋白、基质金属蛋白酶7、膜联蛋白A1、补体B因子、磷酸甘油酸酯变位酶1、烯醇酶、冠蛋白-1A等15个蛋白质分子,下调的2个蛋白质分子是补体C3、溶解物载体家族4成员3.这些蛋白质分子涉及细胞分化、细胞迁移、细胞凋亡,以及炎症反应等功能.实验结果提示,瘦素可能通过下丘脑-垂体轴参与免疫调节、雌性生殖及炎症反应等,从而对子宫发挥调节作用.本研究将为加深对瘦素调节子宫作用的认识,并为深入研究女性生殖系统疾病提供新的启示.

侧脑室微量注射瘦素对OEP大鼠子宫腔液蛋白表达的影响

目的:探讨瘦素通过下丘脑-垂体轴对子宫的调节作用。方法:应用双向凝胶电泳(2-DE)技术分离OEP大鼠侧脑室微量注射瘦素及生理盐水6h后的子宫腔液总蛋白,图像分析识别差异表达的蛋白质点,基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)对差异表达的蛋白质点进行鉴定。结果:与生理盐水对照组相比,瘦素实验组有6个差异表达蛋白质,其中5个蛋白点升高,1个蛋白点降低。经过质谱分析结合数据库检索,获得有意义的蛋白点,上调蛋白点为补体B因子、冠蛋白、肌动蛋白结合蛋白、丝氨酸蛋白酶抑制剂B1、烯醇酶,下调蛋白点为补体C3。结论:这些差异表达蛋白涉及炎症反应、细胞分化、细胞迁移、细胞凋亡等功能,瘦素可能通过下丘脑-垂体轴从免疫、生殖等方面对子宫发挥调节作用。

双向电泳分离大鼠子宫组织提取物的最佳条件摸索

目的:建立并优化大鼠子宫组织提取物的双向电泳分离条件。方法:机械匀浆法制备子宫组织总蛋白提取物,采用不同方法处理样品及不同pH范围的固相梯度胶条进行双向电泳分析。结果:经丙酮沉淀处理的提取物在pH 5～8范围的固相梯度胶条进行双向电泳分离,可获得分辨率清晰和重复性较好的二维图谱。特别是在高分子量蛋白区域得到独立清晰的蛋白质斑点。结论:通过建立并优化双向电泳分离条件,为进一步分析生理与病理状态的子宫蛋白成分提供了技术支持。

外周血癌细胞中多种肿瘤标记物基因检测预测乳腺癌患者转移和预后的意义

目的:筛选一组可检测乳腺癌循环癌细胞的标记物基因,分析乳腺癌患者相对循环癌细胞数(Lc)与临床病理特征的关联。方法:收集乳腺癌患者142例(乳腺癌组)和正常女性60人(正常对照组)外周血标本。利用CGAP提供的SAGE Genie数据库中数字基因表达演示工具,筛选一组可用于检测乳腺癌循环癌细胞的标记物基因(FAM83A、NPY1R和KRT19)。应用定量巢式PCR方法检测研究对象外周血中标记物基因的表达水平,并通过公式计算患者Lc值。结果:在乳腺癌组患者外周血中肿瘤标记物基因FAM83A、NPY1R和KRT19的表达水平均明显高于正常对照组(P<0.001)。142例乳腺癌患者中有113例(79.6%)至少表达1个肿瘤标记物基因。乳腺癌患者Lc值与其临床分期和远处转移有关联(P<0.001)。Kaplam-Meier生存曲线,Lc值小于2的患者生存时间明显长于Lc值大于2者(P=0.005)。结论:筛选了一组检测乳腺癌外周血循环癌细胞的标记物基因,联合该组基因计算的Lc值与患者临床分期和远处转移有关联,并可辅助判断乳腺癌预后。

过氧化物酶6在大鼠附睾中的表达及分布

通过双向电泳结合质谱技术分离鉴定正常成年大鼠附睾头段与尾段管腔液中的蛋白组成,从附睾头段及尾段管腔液的22个差异蛋白点中鉴定出12个蛋白质.其中11个蛋白质在不同种属哺乳动物的附睾组织中已有鉴定报道,而过氧化物酶6(peroxiredoxin 6,Prdx6)为新发现的存在于附睾头段及尾段管腔液中的体液蛋白.采用RT-PCR、Western印迹及免疫组化技术,对该蛋白在大鼠附睾中的表达及分布进行了分析.实验表明,Prdx6与精子的成熟、贮存及保护有一定关系,其具体机制值得进一步深入研究.

硫代硫酸钠干扰斑马鱼胚胎发育并致畸

硫的衍生物潜在的威胁着胚胎的发育过程.斑马鱼被用于研究不同浓度(1×10-6～1mol/L)的硫代硫酸钠(sodiumthiosulfate,STS)对胚胎发育的影响,在解剖显微镜下实时观察斑马鱼胚胎发育的全过程.采用Western印迹法检测乙酰化的微管蛋白——α-微管蛋白(acetylatedtubulin,α-tubulin)和神经元增殖细胞核抗原(proliferatingcellnuclearantigen,PCNA)的表达,分别检测STS暴露后胚胎的运动神经元功能,神经元的增殖状态.发育中的斑马鱼胚胎暴露于0.1～1mol/LSTS,呈现出严重的发育迟缓,并且伴随多脏器畸形;暴露于10μmol/L～10mmol/LSTS,胚胎呈现循环系统,神经系统以及颌面部畸形.胚胎在48hpf(hourspostfertilization)时,对STS的暴露敏感高于24hpf和96hpf.STS可能干扰细胞的增殖及运动神经元的正常分化.STS可能干扰正常的细胞骨架结构,并在胚胎发育晚期影响细胞增殖,对胚胎神经系统、循环系统及颌面部有致畸作用.

乳腺癌高表达基因FAM83A的生物信息学分析

目的筛选乳腺癌高表达基因,用生物信息学方法预测FAM83A生物学功能。方法使用肿瘤基因组解剖计划数据库的数字基因表达演示工具,在乳腺癌组织和乳腺良性肿瘤组织中筛选差异表达的基因。生物信息学方法预测FAM83A基因及其编码蛋白的序列同源性、理化性质、亚细胞定位、结构和表达谱。RT-PCR方法测定FAM83A在乳腺癌、乳腺纤维瘤和正常乳腺组织中的表达。结果筛选出差异表达基因FAM83A。发现其有3个不同的剪接体,基因进化保守,亚细胞定位于线粒体的可能性大。预测有PK,PKA等磷酸化位点,MAPK作用识别位点,SH2、SH3,RPEL和WH2结合基序。二级结构主要是α螺旋和无规则卷曲。RT-PCR证实FAM83A在乳腺癌组织中高表达,而在乳腺良性肿瘤和正常乳腺组织中均无表达。结论 FAM83A是一个乳腺癌高表达基因,可能作为乳腺癌分子机制研究的靶点。

侧脑室注射微量GnIH大鼠的血浆GnRH、FSH水平及下丘脑组织POMC蛋白表达观察

目的观察侧脑室微量注射促性腺激素抑制激素(Gn IH)后雄性大鼠血浆促性腺激素释放激素(GnRH)、卵泡刺激素(FSH)水平变化,及下丘脑组织中阿片促黑素细胞皮质素原(POMC)蛋白的表达变化。方法雄性SD大鼠60只,随机分为实验组和对照组各30只。10%水合氯醛腹腔注射麻醉,实验组于大鼠侧脑室一次性注射Gn IH 5μL,于5 min内注射完毕,留针10 min。对照组给予等量生理盐水。两组分别于注射后60、120、240min各取10只大鼠心房取血,采用ELISA法检测血浆GnRH、FSH;心房取血后断头处死大鼠,取下丘脑组织,采用Western blotting法检测下丘脑组织中的POMC蛋白。结果实验组注射后60、120、240 min血浆GnRH、FSH水平均低于对照组(P均<0.05),实验组内注射后不同时点差异无统计学意义。实验组注射后60、120、240 min下丘脑组织中POMC蛋白相对表达量低于对照组,且实验组注射后240 min下丘脑组织中POMC蛋白相对表达量低于注射后60、120 min(P均<0.05)。结论侧脑室微量注射Gn IH后雄性大鼠血浆GnRH、FSH水平降低,下丘脑组织中POMC蛋白表达下调。Gn IH对下丘脑-垂体-性腺轴有一定调节作用,其机制可能与抑制POMC神经元功能有关。

瘦素经POMC神经元对神经内分泌-生殖轴的影响

目的:探讨瘦素(leptin)对神经内分泌-生殖轴的可能调节机制。方法:建立卵巢摘除补充雌激素(OEP)大鼠模型,动物随机分为leptin组、α-黑素细胞刺激素(α-MSH)组和生理盐水对照组,于侧脑室注射后1h、2h、4h和6h分别取血和脑组织。ELISA法检测血中促性腺释放激素(Gn-RH)、黄体生成素(LH)和卵泡刺激素(FSH)浓度。Western印迹检测下丘脑组织中阿片促黑激素皮质素原(POMC)蛋白量的变化。结果:侧脑室注射leptin可促进GnRH、FSH、LH的分泌,而注射α-MSH则抑制GnRH、FSH和LH的分泌。注射leptin显著增加下丘脑中的POMC含量。结论:Leptin可能通过POMC神经元或与其他途径共同影响下丘脑-垂体生殖轴的分泌功能;POMC神经元发挥的调节作用可能晚于或弱于其它神经元。

丝胶对2型糖尿病大鼠肝脏组织中TNF-α和HNF-4α表达的影响

目的:通过观察丝胶对2型糖尿病大鼠肝脏组织中肿瘤坏死因子α(TNF-α)和肝细胞核因子4α(HNF-4α)表达的影响,探讨丝胶治疗糖尿病的可能机制。方法:36只雄性SD大鼠随机分为正常对照组、糖尿病模型组和丝胶治疗组,每组12只。链脲佐菌素(STZ)连续腹腔注射法制作2型糖尿病大鼠模型。待模型成功建立后,模型组大鼠不做任何处理,丝胶治疗组大鼠给予丝胶(2.4g·kg-1·d-1)灌胃35d。采用免疫组织化学SP法染色、蛋白免疫印迹法和RT-PCR法检测大鼠肝脏组织中TNF-α和HNF-4α的表达。结果:TNF-α蛋白免疫产物为棕黄色和棕褐色颗粒状,位于肝细胞的细胞浆;HNF-4α免疫阳性产物为棕褐色,位于肝细胞的细胞核。与正常对照组比较,糖尿病模型组大鼠肝脏组织中TNF-α、HNF-4α蛋白和mRNA的表达水平明显升高(P<0.01);与糖尿病模型组比较,丝胶治疗组大鼠肝脏TNF-α、HNF-4α蛋白和mRNA的表达水平明显降低(P<0.01)。结论:丝胶可能通过下调肝脏组织中TNF-α和HNF-4α的表达保护糖尿病时肝脏损伤。

脑膜炎奈瑟菌疫苗研制进展

由脑膜炎奈瑟菌引起的流行性脑脊髓膜炎是一种对人类危害严重的传染性疾病,曾在全球引起多次大流行,所以关于其预防引起了全世界的高度重视。目前应用和研究的脑膜炎奈瑟菌疫苗主要有荚膜多糖疫苗、多糖与蛋白结合疫苗、B群改良疫苗、去毒脂多糖结合疫苗等,本文就以上疫苗的研制情况进行综述。

激发学生学习医学微生物学兴趣的“六个结合”教学法

医学微生物学一门与临床、社会、历史和生命科学发展前沿紧密联系的学科。“六个结合”教学法,就是基于这种联系、结合这些因素去讲授医学微生物学的教学法,是一种“源自生活”的教学法;“六个结合”教学法,可激发学生的学习兴趣,加深他们对教材知识的理解和记忆,并能将所学知识活学活用。