肉鸽肠道微生物菌群差异分析和抗生素耐药基因预测

本研究旨在利用宏基因组学深入分析上海某鸽场青年鸽(RP)和产鸽(LP)粪便样品的微生物菌群差异。结果显示,肉鸽肠道菌群的优势菌门为厚壁菌(Firmicutes)、变形菌(Proteobacteria)和放线菌(Actinobacteria)。RP组中双歧杆菌(Bifidobacterium)、棒状杆菌(Corynebacteriun)、嗜冷杆菌(Psychrobacter)、链球菌属(Streptococcus)含量显著高于LP组,而LP组金黄色葡萄球菌属(Staphyloccus)、短状杆菌属(Brachybacterium)、库特氏菌属(Kurthia)和埃希氏菌属(Escherichia)含量显著高于RP组。LEfSe分析显示,LP和RP组的差异表达基因主要富集于5个KEGG通路。抗生素耐药基因(antibiotic resistance genes,ARGs)鉴定显示,肉鸽体内存在198种ARGs,其中多重耐药类ARGs流行率40%以上,说明该场肉鸽抗生素耐药情况较严重。本研究为后续深入研究肠道菌群与健康养殖、抗生素耐药机制等提供了科学数据。

上海地区猪萨佩罗病毒的检测及遗传进化分析

为了明确猪萨佩罗病毒在仔猪腹泻病情中的作用,2016—2020年采集上海市及周边11个猪场腹泻病料,共计1446份。利用RT-PCR方法对其进行PSV筛检,并对阳性样品进行病原分离及病毒特性研究。结果显示:共筛检出256份PSV核酸阳性样品,阳性率17.7%。从阳性样品中成功分离到2株PSV病毒,全基因序列遗传进化分析显示2株PSV分离株聚集在中国PSV毒株集群上,分离株在3D区域4696—5945 bp处存在重组区域。病毒核苷酸分析发现中国PSV毒株与韩国PSV毒株核苷酸相似性为87%—88.5%,与欧洲PSV毒株核苷酸相似性为84.9%—87.3%。对VP1基因氨基酸序列分析发现分离株与参考株存在氨基酸位点突变,中间氨基酸序列保守,无突变及插入和缺少现象。PSV分离株与参考株均含有173位潜在糖基化位点,VP1蛋白分子表面抗原表位分布均匀。该研究可为猪萨佩罗病毒病原学及其疫苗的研制奠定基础。

一株猪流感病毒A/swine/Shanghai/01/2019(H1N1)的分离鉴定及遗传进化分析

为鉴定上海地区猪流感病毒的流行株及其分子生物学特征,本研究从上海地区养殖场采集疑似流感症状的猪咽拭子样品40份,采用套式PCR结合鸡胚分离鉴定方法,从中分离到1株H1N1亚型猪流感病毒(SIV),命名为A/swine/Shanghai/01/2019(H1N1)。经全基因组测定和遗传进化分析结果显示该分离株的8个基因节段与欧亚类禽H1N1 SIV同源性最高,其PB2、PB1、PA基因节段可能来源于A/swine/Jiangsu/49/2012(H1N1)病毒,NA、NP和M基因节段可能来源于A/swine/Shanghai/3/2014(H1N1)病毒。该分离病毒的HA蛋白裂解位点为PSIQSR↓GLFGAI,为低致病性流感病毒的分子特征。该分离株NA蛋白未出现与神经氨酸酶抑制剂相关的氨基酸突变,M2蛋白S31N突变表明该病毒可能对金刚烷胺类药物具有一定的耐药性。PA蛋白224S和PB2蛋白701N突变提示该分离株对哺乳动物的适应性增强,可能导致其致病性增强,需要加强对此类SIV的监测。结合近年来的监测表明,上海地区猪群中H1N1亚型SIV持续存在,需要持续跟踪监测SIV变异趋势。本研究为防控猪流感提供实验依据。

新城疫病毒ClassⅠ强毒株磷蛋白在细胞中的表达与定位

根据ClassI新城疫病毒分离株9a5b编码序列设计特异性引物扩增P蛋白基因，原核表达后利用纯化的蛋白免疫BALB／C小鼠制备单克隆抗体，经二次亚克隆后筛选到4株针对P蛋白的单克隆抗体，利用所得单抗进行P蛋白在细胞内定位分析，NDV9a5b株按5M．O．I感染量接种DFl单层细胞，当PI=4h时，P蛋白呈点状弥散分布于细胞浆内；PI=6～8h时，P蛋白聚集于细胞核周围；PI=12h时，P蛋白呈单极化聚集于细胞核一侧；而PI=16h后开始形成合胞体，P蛋白在单个细胞中仍呈现单极分布；当PI=48h时，细胞核已发生碎裂，荧光强度有所减弱。本研究为深入开展P蛋白在病毒增殖以及细胞周期中的作用机制研究奠定了基础。

数字孪生丹江口水质安全建设挑战与举措

丹江口水库是南水北调中线工程水源地,担负着“一泓清水永续北送”的重任。结合丹江口水库特点和现状,剖析数字孪生丹江口水质安全建设面临的短板、机遇与挑战,提出了水质安全建设总体框架,阐述了数据底板建设、模型与知识库扩展、业务应用支撑等主体建设内容与核心技术,总结了水质安全建设特色与亮点。研究可为高质量开展南水北调中线水源工程数字孪生建设提供支撑,为其他水源水库水质安全数字孪生建设提供经验借鉴。

新城疫病毒ClassⅠ强毒株磷蛋白在细胞中的表达与定位

根据Class Ⅰ新城疫病毒分离株9a5b编码序列设计特异性引物扩增P蛋白基因，原核表达后利用纯化的蛋白免疫BALB／c小鼠制备单克隆抗体，经二次亚克隆后筛选N4株针对P蛋白的单克隆抗体，利用所得单抗进行P蛋白在细胞内定位分析，NDV9a5b株按5M．0．I感染量接种DF1单层细胞.

鸡腺胃分离的传染性支气管炎病毒基因型与致病性研究

为明确传染性支气管炎病毒(IBV)是否是导致鸡腺胃炎的主要原因,对分离自腺胃炎病例的2个IBV毒株(CK/CH/HeB/2011/1和CK/CH/HeB/2011/2)的致病性进行研究。首先用SPF鸡胚对2株病毒进行扩增,收获的含毒鸡胚尿囊液经检测未发现其他外源病毒污染。经S1基因序列比对和遗传进化分析,2个毒株分别属于Mass和QX基因型。在致病性试验中,2株病毒按照106 EID50.mL-1的剂量分别滴鼻感染10只14日龄SPF鸡,攻毒后连续观察10d。2组试验鸡在攻毒后均出现典型的呼吸道症状,发病率为100%,致死率均为10%,剖检病理变化主要表现为间质性肾炎,但未观察到临床病例的腺胃炎病变。结果表明:分离自腺胃炎病例的IBV毒株存在多个基因型,这些毒株单独感染不一定诱发腺胃炎病变。

丹江口水库浮游植物群落时空变化及其与环境因子的关系

研究丹江口水库在完成高水位蓄水期间浮游植物群落的时空动态特征可为丹江口水库的水质保护与生态系统结构优化及健康管理提供一定科学依据。本研究基于20182020年的水库浮游植物监测数据,结合同期水库水体的理化参数,分析了丹江口水库浮游植物在不同年度、季度及空间的变化特征,以及影响浮游植物群落结构变化的主要环境因子。结果显示该区域共检测出浮游植物7个门类,其中蓝藻门、硅藻门、绿藻门、隐藻门为优势类群。20182020年浮游植物年均密度分别为1.96×10^(6)、2.55×10^(6)和5.07×10^(6) cells/L,呈现出逐年增高趋势。浮游植物季度密度表现为秋季>夏季>春季>冬季,在夏秋季节蓝藻门和绿藻门占优势,春冬季节硅藻门和隐藻门占优势,同时硅藻门在四季中均占据生长优势。空间上库区浮游植物密度明显高于支流,且汉江库区浮游植物密度高于丹江库区,其中蓝藻门和绿藻门主要在库区大量出现,而支流则以硅藻门和隐藻门为主。RDA分析显示,影响丹江口水库浮游植物的主要环境因子是水温,其次为化学需氧量、氨氮和总磷。在不同季节和不同库区影响浮游植物群落分布的主要环境因子有所不同,春季总氮为主要影响因子,夏季浮游植物群落受多个环境因子的共同作用,秋季总磷对浮游植物群落影响最大,冬季高锰酸盐指数为主要影响因子,丹江库区则主要受水温、pH、溶解氧等影响,汉江库区还受到总氮和总磷等营养元素的干扰。

猪星状病毒的流行病学调查及遗传进化分析

为了解上海地区猪群中猪星状病毒(PAstV)的流行现状及其遗传特性,本研究于2016年~2020年间在上海不同地区10个猪场共采集了1416份仔猪腹泻粪便样品,利用RT-PCR方法及生物信息学技术进行检测与分析。结果显示,PAstV的总阳性率为26.2%,PAstV与其他腹泻病病原的混合感染情况较复杂,二重感染率占比达56.93%,主要以PAstV/猪嵴病毒(PKoV)为主(20.07%);三重感染率占比29.41%,以PAstV/PKoV/猪流行性腹泻病毒(PEDV)(10.09%)感染模式为主;四重感染率为11.4%,以PAstV/牛病毒性腹泻病毒(BVDV)/猪札幌病毒(PoSaV)/猪萨佩罗病毒(PSV)(13.51%)感染为主。猪群中PAstV的流行与气温差有很大关系,在季节交替时节流行率较高,特别是秋冬交替时节。选取其中2个PAstV阳性样品(JS-PAstV和CM-PAstV)进行全基因组序列的测定和分析,结果显示两者的全基因组同源性不高,仅为73.8%。全基因组进化分析显示,CM-PAstV分别与挪威、日本、美国的PAstV 3型的亲缘性较近;而JS-PAstV与匈牙利的PAstV 3型的亲缘性最近。对ORF2基因进行病毒重组分析,显示JS-PAstV和CM-PAstV的ORF2基因均与人星状病毒之间存在重组现象。提示,上海地区猪群中存在PAstV 3型的流行,且遗传距离较远,但存在与人星状病毒重组的风险,需进一步监测关注。本研究数据丰富了国内PAstV的流行病学资料,可为该病的风险防控提供科学数据。

猪群中牛病毒性腹泻病毒的流行病学调查

于2017—2020年间从上海不同区6个猪场采集1078份仔猪腹泻样品,利用多重RT-PCR方法进行检测与分析,研究了上海地区猪群中牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus,BVDV)的感染现状。结果表明:上海地区猪群BVDV的总体检出率为7.14%(77∕1078),且呈现逐年递增的趋势,BVDV与其他腹泻病原的混合感染率较高,其中二重感染率最高(65%,26∕40),以BVDV∕PAstV为主(61.54%,16∕26)。在此基础上,三重感染率为25%(10∕40),以BVDV∕PAstV∕PKoV(40%,4∕10)感染模式为主;四重感染率为10%(4∕40),以BVDV∕PAstV∕PEDV∕PSV(50%,2∕4)感染模式为主。猪群中BVDV流行存在一定的季节性,春季(10.36%)和秋季(13.59%)的流行率高于夏季(6.8%)和冬季(2.66%)。不同猪场BVDV阳性率存在较大差异,为0—24.07%。鉴于近年来监测发现猪场2中以PEDV为主的腹泻病原检出率一直较高,因此本研究进一步监测该猪场中BVDV的感染情况,发现该猪场在2017—2019年间BVDV检出率呈现逐年递增的趋势,2019年检出率最高(8.61%,42∕488);且BVDV与其他腹泻病原混合感染情况也较严重,二、三、四重感染率分别为57.58%(19∕32)、21.21%(7∕32)、21.21%(7∕32)。该研究丰富了上海地区猪群中BVDV的流行数据,可为猪场疫病防控提供参考。

猪繁殖与呼吸综合征活疫苗与LT蛋白配伍经黏膜途径接种小鼠免疫效果分析

旨在评价猪繁殖与呼吸综合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)活疫苗与大肠杆菌热敏性肠毒素(LT)蛋白配伍后经滴鼻途径接种小鼠后的免疫应答水平,分析猪繁殖与呼吸综合征活疫苗经黏膜途径免疫的可行性。试验共分为四组,分别为对照组、PRRSV滴鼻组、PRRSV+LT滴鼻组和PRRSV注射组。一免、二免后检测血清Ig G和鼻拭子Ig A抗体水平,同时检测IFN-γ和IL-10细胞因子的表达。结果表明:二免后,PRRSV+LT滴鼻组可产生较高水平的Ig G抗体,与PRRSV注射组无显著差异; PRRSV+LT滴鼻组产生的Ig A抗体水平明显高于PRRSV注射组; PRRSV+LT滴鼻组小鼠脾脏IFN-γ、IL-10水平与PRRSV注射组无显著差异。因此,猪繁殖与呼吸综合征活疫苗与LT蛋白经滴鼻途径免疫小鼠,可产生理想的黏膜免疫应答及系统的体液免疫和细胞免疫反应。黏膜分泌性抗体的产生,为阻断病毒局部感染提供了保护屏障,能更有效达到抵抗病毒入侵及感染的目的。

猪Delta冠状病毒的流行病学调查及M基因序列分析

为了解猪Delta冠状病毒(Porcine Deltacoronavirus,PDCoV)在发生腹泻疫情猪群中的感染情况,根据PDCoV M基因的保守序列设计了一对RT-PCR检测引物,建立了猪Delta冠状病毒的RT-PCR的检测方法,其最低核酸检测限量为3.92×10^3 copies/μL,特异性和灵敏度均较好。利用该方法对2015—2017年上海周边猪场的518份猪腹泻粪便样品进行检测,检测出25份PDCoV阳性样品,感染阳性率达4.8%。在所检出的阳性样本中,PDCoV与猪嵴病毒(porcine kobuvirus,PKV)和猪星状病毒(porcine astrovirus,PAstV)的混合感染率较高,分别为40%和48%;PDCoV与猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)混合感染率为8.0%,未检测到PDCoV与猪传染性胃肠炎病毒(transmissible gastroenteritis virus,TEGV)混合感染的样本。随机选取10份PDCoV阳性样本,对扩增的M基因片段同源性进行分析,结果,10份样品中核苷酸同源性达95.0%—99.6%,与GenBank登录的PDCoV毒株的同源性为96.1%—100%,说明目前流行的PDCoV毒株的遗传差异不大,该研究为了解PDCoV流行情况提供了参考依据。

NS1蛋白点突变对猪流感病毒感染细胞的影响

以H1N1亚型猪流感病毒A∕swine∕Shanghai∕3∕2014为模板,选择核定位序列(Nuclear localization sequence,NLS1)与核输出序列(Nuclear export sequence,NES)区域中5个保守关键氨基酸突变为丙氨酸,构建真核表达载体,分析NLS1和NES区域中影响NS1蛋白定位及细胞因子水平的氨基酸位点。结果表明:NS1L36A、NS1L141A、NS1L146A与野生型NS1蛋白相似,转染后在细胞质和细胞核中均可检测到蛋白表达。NS1R38A有少量进入细胞核,而NS1L144A蛋白主要分布在细胞质中,不进核。NS1R38A和NS1L144A表达载体转染细胞,细胞内Ⅰ型干扰素β(IFN-β)和抗病毒蛋白(OAS-1)水平升高,与野生型NS1蛋白比较差异显著。因此,NS1蛋白中第38位和第144位氨基酸的突变可以减轻其对宿主细胞抗病毒免疫应答的抑制,但这两个突变蛋白在细胞中定位和分布不同显示其作用机制可能不同。

丹江口水库综合管理信息系统设计

南水北调中线工程涉及供水计划及管理、视频监视、工程安全监测及管理、水质监测、综合决策会商和信息服务、电子政务等多方面的业务需求,而丹江口水库现有的信息管理系统有效性、实用性不强,对提高工作效率作用不大,有的还存在操作、使用繁琐等问题。为保证整个水源工程能够安全、高效、经济、协调运作,需统筹规划供水调度各方面的业务需求,采用先进的信息采集、信息处理、自动控制、通信和计算机网络、视频监视、数据库和信息管理等技术,以及现代化的运维管理理念,建设完整、先进的综合管理信息系统,对水源工程进行运维和管理,确保南水北调中线水源工程安全、可靠、长期、稳定、经济运行。

适应肠道细胞的猪德尔塔冠状病毒对仔猪的致病性分析

为分析适应肠道细胞的猪德尔塔冠状病毒(Porcine deltacoronavirus,PDCoV)对仔猪的致病性,本研究首先用ST细胞分离培养的PDCoV感染IPEC-J2细胞进行适应性试验,通过间接免疫荧光试验(IFA)检测PDCoV抗原,然后绘制病毒生长曲线,最后分析适应IPEC-J2细胞的PDCoV对仔猪的致病性。结果表明:1)经ST细胞分离培养的PDCoV可以感染IPEC-J2细胞并出现CPE,可在细胞内检测到PDCoV抗原,PDCoV在感染IPEC-J2细胞后48 h达到增殖高峰。2)适应IPEC-J2的PDCoV对仔猪具有肠致病性,仔猪出现明显腹泻症状,甚至出现死亡;剖检可见明显的肠道病变,病理组织学显示肠上皮细胞及肠绒毛病变,并通过免疫组化对抗原进行定位,发现PDCoV广泛分布于肠道上皮细胞。3)肠道免疫细胞因子分析发现PDCoV感染仔猪后肠道I型干扰素表达上调,同时激活体内Th1和Th2型肠道细胞免疫反应,诱导感染仔猪产生免疫细胞因子发挥抗病毒作用。综上,经ST细胞分离培养的PDCoV对IPEC-J2细胞具有较强的适应性,并对仔猪产生较强的致病性。本研究为PDCoV致病机制及抗病毒免疫进一步研究奠定基础。

电力网中无功功率补偿的优化及效益计算

无功补偿可提高电网电压水平、降低线路损耗、改善电厂功率因数、增强系统稳定性。是维持电网稳定、经济运行的重要技术手段，如何才能在电网中对无功补偿的方式和配置进行优化，提高无功补偿的效益。本文从提高功率因数和降低线损二者关系的讨论出发，对此进行了一些探讨。

王甫洲电厂灯泡贯流式水轮机导水机构的安装

本文介绍国内较大的灯泡贯流式水轮机导水机构的一种新的安装方法：即在安装场内将机构组装为整体并加固后整体吊入水轮机坑与预埋的管形座壁环、内锥相连接的方法，与以往国内将导水机构各部件分件吊入安装的方法有所不同。

变电设备状态维修费用的经济性分析

文章探讨了变电设备的寿命周期和状态检修费用组成，给出了变电设备实施状态检修优化管理应遵循的原则，提出了变电设备状态检修费用经济性分析评价的方法。

丹江口大坝300t级升船机安装及调试技术分析

丹江口大坝300 t级升船机是国内唯一采用垂直和斜面两级控制的升船机。在安装施工过程中,遇到了许多技术上的难题,比如大件吊装、高空钢梁拼装焊接、钢轨道梁超大件滑移施工以及现场调试等。经过设计人员与现场施工人员的共同努力、反复分析研究,使这些技术问题和施工难题均得到了成功解决,为今后同类设备的安装调试积累了经验。

丹江口大坝加高工程坝顶门机改造方案分析研究

初步设计批复确定的丹江口大坝加高工程坝顶门机改造方案为对原坝顶2台4000kN/250kN门机进行更新改造,继续使用,再新增1台5000kN门机。由于2台4000kN/250kN门机更新改造费用高,难度大,改造后整机质量和性能难以保证,对混凝土施工和施工期度汛的干扰和影响较为严重,于是针对以上情况提出了安装2台新5000kN/250kN门机的新改造方案,并从经济和技术两方面进行了综合分析比较,证明了新方案的优越性和可行性,建议采用门机改造新方案。