E-cadherin和CAR在人膀胱癌细胞中的表达及其意义

目的检测上皮型钙黏素(E-cadherin)和柯萨奇-腺病毒受体(coxsackie and adenovirus receptor,CAR)在多种人膀胱癌细胞中的表达情况,初步讨论E-cadherin与CAR在人膀胱癌细胞中表达的意义及两者间的关联。方法用Western印迹法测定人膀胱癌细胞中E-cadherin和CAR的表达情况。结果E-cadherin、CAR在RT4、5637细胞中表达较高,在253J细胞中表达较低;E-cadherin在J82、T24细胞中不表达,CAR在J82细胞中微弱表达,在T24中不表达。结论E-cadherin和CAR在人膀胱癌细胞中的表达趋势一致,两者可能相互协作,共同参与膀胱癌的侵袭转移过程。

过表达缺氧诱导因子1α影响前列腺癌血管生成的体内研究

目的:观察转染缺氧诱导因子1α(HIF-1α)在体内环境下对人前列腺癌血管形成的影响,并探讨其分子机制。方法:对构建的转染HIF-1α人前列腺癌LNCaP细胞(LNCaP/HIF-1α)复苏后培养,ELISA法检测转染前后培养液上清PSA水平;流式细胞术检测细胞周期;将转染前后的LNCaP细胞建立免疫裸鼠皮下肿瘤模型,观察肿瘤生长情况;收集肿瘤标本后针对肿瘤血管生成相关蛋白血管内皮生长因子(VEGF),诱导型一氧化氮合酶(iN-OS),促血管生成素2(Ang-2)行免疫组化染色。结果:与LNCaP细胞相比,转染HIF-1α的人前列腺癌LNCaP细胞培养液PSA水平明显降低(t=8.243,P<0.05);流式细胞术显示其更具有增殖活性。体内实验显示皮下肿瘤成瘤率提高,成瘤时间提前。LNCaP/HIF-1α免疫组化研究显示VEGF、iNOS、Ang-2表达较LNCaP组增强。结论:在体内环境下,HIF-1α过表达能够诱导人前列腺癌LNCaP细胞血管形成相关蛋白VEGF、iNOS表达上调,提高肿瘤血管形成能力。并通过诱导肿瘤血管形成来增强肿瘤的侵袭转移能力;体内外实验显示HIF-1α可能对人前列腺癌LNCaP细胞Ang-2表达不产生影响,而在体内环境下Ang-2表达受其他因素调控。

水飞蓟宾对人膀胱癌细胞株5637增殖的抑制作用及其机制

目的研究水飞蓟宾(Silibinin,SB)在体外对人膀胱癌细胞株5637增殖的抑制作用及其相关机制。方法采用MTT法观察不同浓度SB对人膀胱癌细胞株5637增殖的抑制作用;倒置显微镜下观察细胞形态变化;RT-PCR检测凋亡抑制因子Survivin的mRNA表达变化。结果MTT检测发现:随着SB浓度增加和作用时间延长,对人膀胱癌细胞株5637增殖的抑制作用增强,且各组间比较均有显著性差异(P<0.01),并呈时间-剂量依赖关系;倒置显微镜发现应用SB干预后,5637细胞体积缩小,变形,胞浆浓缩,核固缩深染;人膀胱癌细胞株5637中Survivin的mRNA表达随着SB浓度增加和时间延长相应下降。结论SB可抑制人膀胱癌细胞株5637的增殖;并下调凋亡抑制因子Survivin的mRNA表达。

雄激素受体在不同激素依赖特性的前列腺癌细胞株中的表达及活性

目的:探讨雄激素受体(AR)在前列腺癌激素依赖特性转变过程中的可能作用.方法:分别应用Western Blot和RT-PCR法检测四种前列腺癌细胞株(LNCaP,C4,C4-2及C4-2B)的AR蛋白表达差异和转录活性差异状况,并初步分析其在前列腺癌雄激素依赖特性转化过程中所发挥的作用.结果:AR在雄激素依赖的低转移性细胞株LNCaP中的蛋白表达量和转录活性最低,同时AR在雄激素非依赖的高转移性细胞株C4,C4-2及C4-2B细胞株中的蛋白表达、转录活性却逐渐增高.结论:AR在雄激素依赖特性和转移潜能不同的前列腺癌细胞株之间确实存在着有意义的差异表达,而这种表达差异可能在影响前列腺癌激素依赖特性转变过程中发挥重要作用.

缺氧诱导因子1α过表达对前列腺癌细胞血管生成能力的影响

目的:观察转染缺氧诱导因子1α(HIF-1α)对人前列腺癌细胞血管形成相关蛋白的影响,并探讨其分子机制。方法:用脂质体Lipofectamine2000包装重组真核表达载体pCDNA3.1(-)/HIF-1α后转染人前列腺癌细胞LNCaP,600μg/ml G418筛选稳定表达的抗性克隆。免疫荧光及Western印迹法鉴定HIF-1α过表达,Western印迹法检测血管形成相关蛋白血管内皮生长因子(VEGF)、iNOS、促血管生成素2(Ang-2)。结果:与未转染细胞LN-CaP相比,转染细胞LNCaP/HIF-1α中出现明显的HIF-1α蛋白条带,并激发出较强荧光,VEGF、iNOS表达增加,Ang-2未见明显变化。结论:HIF-1α过表达能够诱导LNCaP细胞血管形成相关蛋白表达增多,进而增强其体外血管形成能力。

转化生长因子β对前列腺癌LNCaP细胞株侵袭转移相关蛋白表达的影响及意义

目的:研究在体外培养条件下转化生长因子β(TGF-β)对前列腺癌LNCaP细胞株侵袭转移相关蛋白表达的影响,初步探讨TGF-β在前列腺癌侵袭、转移过程中的作用及可能的机制。方法:利用TGF-β干预处于对数生长期的前列腺癌LNCaP细胞,Western印迹法分别检测不同时间段细胞上皮型钙粘素、神经型钙粘素及波形蛋白的表达情况。结果:LNCaP细胞在TGF-β干预后,细胞侵袭转移的标志性蛋白神经型钙粘素、波形蛋白表达显著上调,以干预后12h最为明显;而上皮型钙粘素表达无明显改变。结论:TGF-β可能通过诱导低转移潜能的前列腺癌LNCaP细胞发生上皮细胞间质性转化,增强PCa的侵袭、转移能力。

核因子κB抑制蛋白α在膀胱癌细胞系的表达与上皮-间质转化及体外侵袭能力负相关

目的探讨核因子-κB抑制蛋白α(IκBα)在不同膀胱癌细胞系的表达与上皮-间质转化(EMT)及肿瘤细胞体外侵袭能力的关系。方法 Western blot法比较人膀胱癌RT4细胞、5637细胞、235J细胞、J82细胞、T24细胞IκBα、上皮性钙黏素(E-cadherin)、神经钙黏素(N-cadherin)和波形蛋白(vimentin)的表达差异;通过TranswellTM实验比较5种细胞体外侵袭能力的差异;显微镜下观察并比较5种细胞形态学差异。结果 RT4细胞和5637细胞具有上皮细胞的形态学特征,253J细胞、J82细胞和T24细胞具有间质细胞的形态学特征。RT4细胞和5637细胞具有较高的E-cadherin表达水平,但不表达vimentin和N-cadherin。253J细胞、J82细胞和T24细胞E-cadherin表达部分(253J)或完全(J82、T24)缺失,但vimentin和N-cadherin表达水平较高。RT4细胞和5637细胞的体外侵袭能力明显弱于253J细胞、J82细胞和T24细胞。RT4细胞和5637细胞IκBα表达水平明显高于253J细胞、J82细胞和T24细胞。结论 IκBα在膀胱癌细胞的表达水平与EMT及体外侵袭能力负相关。

Smad4在人前列腺癌细胞系LNCaP和ARCaP中的差异表达及意义

目的:探讨TGF-β/Smads信号转导的核心Smad4在前列腺癌转移潜能获得中的作用及可能的机制。方法:用Millicell体外侵袭试验观察LNCaP和ARCaP系IF-11、IA-8细胞株转移潜能的差异情况,分别应用Western印迹法和逆转录PCR鉴定这3种细胞株中Smad4蛋白及mRNA的差异表达。结果:ARCaP系IF-11、IA-8细胞株的体外侵袭潜能明显高于LNCaP细胞(P<0.01);但Smad4蛋白在低转移潜能的LNCaP细胞中高表达,而在高转移潜能的IF-11、IA-8中表达缺失(P<0.01),Smad4 mRNA表达结果与蛋白一致。结论:Smad4在转移潜能不同的前列腺癌细胞系间存在差异表达,Smad4表达缺失可能是晚期前列腺癌发生侵袭转移的机制之一。

长链非编码RNA母系表达基因3调节肾透明细胞癌增殖和凋亡的功能研究

目的观察长链非编码RNA（1ncRNA）母系表达基因3（MEG3）在人肾透明细胞癌组织和细胞株中的表达，探讨过表达MEG3后对细胞增殖和凋亡的影响。方法采用实时定量聚合酶链反应（Real—timePCR）检测MEG3在32对配对人肾透明细胞癌组织和癌旁症状组织及6株人肾透明细胞癌细胞株中的表达水平；在786-O细胞中稳定转染MEG3过表达质粒，分别利用噻唑蓝（MTF）实验和流式细胞实验分析MEG3过表达后对细胞增殖和凋亡的影响；Westernblot检测增殖与凋亡相关分子标志物。结果肾透明细胞癌组织和细胞株中MEG3的表达明显低于对应的正常组织和细胞株；空载pcDNA3．1细胞与稳定转染MEG3的pcDNA3．1-MEG3细胞MEG3表达水平分别为0．51±0．02和11．26±1．89，差异有统计学意义（P〈0．05）；MTF实验结果显示，MEG3过表达后786-O细胞的增殖活性显著降低（P〈0．05）；流式细胞术检测细胞凋亡比例，空载pcDNA3．1细胞与稳定转染MEG3的pcDNA3．1-MEG3细胞凋亡比例分别为（7．02±1．21）％和（13．95±5．48）％，差异有统计学意义（P〈0．05）；两株细胞株中MEG3的过表达均可导致细胞周期素D1（CyclinD1）下降和促凋亡蛋白B细胞淋巴瘤／白血病-2相关X蛋白（bax）上升。结论肾透明细胞癌中MEG3表达降低；MEG3可通过影响细胞增殖和凋亡在肾透明细胞癌中发挥抑癌作用。

脾脏远隔缺血预处理对兔肾脏缺血再灌注损伤的保护作用

目的探讨脾脏远隔缺血预处理对兔肾脏缺血再灌注损伤（RIRI）的保护作用及其机制。方法将36只健康雄性新西兰兔随机分为3组，每组12只。假手术组（Sham组）：仅行开腹，游离双侧肾脏后将左肾切除；缺血再灌注组（I／R组）：在Sham组操作方法的基础上将右肾动、静脉夹闭60min，恢复血供24h；远隔缺血预处理组（RIPC组）：先阻断脾静脉15min后放开，其余操作同I／R组。测定术毕24h血清中肌酐（Cr）和尿素氮（BUN）水平；收集部分右肾组织行病理学评分测定，Western blot检测Toll样受体4（TLR4）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的表达。结果与Sham组[（98．35±19．07）μmol／L、（8．49±1．35）mmol／L]比较，L／R组Cr、BUN[（354．23±27．49）μmol／L、（30．25±5．69）mmol／L]及RIPC组[（286．52±24．61）μmol／L、（19．78±3．81）mmol／L]水平均明显升高（P〈0．01）；与I／R组比较，RIPC组Cr、BUN水平均明显降低（P〈0．01）。Sham组病理学无明显改变，评分为0～1分，而RIPC组评分中位数（M）为2．0分，四分位间距（IQ）1．5低于I／R组评分（M3．5，IQ1．8，P〈0．05）。TLR4和TNF-α在Sham组（17．21±3．65、25．38±4．09）、RIPC组（93．51±18．04、98．76±19．14）及I／R组（125．93±20．27、147．81±21．03）的表达量依次升高（P〈0．05）。结论脾脏远隔缺血预处理对兔RIRI具有保护作用，其机制可能通过抑制TLR4信号传导通路，减轻RIRI导致的炎性反应有关。

环状RNA_0001495在膀胱癌组织的表达及其临床意义

目的探讨环状RNA(circRNA)_0001495表达水平与膀胱癌患者临床病理特征和预后的关系。方法选取2022年1月至2023年5月河南大学淮河医院收集的80例膀胱癌组织和癌旁组织作为研究目标, 检测癌旁组织和肿瘤组织中circRNA_0001495表达水平。分析circRNA_0001495表达水平与患者临床病理特征的关系。以circRNA_0001495表达水平的均值为界, 将患者分为高表达和低表达组, 采用生存曲线分析circRNA_0001495表达水平与患者预后的关系。结果癌旁组织中circRNA_0001495表达水平(1.21±0.14)明显低于膀胱癌组织(1.87±0.21), 差异有统计学意义(t=23.490, P<0.05)。T2~T4期患者circRNA_0001495表达水平(2.01±0.19)明显高于Tis-T1期患者(1.72±0.11), 差异有统计学意义(t=8.493, P<0.05)。低分化患者circRNA_0001495表达水平(2.00±0.18)明显高于中高分化患者(1.73±0.14), 差异有统计学意义(t=7.176, P<0.05)。淋巴结转移患者circRNA_0001495表达水平(2.07±0.15)明显高于未转移患者(1.72±0.10), 差异有统计学意义(t=12.440, P<0.05)。circRNA_0001495高表达患者3年生存率(72.97%)明显低于低表达患者(18.60%), 差异有统计学意义(Log-rank=27.280, P<0.05)。circRNA_0001495表达、TNM分期、组织学分级和淋巴结转移与膀胱癌患者预后有关(P<0.05)。circRNA_0001495高表达是膀胱癌患者预后的独立危险因素[风险比(HR)=1.126, 95%可信区间(CI):1.058~1.200, P<0.001]。结论膀胱癌组织中circRNA_0001495表达水平显著增加, 且与淋巴结转移、TNM分期和组织学分级密切相关, 且高表达患者预后较差。

膀胱癌细胞RT4和253J中转移相关蛋白的差异表达及意义

目的检测转移相关蛋白上皮型钙黏素（E—cadherin）和波形蛋白（Vimentin）在膀胱癌细胞RT4和253J中的表达，从细胞黏附性和骨架蛋白角度探讨膀胱癌恶性进展的分子机制。方法用Westernblot法测定RT4和253J两种细胞中E—cadherin和Vimentin的表达差异，Millicell小室检测RT4和253J的体外侵袭能力，分析RT4和253J的细胞特性。结果E—cadherin在RT4细胞中高表达、在253J细胞中低表达，而Vimentin在RT4细胞中表达缺失、在253J细胞中表达很高；Millicell证实253J细胞穿膜数较RT4细胞显著增多。结论人膀胱癌细胞RT4和253J的E—cadherin、Vimentin表达及两种细胞的侵袭潜能差异无统计学意义，提示这两种蛋白的表达差异在促进或抑制膀胱癌的恶性进展中起重要作用。

食管癌不同治疗方式对患者生命质量的影响

目的:研究食管癌单纯手术和单纯放射治疗对患者生命质量的影响。方法:用改良EORTCQLQC-30法对24例食管大部切除手术与50例单纯放射治疗的患者进行生命质量测评并比较。结果:食管癌手术后与单纯放射治疗在情感功能、认知功能、睡眠症状、吞咽症状、气促、腹泻、返流症状六个维度方面差别有统计学意义(P<0.05),其他维度差别无统计学意义。结论:食管癌手术治疗情感功能和认知功能优于放疗;睡眠症状和吞咽症状少于放疗;气促、腹泻、返流症状得分多于放疗。手术治疗患者的生命质量在总体上优于单纯放疗。

环状RNA_0001495/微小RNA-527/Robo1轴对膀胱癌细胞增殖和转移的影响

目的探讨环状RNA(circRNA)_0001495/微小RNA(miR)-527/Robo1轴对膀胱癌细胞增殖和转移的影响。方法人膀胱癌细胞系T24培养至对数生长期,分为circRNA对照组和circRNA_0001495KD组,采用对照circRNA短发卡RNA(shRNA)和circRNA_0001495shRNA慢病毒感染T24细胞,建立稳转细胞系。分别采用细胞计数试剂盒(CCK-8)和5-乙炔基-2脱氧尿嘧啶核苷(EdU)染色分析两组细胞增殖能力;采用划痕实验和Transwell实验分析两组细胞迁移和侵袭能力。生物信息学和双荧光素酶报告基因分析circRNA_0001495的靶基因;采用荧光定量聚合酶链反应(PCR)分析circRNA_0001495靶基因miR-527表达水平;采用蛋白质印迹法(Westernblot)分析miR-527的靶蛋白。组间计量数据比较采用t检验。结果对照组细胞circRNA_0001495表达水平(1.02±0.06)明显高于circRNA_0001495KD组细胞(0.67±0.05),差异有统计学意义(t=10.750,P<0.05)。对照组细胞吸光度(A)值水平(1.97±0.06)明显高于circRNA_0001495KD组细胞(1.67±0.09),差异有统计学意义(t=6.262,P<0.05)。对照组细胞EdU阳性率水平(1.97±0.06)明显高于circRNA_0001495KD组细胞(1.67±0.09),差异有统计学意义(t=6.262,P<0.05)。对照组细胞划痕愈合率[(79.65±4.05)%]明显高于circRNA_0001495KD组细胞[(55.13±5.41)%],差异有统计学意义(t=8.880,P<0.05)。对照组细胞迁移数量[(114.50±12.37)个]明显高于circRNA_0001495KD组细胞[(84.50±12.90)个],差异有统计学意义(t=4.112,P<0.05)。miR-527是circRNA_0001495的靶基因。对照组细胞miR-527表达水平(0.88±0.05)明显低于circRNA_0001495KD组细胞(1.38±0.10),差异有统计学意义(t=10.690,P<0.05)。Westernblot结果显示,对照组细胞Robo1蛋白表达水平(1.25±0.14)明显高于circRNA_0001495KD组细胞(0.79±0.08),差异有统计学意义(t=7.196,P<0.05)。结论circRNA_0001495敲降可显著抑制膀胱癌细胞的增殖和转移,可能通过靶向调节miR-527/Robo1轴实现的。