MiR-34a介导mTOR/4E-BPmir信号通路对食管癌细胞凋亡作用机制研究

目的:探究MiR-34a介导mTOR/4E-BP1信号通路对食管癌细胞凋亡作用机制研究。方法:在ATCC细胞库购买食管癌细胞株,随机分为3组,第一组,miR-34a组(miR-34a组):通过转染方法将miR-34a mimics转染到食管癌细胞中;第二组,食管癌组(EC组):单纯食管癌细胞株不做其他处理,正常培养;第三组,空转组(ID组):将miR-34a阴性对照转染到食管癌细胞株中。通过qRT-PCR法、TUNEL法、cck-8法、Westernblot法检测食管癌细胞中miR-34a mRNA的表达含量、凋亡情况、增殖情况、mTOR/4E-BP1的蛋白含量的差异性来探究MiR-34a介导mTOR/4E-BP1信号通路对食管癌细胞凋亡作用机制研究。结果:qRT-PCR检测结果显示,EC组食管癌细胞内的miR-34a mRNA表达量最低,miR-34a组食管癌细胞内的miR-34a mRNA表达量最高,miR-34a组与ID组、EC组相比较miR-34a mRNA含量显著上升,说明转染成功(P<0.05)。TUNEL检测结果显示EC组食管癌细胞凋亡数量最少,miR-34a组食管癌细胞大量凋亡,miR-34a组与EC组、ID组相比较细胞凋亡率显著升高(P<0.05),EC组与ID组细胞凋亡无显著差异。ID组、EC组细胞增殖OD值比miR-34a组高,组间比较具有明显差异(P<0.05),EC组食管癌细胞的增殖数量最多,miR-34a组食管癌细胞的增殖数量最少,ID组食管癌细胞的增殖情况比EC组相比无明显差异(P>0.05)。通过Western blot法,对EC组、ID组、miR-34a组食管癌细胞内的mTOR/4E-BP1蛋白进行免疫印迹,灰度显示,EC组的mTOR/4E-BP1蛋白含量最高,EC组与ID组相比较,蛋白含量相近,无显著性(P>0.05),miR-34a组蛋白含量最低,miR-34a组和EC组、ID组相比较,食管癌细胞中蛋白含量降低(P<0.05)。结论:MiR-34a可能通过抑制mTOR/4E-BP1信号通路的表达来促进食管癌细胞的凋亡。

伊伐布雷定对病毒性心肌炎大鼠Bcl-2基因启动子区甲基化及mRNA表达的影响

目的探讨伊伐布雷定对病毒性心肌炎大鼠Bcl-2基因启动子区甲基化及mRNA表达的影响。方法将SPF级雄性SD大鼠随机分为对照组、模型组、伊伐布雷定低剂量组(4 mg/kg)、伊伐布雷定中剂量组(8 mg/kg)、伊伐布雷定高剂量组(12 mg/kg)。除对照组外,其余各组大鼠均采用腹腔接种柯萨奇病毒制备病毒性心肌炎大鼠模型,首次接种柯萨奇病毒后24 h给予药物干预,每日1次,连续干预2周,观察各组大鼠心肌功能。苏木精-伊红(HE)染色观察心肌组织细胞病理变化,脱氧核苷酸转移酶标记技术(TUNEL)检测心肌组织细胞凋亡情况,实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测凋亡相关基因mRNA表达情况,甲基化特异性PCR(MSP)检测Bcl-2启动子区甲基化水平。结果模型组肌酸激酶同工酶(CK-MB)、肌红蛋白(Mb)、心肌肌钙蛋白I(cTnI)和乳酸脱氢酶(LDH)水平高于对照组(P<0.05);伊伐布雷定低剂量组、中剂量组、高剂量组CK-MB、Mb、cTnI和LDH水平低于模型组(P<0.05)。HE染色结果显示:模型组心肌组织存在明显炎性浸润、细胞坏死;伊伐布雷定低剂量组、中剂量组、高剂量组心肌组织损伤较模型组明显改善。模型组心肌组织细胞凋亡指数、Bax mRNA、CytC mRNA水平高于对照组(P<0.05),Bcl-2 mRNA水平低于对照组(P<0.05);伊伐布雷定低剂量组、中剂量组、高剂量组心肌组织细胞凋亡指数、Bax mRNA、CytC mRNA水平低于模型组(P<0.05),Bcl-2 mRNA水平高于模型组(P<0.05)。MSP检测结果显示:模型组Bcl-2基因启动子区DNA甲基化水平高于对照组(P<0.05);伊伐布雷定低剂量组、中剂量组、高剂量组Bcl-2基因启动子区DNA甲基化水平低于模型组(P<0.05)。结论伊伐布雷定可缓解病毒性心肌炎大鼠心肌组织细胞凋亡,可能与降低Bcl-2基因启动子区DNA甲基化有关。