发根农杆菌介导的闽楠遗传转化体系构建与优化

闽楠[Phoebe bournei(Hemsl.)Yang]为我国重要的珍贵树种。为建立闽楠遗传转化体系,以闽楠幼苗为材料,利用pCAMBIA1300-GFP质粒转化的发根农杆菌介导植株转化。在比较注射和菌液浸泡两种侵染方式侵染效率的基础上,进一步利用正交[L9(3^(3))]试验从菌株种类、菌液侵染浓度和侵染植株苗龄三个方面优化了遗传转化体系。另外,对不同光强影响闽楠毛状根诱导及转化率情况进行了分析。结果表明,注射法的毛状根诱导率和遗传转化率分别为80.0%、66.7%;而菌液浸泡法的诱导率和遗传转化率分别为41.2%、35.3%。正交试验中,影响闽楠毛状根诱导率和遗传转化率的主要因素为菌株种类。最大诱导率和转化效率分别达到了87.5%、70.6%。该体系的最优组合为:K599菌株在菌液浓度OD_(600)=1.2条件下注射侵染三叶期的闽楠幼苗。此外,较弱光强(50μmol·m^(-2)·s^(-1))的培养条件比较强光照(100μmol·m^(-2)·s^(-1))更有利于闽楠幼苗的生长和遗传转化。本研究创建并优化了一套高效、稳定的闽楠遗传转化体系,成功获得了具有转基因毛状根的闽楠植株,为闽楠重要基因挖掘、新种质创建和遗传改良奠定了基础。

茭白肉质茎膨大发育的生化基础研究

文研究了茭白肉质茎不同发育阶段的碳水化合物、蛋白质以及几种酶的变化情况 ,分析了这些生化代谢与茭白肉质茎发育的可能关系。结果表明 :茭白肉质茎发育的早期主要表现为重量的快速增加 ,后期则为重量和体积均快速地增长。碳水化合物中总糖和还原糖在肉质茎发育的早期迅速上升 ,之后有所下降。而蔗糖则呈现先上升 ,后稳定的趋势。淀粉的含量在肉质茎发育过程中一直上升。木质素和纤维素在肉质茎发育的早期含量较高 ,随着茎的发育 ,其含量持续下降 ,发育后期二者的含量又明显上升。蛋白含量前期上升 ,后期下降。对茭白肉质茎发育过程中酶活性的研究表明 ,超氧化物歧化酶和过氧化氢酶活性不断下降 ,而过氧化物酶活性持续上升。苯丙氨酸解氨酶活性在茎发育过程中不断下降 ,后期又有所上升。

甘薯块根特异蛋白——Sporamin的研究进展

Sporamin是在甘薯块根中特异表达的一类特殊贮藏蛋白 ,它不仅具有一般贮藏蛋白的特性 ,而且还具有胰蛋白酶抑制剂的活性 ,并与甘薯块根的形成过程密切相关。本文就近年来对该块根特异蛋白的特性和功能 ,以及在分子生物学水平上的研究进展进行了综述。

葱蒜类作物中的蒜氨酸酶

介绍了蒜氨酸酶的性质 ,影响其活性的因素 ,动力学特性及其编码基因的结构。

高等植物花生长和花色素苷生物合成的信号调控

介绍了赤霉素。

盐酸异丙嗪的微波增敏方波伏安法测定

以玻碳电极作工作电极,在微波作用下用循环伏安法和方波伏安法研究了盐酸异丙嗪的电化学特性,结果表明微波可以增大峰电流,并应用于盐酸异丙嗪的检测,建立了一种新的检测盐酸异丙嗪的电化学方法。在最佳实验条件下,无微波作用时用方波伏安法检测盐酸异丙嗪,其响应电流与盐酸异丙嗪的浓度在4.0×10-6～1.0×10-4mol/L范围呈线性关系(r=0.9982,n=7),线性回归方程为I(A)=0.0403c(mol/L)+5.0×10-7,检出限为4.0×10-7mol/L;在微波作用下用方波伏安法检测盐酸异丙嗪,其响应电流与盐酸异丙嗪的浓度在4.0×10-6～1.0×10-4mol/L范围有很好的线性关系(r=0.9991,n=7),线性回归方程为I(A)=0.0457c(mol/L)+6.0×10-7,检出限为2.0×10-7mol/L。在4.0×10-6～1.0×10-4mol/L范围微波增敏的峰电流与无微波条件下峰电流的比值平均值为1.22。该方法用于盐酸异丙嗪片的测定,结果满意。

茭白肉质茎膨大期间主要成分的变化

在茭白(‘浙茭二号'品种)植株旺盛生长期,选择长势和生长状态一致的植株,于肉质茎膨大发育初期,选取肉质茎膨大进程相似的植株挂牌标记.每次取样15～20个嫩茎,共取样6次,进行有关指标的测定.

L-半胱氨酸修饰金电极电化学发光法测定罗红霉素

在裸金电极上制备了L-半胱氨酸自组装膜修饰电极(L-Cys-Au/SAM/CME)。考察了联吡啶钌和罗红霉素在此修饰电极上的电化学及其发光行为。结果表明,此修饰电极表现出了很好的电化学活性和电化学发光(ECL)响应。基于罗红霉素的存在可增大了联吡啶钌的发光强度,建立了测定罗红霉素片的电化学发光分析方法。在最佳实验条件下,罗红霉素浓度在1.0×10-7～1.0×10-4mol/L范围内与其相对发光强度呈线性关系,其线性回归方程为I=2×107C+384.02,r=0.9977;检出限(S/N=3)为1.0×10-7mol/L。连续测定1.8×10-5mol/L罗红霉素10次,发光强度的RSD为1.93%,表明此修饰电极具有较好的重现性,并将本方法用于罗红霉素片剂的检测。

光皮桦SSR分子标记体系的建立

采用十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)-硅珠法提取光皮桦Betula luminifera嫩叶DNA,利用近缘种日本白桦B.platyphylla var.japonica和欧洲白桦B.pendula的引物,建立光皮桦简单重复序列标记(SSR)反应体系。在体系建立过程中,采用单因素法分别对影响聚合酶链式反应(PCR)反应的因素进行分析。结果表明:在20μL反应体系中,模板DNA用量、Mg2+浓度、脱氧核糖核苷酸(dNTPs)浓度、引物浓度、Taq DNA聚合酶用量分别为60ng,1.500mmol·L-1,0.175mmol·L-1,2.500mmol·L-1,1.0×16.67nkat时结果最好;引物退火温度比日本白桦扩增时提高1℃时效果佳。PCR扩增产物经聚丙烯酰胺凝胶电泳后随机挑取其中3对引物扩增的多态性片段进行克隆测序,对引物的通用性做进一步检验,序列经比对后得到的与原物种序列相似度(max ident值)均在95.0%以上。可见,近缘种日本白桦和欧洲白桦的SSR引物可以在光皮桦上应用。

阿苯达唑的微波-循环伏安法测定

以玻碳电极为工作电极，在微波作用下采用循环伏安法研究了阿苯达唑的电化学特性，结果表明微波可以增大阿苯达唑的氧化峰电流，据此建立了一种新型检测阿苯达唑的电化学方法。在优化实验条件下，无微波作用时，响应电流与阿苯达唑的浓度在4．0×10-5～1．0×10-3mol／L范围内呈线性关系，线性方程为Ip（μA）=8．3036c（mmol／L）＋0．7271（r=0．9993，n=7），检出限为1．78×10-5mol／L；在80w微波作用下，阿苯达唑的峰电流增大近1倍，响应电流与阿苯达唑的浓度在2．0×10-5 -1．0×10-3mol／L范围内呈线性关系，线性方程为Ip（μA）=15．41c（mmol／L）＋1．4359（r=0．9989，n=8），检出限为1．01×10-5mol／L。研究表明，微波一循环伏安法测定阿苯达唑具有较高的选择性和灵敏度，且样品处理简单快速，用于阿苯达唑片的测定，结果满意。

厚朴AFLP分子标记体系的建立

以厚朴Magnolia officinalis为材料,通过对扩增片段长度多态性(AFLP)反应体系中的酶切模板用量、扩增条件等几个方面进行优化,建立了较为理想的厚朴AFLP反应体系。结果表明:①采用十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)硅珠法提取的DNA质量较好,适用于AFLP分析。②酶切的基因组DNA以400ng为宜;预扩增产物的稀释倍数以30倍为宜;20.00μL选扩反应体系中Mg2+最佳浓度为2.00mmol·L-1,三磷酸脱氧核苷酸(dNTPs)最佳浓度为0.225mmol·L-1,Taq DNA聚合酶最佳用量为16.67nkat时,扩增带清晰且稳定,扩增效果较好。旨在为研究厚朴天然种群的遗传多样性及遗传结构分析、新品种选育及鉴定和遗传图谱构建等奠定理论基础。

多壁碳纳米管修饰电极检测盐酸氯丙嗪的研究

制备了多壁碳纳米管修饰玻碳电极，采用循环伏安法（CT）研究了盐酸氯丙嗪在修饰电极上的电化学特性，发展了一种新的检测盐酸氯丙嗪的电化学分析方法。在最佳实验条件下，用循环伏安法检测盐酸氯丙嗪，其响应电流与盐酸氯丙嗪的浓度在8．0×10-5～1．0×10-3mol／L范围内有很好的线性关系，线性方程为Ip（A）=0．0106c（mol／L）-8×10-8（R2=0．999，n=6），检出限为6．2×10-6mol／L（S／N=3）。方法可用于盐酸氯丙嗪片的测定。

光皮桦BlFTL基因的克隆和表达模式

通过反转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）结合如cDNA末端快速克隆（RACE）技术从光皮桦Betula luminifera中克隆到1个FT类似基因,命名为BlFTL。该基因cDNA全长为924 bp（GenBank登录号：JQ951966）,包含1个525bp的开放阅读框（116~640 bp）,编码1个含174个氨基酸的蛋白,且具有FT蛋白典型的磷脂酰乙醇胺结合蛋白（PEBP）结构域。与已有部分植物中FT蛋白同源比对结果显示,BlFTL与无花果Ficus carica中FcFT序列相似性最高,达到了94%。4月为光皮桦开花期,雌花中BlFTL基因的表达量最高,茎和叶片中表达量很低。比较正常开花和不开花无性系植株嫩茎和叶片在不同时间BlFTL基因的表达情况,结果表明：BlFTL在不开花无性系植株中基本不表达,而正常开花植株中,BlFTL主要在雌花序和混合芽形成的8月以后表达。

大豆卵磷脂的研究现状

大豆卵磷脂是大豆油生产过程的副产品,是一种理想的多用途天然原料,具有十分独特的功能和作用,并已在许多领域内得到广泛的应用。本文介绍了大豆卵磷脂的化学结构、理化性质、应用、制备和分析等方面的研究概况,展示了其在食品、药品、化妆品等领域的应用前景。

巨桉低温胁迫响应基因EgrCR的表达与功能

【目的】通过对巨桉中冷响应基因EgrCR(Eucgr.B02857)的蛋白序列特征、亚细胞定位、低温等非生物逆境条件下的表达以及拟南芥中该基因超表达株系的表型分析,探讨EgrCR基因在巨桉响应低温等非生物逆境中的作用。【方法】利用Protparam,PSIPRED,TMHMM,Mat Inspector和MEGA等生物信息学软件,预测EgrCR编码蛋白结构特征、启动子上的重要顺式作用元件,并构建其同源蛋白序列进化树;同时,采用基因枪轰击洋葱表皮方法进行基因编码蛋白亚细胞定位分析;组织特异性表达及低温等非生物逆境及昼夜节律下的表达分析,分别采用半定量和定量RT-PCR方法。通过构建35S::EgrCR超表达载体转化拟南芥,观察转基因株系在不同低温(0,4℃)处理下的表现,研究该基因对低温响应的功能特性。【结果】EgrCR编码的蛋白序列含有144个氨基酸,二级结构中包含4个α螺旋、3个β折叠,没有预测到结构域、跨膜域的存在。在进化的亲缘关系上,EgrCR与毛果杨中的同源蛋白亲缘关系最近,氨基酸序列相似度达到68%。在其启动子序列上含有多个与植物逆境响应相关的顺式作用元件。亚细胞定位结果表明其编码蛋白在核中表达。正常条件下,EgrCR主要在茎和叶中表达。不同低温(0,2,4,6,8℃)处理和4℃低温下随处理时间(2,6,12,24,48 h)的延长,EgrCR受到强烈的诱导。ABA(100μmol·L^(-1))对EgrCR表达没有明显影响,而NaCl(200 mmol·L^(-1))处理下则表现为先抑制后促进。昼夜节律也影响EgrCR的表达,光照下基因表达被诱导,黑暗条件下基因表达受抑制。拟南芥中EgrCR超表达转基因株系4℃处理条件下,花青素苷积累现象减轻;0℃处理3天再恢复生长1周后,超表达株系能快速恢复生长,表现出较强的耐低温能力。【结论】EgrCR基因参与巨桉低温胁迫响应,还可能参与巨桉的高盐胁迫响应,昼夜节律对其表达也有影响。

联吡啶钌体系电化学发光法测定舒必利的研究

采用了循环伏安(CV)和电致化学发光(ECL)法,研究了舒必利增强联吡啶钌[Ru(bpy)23+]体系的电化学行为和电化学发光行为,建立了以玻碳电极为工作电极的舒必利电致化学发光分析方法。研究结果表明,在0.1mol/L的磷酸盐缓冲溶液(pH=7.5)中,扫描速度为100mV/s时,ECL的峰高与舒必利浓度在4.0×10-7～1.0×10-4mol/L范围内呈线性关系,相关系数r=0.9957,检出限(S/N=3)为5.3×10-8mol/L。连续平行测定2.0×10-5mol/L的舒必利溶液10次,发光强度值的相对标准偏差(RSD)为1.56%。对样品进行回收率试验,回收率在95.0%～105.0%之间,RSD为4.43%(n=5)。该方法具有较高的选择性和灵敏度,样品处理简单快速,用于药物中舒必利的测定,结果满意。

多壁纳米碳管/二氧化硅复合膜中的联吡啶钌电化学发光法测定氧氟沙星的研究与应用

基于氧氟沙星对联吡啶钌(Ru(bpy)32+)电化学发光的增敏作用,建立了一种以多壁纳米碳管(MWCNTs)/二氧化硅-联吡啶钌复合物修饰的玻碳电极电化学发光检测氧氟沙星的新方法。利用溶胶-凝胶(sol-gel)固定化稳定的优点和纳米碳管的电催化作用,提高了传感器的电流响应。在最佳实验条件下,氧氟沙星浓度在4.0×10-6~1.0×10-4mol/L范围内与相对发光强度呈线性关系(r2=0.994 8),检出限(S/N=3)为2.0×10-6mol/L。连续平行测定2.4×10-5mol/L的氧氟沙星溶液5次,发光强度的RSD为1.8%。

壳聚糖/多壁碳纳米管修饰石墨电极-流动注射双安培法测定双氯芬酸钠

制备了壳聚糖/多壁碳纳米管修饰石墨电极(记为CS-MCNT′s/GE),并采用循环伏安法研究了双氯芬酸钠在该修饰电极上的电化学行为。基于双氯芬酸钠在CS-MCNT′s/GE上的催化氧化和不可逆电对的双安培检测原理,通过偶合双氯芬酸钠的氧化和MnO4-在铂电极上的还原两个不可逆电极过程,提出了流动注射双安培法直接测定双氯芬酸钠浓度的方法。在pH 6.8的磷酸盐缓冲溶液中,外加电位差为0 V时,双氯芬酸钠的峰电流与其浓度在8.0×10-7～2.0×10-4mol.L-1范围内呈线性关系,检出限(3S/N)为2.0×10-7mol.L-1。连续测定1.0×10-5mol.L-1双氯芬酸钠标准溶液20次,相对标准偏差为4.75%,以双氯芬酸钠片为基底,加标回收率在98.0%～105.5%之间。

巨桉糖基转移酶基因EgrGATL1序列特征及表达分析

EgrGATL1(Eucgr.I01882)是巨桉Eucalyptus grandis糖基转移酶GT8家族中GATL子类GATL-a子组的成员,多参与细胞壁组分如果胶、木聚糖等的生物合成。实时定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)分析表明:EgrGATL1在木质部和韧皮部的相对表达量较高;不同低温(-8,-4,0,4,8℃)和4℃不同时间(0,2,6,12,24,48 h)处理对EgrGATL1都有强烈诱导作用。4℃不同时间处理下,EgrGATL1基因共表达产物主要参与代谢途径分析数据库(KEGG)中的糖代谢和氨基酸代谢途径。干旱胁迫对EgrGATL1有诱导作用;100μmol·L^(-1)茉莉酸甲酯(MeJA)处理对EgrGATL1表达呈现瞬时诱导效应;200 mmol·L^(-1)氯化钠(NaCl)和100μmol·L^(-1)脱落酸(ABA)对其表达有抑制作用,而且随处理时间延长,2种处理对EgrGATL1的抑制规律有很强同步性。这些结果说明:EgrGATL1有可能通过参与细胞壁组分生物合成和ABA等植物生长调节剂活性调控,在巨桉低温、干旱和高盐等非生物逆境响应过程中发挥一定作用。