茶尺蠖羧酸酯酶EoCarE592的重组表达及其对农药的降解能力测定

【目的】原核表达茶尺蠖Ectropis obliqua羧酸酯酶(carboxlesterase,CarE)基因EoCarE592,并探讨重组蛋白对农药的降解能力。【方法】构建原核表达载体pET-32a-EoCarE592,转化大肠杆菌Escherichia coli BL21异源表达,SDS-PAGE和Western blot鉴定重组蛋白,并对包涵体蛋白变复性;通过固蓝B盐比色法的含量标准曲线测定重组EoCarE592酶活性以及温度、pH和金属离子对酶活性的影响;利用气相色谱检测EoCarE592在30℃pH 7.0和0,4,8,12,16,20及24 h时对200 mg/L的高效氯氟氰菊酯(lambda-cyhalothrin)、甲基对硫磷(methyl-parathion)和异丙威(isoprocarb)降解能力。【结果】通过大肠杆菌异源表达得到重组EoCarE592包涵体蛋白,经尿素变复性后得到酶活性29.8 U的重组EoCarE592,其最适温度30℃左右、最适pH 7.0~8.0左右、Mg^(2+)和K^(+)对酶活有促进作用;重组EoCarE592能在30℃,pH 7.0,24 h内对初始浓度为200 mg/L的高效氯氟氰菊酯、甲基对硫磷和异丙威降解率分别为81.30%,83.94%和79.83%。【结论】羧酸酯酶EoCarE592能降解高效氯氟氰菊酯、甲基对硫磷和异丙威,可能参与茶尺蠖的解毒过程。本研究为环境和果蔬中农药残留的降解奠定了基础。