抗G与抗D/抗C的特异性识别策略及其在RhD阴性孕妇同种免疫妊娠中的应用

目的 建立完善的抗D、抗C和抗G的血清学检测方法及鉴别策略,对已产生抗G并且存在产生抗D风险的孕妇注射Rh免疫球蛋白的可行性和必要性给与证据支持,以预防新生儿溶血病。方法 对不规则抗体鉴定初检为抗D和C阳性的RhD阴性孕妇,根据抗G可与D、 C抗原反应及与C抗原的结合性强于D抗原的特性,从献血员中随机选择ABO同型dCcee悬浮红细胞作为第一次吸收细胞,与待检血清进行吸收放散试验,分别检测其吸收后血清及放散液,以确定待检血清中是否存在抗D、抗G;再随机选择ABO同型DccEE悬浮红细胞作为第二次吸收细胞,与待检血清进行反应,吸收完全后上清液与C+D-红细胞反应以确定待检血清中是否存在抗C。结果 使用两次吸收放散方法,鉴定8例待检标本,结果显示1例标本存在抗D、抗C及抗G;2例标本存在抗D及抗G;2例标本存在抗C及抗G;3例标本经吸收放散试验鉴定为存在抗D及抗C。结论 通过两次吸收放散试验,即可有效区分抗D、抗C及抗G,这有利于更好的管理RhD阴性孕妇妊娠期间的同种免疫反应,并有助于产前有针对性地注射Rh免疫球蛋白,有效预防Rh阴性胎儿新生儿溶血病。

去白细胞血成分在器官移植中的应用

目的 观察去白细胞血成分在肝、肾、心脏、小肠移植术中输血的临床意义 .方法 观察输注去白细胞血成分 (A组 )移植患者 16例 (肾移植 6例、肝移植 4例、心脏移植 5例、小肠移植 1例 )和输注未去白细胞血成分 (B组 )患者 2 3例 (肾移植 16例、肝移植 1例、心脏移植 5例、小肠移植 1例 )的淋巴细胞毒试验、HLA群体反应性抗体PRA水平、非溶血性发热输血反应 (NHFTR)、急性排斥反应发生率及输血后移植物抗宿主病 (TA GVHD)的发生情况 .结果 A组患者 16例中发生过敏性荨麻疹和急性排斥反应各 1例 ,B组患者 2 3例中发生NHFTR 9例 (43.4 % )和急性排斥反应 13例 (5 6 .5 % ) ,两组有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ;A组淋巴细胞毒交叉配合试验阳性率低于B组 (<10 %vs >80 % ,P <0 .0 5 ) ;A组输血后PRA <10 % ,B组 >10 % (10 %～ 85 % ,P <0 .0 5 ) .A组无GVHD发生 ,B组发生GVHD 1例 .结论 器官移植输注去白细胞成分血安全有效 ,有利于移植器官成活 ,能减少因输注白细胞引起的输血反应 .

2例活体肝部分移植术输血治疗的比较

目的 介绍 2例我院成功开展的活体肝部分移植术输血治疗配合情况 ,并对 2例情况不同病例的输血治疗方法进行分析与比较 ,总结和积累在器官移植方面的输血经验。方法 2例活体肝部分移植术病例供受体情况各异 ,输血方法有所不同 ,对其进行比较。病例 1为血缘关系者父女间同型活体肝部分移植术 ,病例 2为无血缘关系者间异型活体肝部分移植术。根据不同供受体情况给予不同的术前准备 ,根据活体肝移植术的病理发展变化及出凝血功能调控在术中、术后输注不同的血液成份。结果 安全、合理的输血治疗 ,预防了急性、超急性排斥反应及输血副反应的发生 ,出凝血功能得以有效调控 ,未发生严重的出血及血栓 ,供肝均移植成活。结论 有效、合理的输血治疗 ,在器官移植尤其是活体肝移植术中有重要意义 ,是手术成功的保障。此 2例活体肝移植的输血治疗方法 。

三种抗-HCV检测试剂盒对无偿献血者筛检价值评价

目的 :评价 3种抗 HCV筛检试剂对无偿献血者的筛检价值 .方法 :以卫生部临床检验中心抗 HCV临床科研血清盘标本 5 0份为评价标本 ,分别用快速试剂法 ,国产ELISA试剂及进口ELISA试剂对评价标本作盲法检测 ,以卫生部临床检验中心血清盘标本所提供的阴性和阳性结果为金标准 ,用四格表法计算出评价真实性及可靠性指标 ,并对ELISA法的cut off值的合理性进行评价 .结果 :快速试剂法 ,国产英科新创ELISA试剂盒与进口傲拓ELISA试剂盒的灵敏度分别为4 8% ,88% ,76 % ,特异度均为 1 0 0 % ,准确度分别为 74 % ,94 % ,88% .约登指数分别为 0 .4 8,0 .88,0 .76 .3种试剂盒的重复符合率均为 1 0 0 % .国产英科新创ELISA试剂盒规定的cut off值是合理的 ,而进口傲拓ELISA试剂盒规定的cut off值太高 .结论 :3种试剂盒的灵敏度与准确度以国产ELISA试剂盒为最好 ,3种试剂盒的重复性均好 ,因此使用 2种优选的国产ELISA试剂盒对血液进行联合筛检 ,既可以保证输血的安全性 。

106株临床绿脓杆菌的血清型和药敏谱

绿脓杆菌的感染率和抗药性逐年增高,因而对传染源的追踪和抗药性的测定有重要意义。本文应用血清分型和药敏谱测定相结合的方法,对临床106株绿脓杆菌进行了流行病学和抗药性的调查,结果表明,这两种方法的结合在医院内感染的调查中有重要意义。

我国不同肝炎患者及献血员中SENV-D/H感染流行病学调查

目的了解SEN病毒(SENV)D亚型和H亚型在我国不同肝炎患者和献血员中的感染情况。方法采用巢式聚合酶链反应对收集的270例健康献血者和484例各型肝炎患者(包括甲肝、乙肝、丙肝和非甲非戊型肝炎患者)进行SENV-D亚型和H亚型DNA检测。结果无偿献血者中SENV-D的感染率为25.9%,SENV-H为24.4%;急性甲肝患者中SENV-D的感染率为14.5%,SENV-H为32.7%;慢性乙肝患者中SENV-D的感染率为46%,SENV-H为45.2%;在丙肝患者中SENV-D和SENV-H感染率均为65%;在非甲-非戊型肝炎患者中SENV-D的感染率为51.2%,SENV-H为43.9%。结论SENV可能与HCV和HBV具有一样的传播方式,但并不是肝病发生的原因。

CCR5Delta32基因在人PBMC的表达及其对CCR5/CXCR4分子的影响

目的:在人外周血单个核细胞(PBMC)内表达CCR5Delta32蛋白,研究该蛋白与CCR5和CXCR4分子间是否存在相互作用。方法:构建pLenti-CCR5Delta32慢病毒载体,包装后产生重组慢病毒。将其转染PBMC,荧光显微镜观察转染情况,Western blot鉴定目的蛋白表达,免疫共沉淀检测目的蛋白与CCR5和CXCR4分子间的相互作用。结果:成功构建了pLenti-CCR5Delta32慢病毒载体,经包装后产生重组慢病毒,滴度约为5×108TU/L。将其转染PBMC,观察到约半数PBMC胞质内有绿色荧光蛋白表达,经Western blot鉴定有目的蛋白表达。免疫共沉淀结果显示,CCR5Delta32与CCR5、CCR5Delta32与CXCR4以异源二聚体形式结合,之间确实存在着相互作用。结论:成功地构建重组慢病毒载体并将其转染PBMC靶细胞,观察到目的蛋白与HIV-1两类辅受体(CCR5和CXCR4)间确实存在相互作用。这些工作为后续的AIDS基因治疗研究奠定了基础。

人CCR5Delta32基因重组慢病毒载体的构建及表达

目的:构建含人CCR5Delta32基因的重组慢病毒载体并鉴定其表达性能。方法:从CCR5Delta32突变个体外周血单个核细胞(PBMCs)内提取人基因组DNA,利用PCR技术扩增CCR5Delta32全长基因,经EcoRI单酶切后与pUCm-T载体连接,随后转化感受态E.coliDH5α,提取质粒进行酶切鉴定及DNA测序。再将鉴定正确的CCR5Delta32基因亚克隆至慢病毒载体pLenti6/V5-D-TOPO并进行酶切鉴定及DNA序列分析。最后用pLP1、pLP2、pLP/VSVG及pLenti-CCR5Delta32四种质粒共转染293T细胞,产生重组慢病毒并通过Western blot鉴定目的基因在靶细胞内的表达。结果:经PCR扩增获得约650bp的DNA片段,测序结果与发表于GenBank上的序列完全一致。经酶切鉴定,克隆的目的基因已经正确插入到慢病毒载体pLenti6/V5-D-TOPO中。四种质粒共转染293T细胞,产生出5×105TU/ml高滴度的重组慢病毒。用其感染靶细胞,Western blot结果显示有目的蛋白表达。结论:成功构建了含人CCR5Delta32基因的重组慢病毒载体并将其在293T细胞内表达,为进一步AIDS基因治疗研究奠定基础。

SEN病毒D亚型ORF-1C端基因的克隆、表达和鉴定

目的:获得SENV -D亚型ORF1 -C端蛋白基因序列,并进行表达,为进一步研究及诊断、治疗应用奠定基础.方法: 用PCR法从SENV阳性血清中获得SENV- DORF1C端基因,测序验证后,构建了pQE30 SENV D重组表达质粒,并经过转化E.coliM15,IPTG诱导表达,Westernblot分析表达结果. 结果: 获得了正确序列的SENV- D亚型ORF1- C端蛋白r约为38×103 的蛋白. 表达蛋白能与患者血清中相应的抗体结合,发生抗原抗体反应. 结论: 成功获得并表达了SENV -D ORF1 -C端蛋白,并经Westernblot印迹法证实能与阳性血清中的抗体发生抗原抗体反应,有可能用于检测SENV- D抗体. 为今后进一步研究有助于疫情监测及早期发现感染者的抗体奠定了坚实的基础.

rhEPO对自身贮血的影响

目的 :评价rhEPO对健康献血者自身贮血过程中红细胞的动员作用 .方法 :rhEPO 15 0U·kg-1,sc,2次·wk-1,观察自体贮血后Hb ,Ret,Hct,PLT及HP等的变化 .结果 :试验组Ret比例明显高于对照组 (P <0 0 1) ,试验组与对照Hb含量 ,Hct在自身贮血后均有不同程度下降 ,但实验组下降幅度明显小于对照组 ,两组间差异十分显著 (P <0 0 1) .结论 :rhEPO在自身贮血过程中可以促进体内红细胞动员 。

不同肝炎患者及献血人员中SENV-D感染流行病学调查

目的:了解SEN病毒D亚型在我国不同肝炎患者和献血人员中的感染情况。方法:采用巢式聚合酶链反应对收集的健康献血者和各型肝炎患者(包括甲肝、乙肝、丙肝和非甲非戊型肝炎患者)进行SENV-D亚型DNA检测。结果:无偿献血者中SENV-D感染率为25.9%,急性甲肝患者中的感染率为14.5%,慢性乙肝患者中的感染率为46%,丙肝患者中的感染率为65%,在非甲-非戊型肝炎患者中的感染率为51.2%。结论:SENV可能与HCV和HBV具有一样的传播方式,但并不是肝病发生的原因。

γ射线照射对添加剂红细胞保存过程中细胞因子含量的影响

目的 :研究γ射线照射对添加剂红细胞保存过程中细胞因子含量的影响 .方法 :6例健康无偿献血者全血离心制备添加剂红细胞 ,以剂量为 2 5Gy的γ射线照射后 4℃保存5wk ,分别于 1,3,5wk取样用ELISA法测定IL 1β,IL 6 ,IL 8和TNF α的含量 (ng·L-1) ,并设自身对照 .结果 :对照组和照射组的细胞因子含量均随保存时间延长而显著增加 ,对照组中IL 1β含量在保存后由保存前的 0 .4 7± 0 .0 7增加至18.85± 0 .79,IL 6含量在保存后由保存前的 0 .0 7± 0 .0 2增加至 0 .5 6± 0 .0 4 ,IL 8含量在保存后由保存前的 16 .4 6±0 .4 2增加至 2 90 .0 7± 2 .4 4 ,TNF α含量在保存后由保存前的0 .18± 0 .0 1增加至 4 .4 3± 0 .33,照射组中IL 1β含量在保存后由保存前的 0 .4 5± 0 .0 6增加至 0 .6 9± 0 .0 4 ,IL 6含量在保存后由保存前的 0 .0 6± 0 .0 1增加至 0 .31± 0 .0 3,IL 8含量在保存后由保存前的 16 .4 0± 0 .5 4增加至 2 3.4 5± 1.85 ,TNF α含量在保存后由保存前的 0 .17± 0 .0 1增加至 1.2 5±0 .0 7,但对照组中细胞因子含量增加更为明显 ;而在同一保存时间对照组中细胞因子含量高于照射组 .结论 :γ射线照射添加剂红细胞可抑制保存过程中细胞因子含量的增加 。

磁分离酶联免疫分析与ELISA法在梅毒抗体筛检中的应用

目的比较磁分离酶联免疫分析法(MAIA)与ELISA法在无偿献血者梅毒抗体筛检中的应用价值。方法以卫生部临床检验中心梅毒抗体临床科研血清盘标本40份及随机抽取西安市无偿献血者梅毒抗体阴性血清100份为评价标本。分别采用MAIA及ELISA法对评价标本作盲法筛检,以临检中心梅毒抗体已知阳性和阴性作为金标准。分析真实性与可靠性,并评价2种试剂的Cut-off值的合理性。结果MAIA及ELISA法的灵敏度分别为92.3%,100.0%,特异度分别为99.1%,100.0%,约登指数分别为0.91和1.00,重复试验符合率均为100.0%。结论提高MAIA法的灵敏度与特异度,将具有更大的临床应用价值。

不同方法制备浓缩血小板保存过程中细胞因子含量的检测

目的 研究不同方法制备的浓缩血小板在保存过程中细胞因子含量的变化。方法 应用PRP法、BC法及SD法制备浓缩血小板,并于常规条件下保存,间隔取样检测保存期内细胞因子如IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α等的含量。结果浓缩血小板在保存期内随保存时间的延长,细胞因子含量升高,且浓缩血小板中细胞因子含量与其中混杂的白细胞数直接相关。结论 细胞因子在非溶血性发热输血反应发生中可能起协同作用。

肺炎支原体聚合酶链反应检测方法的实验研究和初步应用

人类原发性非典型性肺炎是一种全球性疾病,其病原体为肺炎支原体,除引起呼吸系统感染外,还可引起神经系统、心血管系统、消化系统等的病变。因而早期、快速、准确地检测肺炎支原体,具有重要的临床和流行病学意义。目前对肺炎支原体检测方法主要有分离培养法、

交叉配合试验在血小板输注中的应用

血小板输注在防止患者出血方面有十分重要的意义,尤其是对血液病、肿瘤患者放、化疗期间所引起的血小板减少是必不可少的支持疗法,但是对于多次输血或血小板的患者,易产生血小板相关抗体,导致血小板输注无效(platelet transfusion refractoriness,PTR).为解决PTR,笔者应用单克隆抗体固相血小板抗体试验(MASPAT)对需要反复输注血小板的患者进行血小板交叉配合试验,筛选血小板供者现报道如下.……

4397例孕产妇ABO和RhD血型检测及不规则抗体的分析

目的 探讨孕产妇ABO、Rh D血型和不规则抗体阳性率的分布及临床意义。方法 采用微柱凝胶血型定型卡和抗人球蛋白卡,对孕产妇进行ABO、Rh D血型和不规则抗体检测,对有特异性抗体者采用试管法检测抗体效价、免疫球蛋白（Ig）类型及37℃反应性。结果 在4397例孕产妇中,A型1308例（29.75%）,B型1366例（31.07%）,O型1265例（28.77%）,AB型458例（10.42%）;Rh D阳性4348例（98.89%）,Rh D阴性49例（1.11%）。在4397例孕产妇中检出不规则抗体阳性55例（1.25%）,其中Rh血型系统49例（89.09%）,MNS血型系统4例（7.27%）,Lewis血型系统2例（3.64%）。抗体特异性：抗D 6例（10.91%）、抗E 21例（38.18%）、抗Ec 10例（18.18%）、抗C 4例（7.27%）、抗c 3例（5.45%）、抗Ce 5例（9.09%）、抗M 4例（7.27%）、抗Lea 2例（3.64%）,其红细胞相应抗原检测均为阴性;抗体效价在1∶8～1∶512之间;Ig类型：Ig M类2例,Ig G类49例,Ig M-Ig G类4例;37℃反应性：1＋～4＋。结论 孕产妇不规则抗体阳性率高于非孕女性,在产前和输血前对孕产妇进行不规则抗体检测是预防新生儿溶血病和溶血性输血反应的重要措施。

吸收放散试验及抗体增强方法在ABO疑难血型鉴定中的应用

目的探讨吸收放散试验及抗体增强方法在ABO血型抗原减弱和血清抗体效价降低及高效价冷凝集素引起疑难血型鉴定中应用的可行性。方法对30例ABO血型正反定型不相符的血标本,采用不规则抗体筛选、抗体增强方法、吸收放散试验及直接抗人球蛋白试验,观察患者血型抗原及血清中抗体的检出情况。结果 30例患者不规则抗体筛选和直接抗人球蛋白试验阴性,被患者红细胞吸收后的人源抗A或抗B血清效价有所降低;患者红细胞放散液与A型或B型试剂红细胞出现预期的血型抗原抗体反应,凝集强度由常规方法的混合外观凝集(MF)~1+增加到吸收放散试验及抗体增强方法的1+~3+,ABO血型正反定型相符。结论吸收放散试验能起到浓缩血清及初步纯化抗体的作用,抗体增强方法可增加低效价血清抗体的凝集强度,在输血相容性检测中联合应用ABO正反定型、吸收放散试验及抗体增强方法,可准确鉴定ABO疑难血型及解决部分交叉配血不合的问题。