Reeler小鼠皮质片层化及细胞极性化

目的探讨Reelin在皮质片层化形成及细胞分化、极性化中的作用及相关机制。方法取reeler小鼠和野生型(WT)小鼠受孕17 d(E17)至出生21d(P21)各年龄点脑部共96例。免疫荧光标记技术与5’-溴脱氧尿嘧啶核苷(Brd U)法检测两组小鼠大脑发育中放射状胶质细胞、增殖的神经干细胞及极性蛋白的表达,并使用Nissl染色技术及Di I示踪技术分别对新皮质分子层发育、海马CA1区锥体细胞极性方位以及皮质锥体细胞极性程度进行统计。结果 Reeler小鼠大脑发育中齿状回内放射状胶质细胞数量减少,极性紊乱,Brd U阳性细胞散在分布,数量减少;由于极性细胞未得到适当的终止信号越过皮质Ⅱ层进入分子层,皮质片层化紊乱;大脑皮质及海马锥体细胞极性发生改变。结论 Reelin在神经细胞迁移、神经元增殖和皮质片层化的过程中发挥重要作用,尤其对锥体细胞极性起着至关重要的影响。

DiI示踪标记固定脑组织内神经元及其突起的方法

目的：对DiI标记固定大脑皮质内神经元及其突起的技术进行改进,使操作更简单、便捷,效果更为高效、理想.方法：将DiI颗粒植入已固定小鼠大脑胼胝体,然后将标记后的脑组织放入4％多聚甲醛固定,于室温下避光孵育1～2周.结果：这种标记方法可以很直观地显示出大脑皮质神经元及其突起的精细结构,其中包括树突棘.结论：DiI示踪标记法可以用于标记固定脑内的神经元及其突起和树突棘,效果令人满意.

Reelin调节小鼠喙端迁移流发育的形态学观察

目的探讨小鼠室管膜下区(SVZ)的神经干细胞孵育成熟以及沿喙端迁移流(RMS)切线迁移至嗅球(OB)的过程,尤其是Reelin对细胞迁移和细胞分化的影响。方法选用野生型(WT)小鼠50只和纯合reeler小鼠23只胚胎16 d至生后90 d的各年龄点小鼠大脑,应用尼氏染色、免疫荧光染色、墨汁灌注及电子显微镜技术标记并观察小鼠大脑的神经干细胞、胶质细胞以及血管发生之间的相互关系,比较两组小鼠RMS的发育情况。结果胚胎后期至出生早期,在SVZ分布着大量的胶质细胞、神经干细胞和血管网,它们相互联系构成SVZ神经干细胞孵育的血管龛(niche);神经干细胞在niche中孵育成熟后可以进入RMS,切线迁移至嗅球,到达嗅球后转变为放射状迁移,分化为各种神经元整合入嗅球;神经干细胞在RMS的迁移过程中,放射状胶质细胞协同血管为其提供支架引导;reeler小鼠也能形成RMS,但形态有所改变,主要在嗅球处,神经干细胞失去规律排列,呈散乱分布。结论室管膜下区的niche是神经干细胞的主要来源;血管协同放射状胶质细胞为RMS中的神经干细胞提供支架引导作用;作为调节细胞迁移的重要信号,Reelin可以通过其交互作用影响血管的发育,Reelin缺失导致嗅球处神经干细胞放射状迁移的转变障碍。

小学数学教学生活化策略

在小学数学课程中,由于学生的年龄较小,注意力不够集中,因此在教学中无法通过一般的教学方式提高教学质量,再加上一些学生缺乏对数学的兴趣,想象力也不够丰富,因此可能存在着各种畏惧心理,在当下小学数学教学中应当实现课堂教学生活化,以生活化的教学方式来让学生感受学习的乐趣,通过将生活中的素材与学生的生活相衔接培养。本文对课堂教学生活化对小学数学教学的影响进行探究。同时给处小数学教学生活化的相关策略,希望通过文章的论述为工作者的研究提供理论支持。

基于羧基磁珠EDC、sulfo-NHS两步法偶联HBV-PreS1单克隆抗体制备免疫磁珠

为提高免疫磁珠工艺的稳定性和工艺可控性,可通过优化羧基磁珠EDC、sulfo-NHS两步法偶联HBV-PreS1单克隆抗体工艺中磁珠活化时间及抗体偶联pH条件。方法:采用全柱成像毛细管等电聚焦电泳技术检验HBV-PreS1单克隆抗体的等电点情况。活化后磁珠偶联氨基化生物素,与HRP标记亲和素酶,反应信号值与活化效率呈正比,检验活化效率。采用双抗体两步夹心法检测前S1抗原阳性低中高样本,检测信号值与免疫磁珠偶联的抗体量呈正比,检验抗体偶联效率及偶联工艺重复性。结果:HBV-PreS1单克隆抗体等电点PI为7.4,EDC、sulfo-NHS在pH 6.0的MES缓冲液中,30min时,信号值最高。HBV-PreS1单克隆抗体偶联磁珠时,在pH 6.0的MES缓冲液中,检验信号值最高。羧基磁珠EDC、sulfo-NHS两步法偶联HBV-PreS1单克隆抗体最佳活化时间为30min,最佳偶联缓冲液为pH 6.0的MES缓冲液,此时偶联效果最佳,工艺重复性最好。

IgG型浆细胞在溃疡性结肠炎小鼠蛋白C系统变化中的作用

本文旨在探讨IgG型浆细胞在溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)小鼠蛋白C系统(protein C system,PCS)变化中的作用。利用4%硫酸葡聚糖钠(dextran sulfate sodium,DSS)模拟小鼠UC,免疫荧光法观察结肠组织黏膜固有层浆细胞及免疫复合物IgA/M/G的类型,分离小鼠结肠组织黏膜固有层细胞,用抗CD38^+、CD54^+抗体双标、流式细胞术检测浆细胞数量,以抗IgA/M/G抗体标记,流式细胞术检测浆细胞类型;模拟IgG型免疫复合物刺激分离培养的巨噬细胞,ELISA法检测上清中促炎细胞因子TNF-α和IL-6的变化;流式细胞术检测TNF-α、IL-6对结肠黏膜微血管内皮细胞蛋白C受体(endothelial protein C receptor,EPCR)、血栓调节蛋白(thrombomodulin,TM)表达的影响,发色底物法检测TNF-α、IL-6对微血管内皮细胞激活的蛋白C(activated protein C,APC)活性的影响。结果显示:与对照组相比,DSS组小鼠结肠组织大量IgG型浆细胞浸润(P<0.05),黏膜固有层IgG型免疫复合物水平显著升高;分离培养的巨噬细胞与模拟IgG型免疫复合物共孵育后,上清中炎性细胞因子TNF-α和IL-6明显增高(P<0.01);同时TNF-α或IL-6与小鼠结肠黏膜微血管内皮细胞共孵育后,内皮细胞表达EPCR、TM的能力均有所降低(P<0.05或P<0.01),其APC活性明显降低(P<0.05或P<0.01)。以上结果提示,UC时IgG型浆细胞数量增加,并通过形成免疫复合物,从而影响巨噬细胞分泌促炎细胞因子,进而影响血管内皮细胞功能,抑制PCS。浆细胞有望成为治疗UC的新靶点。

Reelin基因缺失对小鼠小脑浦肯野细胞迁移与极化的影响

利用免疫荧光双标、尼氏染色技术对不同发育阶段Reelin基因缺失的reeler小鼠与野生型小鼠小脑浦肯野细胞的发生及迁移进行形态学观察,同时比较和测量其极性改变的角度.结果显示,reeler小鼠小脑皮质在发育过程中片层化发生紊乱,浦肯野细胞未按正确位置迁移,其胞体直径和极性化角度改变显著,与野生型小鼠比较,差异具有统计学意义(P<0.01).以上结果说明,Reelin基因缺失使小脑浦肯野细胞极性改变,迁移受阻,提示Reelin蛋白在小脑皮质片层化形成的过程中发挥了至关重要的作用.

大黄素靶向Notch通路抗腹膜透析大鼠腹膜纤维化

长期腹膜透析治疗经常并发腹膜纤维化,本文旨在探讨大黄素对腹膜透析相关性腹膜纤维化大鼠的治疗作用及其相关的细胞、分子机制。在体内实验中,以腹腔注射4.25%葡萄糖腹膜透析液(100 m L/kg)诱发大鼠腹膜透析相关性腹膜纤维化动物模型,于2周、4周、6周时进行模型大鼠腹膜平衡实验,并测量腹膜厚度、应用HE染色和Masson染色进行组织病理学评估,ELISA法测定血浆中III型前胶原氨基端肽(PIIINP)水平。选取6周模型大鼠,用大黄素腹腔注射进行治疗,观察治疗后上述指标的变化,同时以Real-time PCR方法检测大鼠腹膜Notch1、Jagged-1、Hes-1基因表达水平,Western blot方法检测大鼠腹膜组织Notch1、Jagged-1、Hes-1、Notch胞内结构域(Notch intracellular domain,NICD)蛋白表达。在体外实验中,培养大鼠腹膜间皮细胞,使其过表达或沉默Notch1,Western blot检测大黄素对腹膜间皮细胞Hes-1、Hey的诱导表达作用。HE染色显示:随着造模时间的延长,间皮细胞减少、部分脱落,间质有炎细胞浸润,6周时Masson染色显示模型组腹膜明显增厚(P<0.01),可见大量胶原沉积。与对照组相比,6周模型组大鼠血浆PIIINP水平显著升高(P<0.01)。与6周模型组相比,大黄素处理可增加模型大鼠腹膜组织中间皮细胞数量,抑制腹膜增厚(P<0.01),改善胶原沉积,降低血浆PIIINP水平(P<0.05),并在基因、蛋白水平下调Notch1、Jagged-1、Hes-1的表达(P<0.05或P<0.01),且下调NICD蛋白水平(P<0.01);体外实验显示:与正常细胞大黄素处理组相比,大黄素对过表达Notch1间皮细胞的Hes-1、Hey表达具有抑制作用(P<0.05),而对Notch1沉默间皮细胞的Hes-1、Hey表达无明显影响(P>0.05)。以上结果表明,在高浓度葡萄糖腹膜透析液所致的大鼠腹膜纤维化模型中有Notch通路的活化,大黄素可能通过抑制Notch通路改善腹膜纤维化程度。