新疆鼠尾草中6,7-去氢罗列酮对凝血酶诱导人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用及机制

目的通过体外实验研究新疆鼠尾草中6,7-去氢罗列酮对凝血酶诱导损伤的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)的保护作用及可能的机制。方法对HUVEC进行体外培养,通过凝血酶诱导HUVEC建立损伤模型,分为空白组、模型组(30 U/mL凝血酶)、6,7-去氢罗列酮组(0.1、0.2、0.3 mg/mL)预孵育24 h、肝素组(1 mg/mL)预孵育24 h,分别采用噻唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法检测6,7-去氢罗列酮对30 U/mL凝血酶损伤4 h的细胞活力;倒置显微镜下观察细胞形态;酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测细胞裂解液中血管性血友病因子(von willebrand factor,vWF)、纤溶酶原激活物抑制物-1(plasminogen activator inhibitor-1,PAI-1)和组织型纤溶酶原激活物(Tissue plasminogen activator,t-PA)的含量以及t-PA/PAI-1的比值;实时荧光定量法(real-time quantitative PCR,QRT-PCR)检测vWF、PAI-1、t-PA的分泌及其mRNA的表达,并比较4组异同。结果与空白组比较,凝血酶损伤后的HUVEC活力明显受到抑制(P<0.05),细胞呈不规则形态;与模型组比较,肝素组和6,7-去氢罗列酮组明显提高细胞损伤后的活力,凝血酸损伤的HUVEC形态逐渐恢复至正常的纺锤形态,并能显著上调t-PA的含量及t-PA/PAI-1的比值(P<0.05)。6,7-去氢罗列酮高、中剂量组能够明显下调PAI-1和vWF的含量及其表达。结论6,7-去氢罗列酮对凝血酶诱导损伤的HUVEC具有保护作用,其机制可能与提高细胞纤溶活性,维持血管内皮细胞的正常功能有关。

蔷薇红景天总黄酮对Aβ_(25-35)诱导HT22细胞损伤的保护作用

目的探讨蔷薇红景天总黄酮提取物(total flavonoids extract,TFE)、纯化物(total flavonoids purification,TFP)及其活性成分草质素对β-淀粉样蛋白25-35(amyloid β-protein 25-35,Aβ_(25-35))诱导的小鼠海马神经元(hippocampal neuronal cell line,HT22)细胞损伤的保护作用。方法采用Aβ_(25-35)诱导HT22细胞损伤,建立阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)炎症细胞模型,然后将HT22细胞分为空白组、炎症模型组(15μmol/L Aβ_(25-35))、阳性对照盐酸多奈哌齐组(12.5μmol/L)、不同质量浓度TFE(12.5、25、50μg/mL)和TFP(6.25、12.5、25μg/mL)干预组、草质素(5、10、20μmol/L)干预组,采用倒置显微镜观察细胞形态;MTT法测定HT22细胞存活率;采用2,4-二硝基苯肼显色法检测乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)的活性;采用黄嘌呤氧化酶法检测超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)的含量;膜联蛋白U-异硫氰酸荧光素(fluorescein isothiocyanate,FITC)/碘化丙啶(propidium iodide,PI)双染色法检测细胞凋亡;酶联免疫法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)检测细胞培养液上清中肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)和环氧合酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)的水平。结果与空白组比较,模型组神经元细胞变圆,细胞核皱缩,数量减少,细胞间隙增大,存活率显著下降(P<0.05),细胞凋亡率显著提高(P<0.05);与模型组比较,蔷薇红景天TFE、TFP和草质素组的高、中、低剂量组均能改善细胞形态,减少细胞受损,提高细胞存活率,显著降低细胞培养液上清中TNF-α、IL-1β、IL-6和COX-2的水平(P<0.05),且成剂量依赖性。结论蔷薇红景天TFE和TFP及其活性成分草质素对Aβ_(25-35)诱导HT22细胞损伤具有较好保护作用,其机制可能与拮抗Aβ_(25-35)的细胞毒性、保护神经元、抑制HT22细胞炎症的发生有关。

Box-Behnken设计优化蔷薇红景天总黄酮提取纯化工艺

目的优选蔷薇红景天中总黄酮的提取及纯化工艺。方法采用Box-Behnken响应面法,以提取物中总黄酮含量为指标,考察提取溶剂体积分数、提取时间、提取次数、物料比等因素对提取工艺的影响;以总黄酮纯度为指标,考察样品溶液质量浓度、进样流速、洗脱液浓度、洗脱液体积等因素对纯化效果的影响。结果最佳提取工艺为70%乙醇,提取60 min,物料比1∶40;蔷薇红景天总黄酮提取物中的黄酮平均含量为56.97%;最佳纯化工艺为上样液质量浓度2.0035 mg/m L、洗脱液体积分数90%、洗脱液体积2 BV;纯化后,总黄酮平均纯度为82.83%,总黄酮含量比提取物的总黄酮含量提高了26%。结论实测值与理论预测值相符性良好,响应面法优化得到的蔷薇红景天总黄酮提取及纯化工艺参数条件可靠,具有一定的实际应用价值。