三七总皂苷对脑缺血再灌注小鼠脑组织自噬水平的调节机制分析

目的:观察三七总皂苷对脑缺血再灌注损伤小鼠脑组织自噬的影响,探讨其对脑组织保护作用的机制。方法:将64只小鼠随机分为假手术组、模型组、三七总皂苷低剂量(60 mg/kg)组、三七总皂苷高剂量(120 mg/kg)组,每组16只。采用改良栓线法复制小鼠脑缺血再灌注模型,手术当天给药,连续给药3 d,1次/d。随后采用ZeaLonga评分法进行小鼠神经功能评分,采用干/湿称质量法检测脑含水量,TTC染色检测脑梗死范围,使用Western Blot法检测小鼠脑缺血侧皮层Bcl-2相互作用蛋白(Beclin 1)、选择性自噬底物蛋白P62、微管相关蛋白1轻链3(LC3)表达水平的变化。结果:与假手术组相比,模型组小鼠神经功能评分、脑梗死范围百分比和脑含水量明显增加(P<0.01),自噬相关蛋白Beclin 1和LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值增加(P<0.05,P<0.01),P62表达下调(P<0.05)。与模型组组比较,三七总皂苷组小鼠神经功能损伤明显改善,脑梗死范围百分比减小,自噬相关蛋白Beclin 1和LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值降低(P<0.05),P62表达上调(P<0.05)。结论:三七总皂苷能减轻脑缺血再灌注造成的损伤,其可能通过抑制自噬的过度激活。

三七总皂苷对氧糖剥夺损伤的小鼠星形胶质细胞谷氨酸摄取的影响

目的:探讨三七总皂苷对氧糖剥夺/复氧(OGD/R)诱导的星形胶质细胞谷氨酸摄取能力的影响。方法:体外培养ICR小鼠大脑皮层星形胶质细胞,分为正常组、模型组(OGD 6 h/R 24 h)和三七总皂苷组(OGD 6 h/R 24 h+20μg·mL^(-1))。免疫细胞荧光染色鉴定GFAP标记星形胶质细胞;采用CCK-8法检测星形胶质细胞活力,同时检测细胞外液LDH的释放;采用生化法检测细胞Na^(+)-K^(+)-ATPase活性、细胞谷氨酸摄取率;Western Blot法和RT-PCR法检测细胞GLT-1、GS mRNA表达及蛋白水平变化。结果:经特异性蛋白GFAP鉴定,细胞呈阳性表达。OGD/R损伤后,星形胶质细胞活力降低,LDH释放增多(P<0.01)。细胞对谷氨酸的摄取率明显降低(P<0.01),Na^(+)-K^(+)-ATPase活性降低,同时GLT-1和GS mRNA表达和蛋白表达水平显著下降(P<0.05)。三七总皂苷干预后,细胞活力明显增强(P<0.05),LDH释放明显减少(P<0.01)。星形胶质细胞对谷氨酸的摄取能力增强(P<0.01),Na^(+)-K^(+)-ATPase活性升高(P<0.01),GLT-1和GS蛋白表达和mRNA表达水平升高(P<0.01)。结论:三七总皂苷抑制OGD/R引起谷氨酸浓度升高,可能是通过提高Na^(+)-K^(+)-ATPase活性,上调GLT-1和GS的表达,从而增强星形胶质细胞对谷氨酸的清除能力。

淫羊藿配方颗粒制备工艺优化及一致性评价

目的探讨淫羊藿配方颗粒制备工艺的优化及一致性评价。方法采用L9(3^4)正交试验,以出膏率、淫羊藿总黄酮和淫羊藿苷含量为评价指标,考察浸泡时间、加水量、提取时间、提取次数对提取工艺的影响,筛选最佳提取工艺。饮片经最佳工艺提取后,减压浓缩、喷雾干燥、干法制粒制备配方颗粒。通过特征成分的含量测定比较饮片-中间体-配方颗粒间量值传递的相关性。结果最佳提取工艺为浸泡0.5 h,加12倍量水,煎煮3次,每次煎煮1.5 h。结论淫羊藿水煎提取工艺稳定,重复性好。淫羊藿饮片-中间体-配方颗粒中淫羊藿苷含量呈量值传递关系,一致性较好,可为生产提供参考。

祛瘀生新胶囊药效学及急性毒性实验研究

目的探讨祛瘀生新胶囊的药效及急性毒性。方法采用最大给药量测定方法测定祛瘀生新胶囊对KM小鼠的半数致死量(LD50),采用角叉菜胶致小鼠足肿胀、冰醋酸致小鼠疼痛试验考察祛瘀生新胶囊的药效学。结果祛瘀生新胶囊对小鼠的LD50为38.5038 g/kg;与模型组比较,1.2,0.6,0.3 g/kg剂量的祛瘀生新胶囊均能明显改善模型小鼠足肿胀和疼痛程度。结论祛瘀生新胶囊具有抗炎镇痛作用,且毒性较小。

淫羊藿饮片标准汤剂制备及质量控制研究

目的制备淫羊藿饮片标准汤剂并建立其质量控制方法。方法采集15批不同产地的淫羊藿饮片,按标准化工艺制备15批标准汤剂,采用高效液相色谱法测定淫羊藿苷含量,计算转移率与出膏率,并建立标准汤剂的指纹图谱。结果 15批淫羊藿饮片标准汤剂中,淫羊藿苷平均转移率为55.30%,平均出膏率为17.14%;15批淫羊藿标准汤剂的指纹图谱与对照指纹图谱相似度为0.95,指纹图谱标定共有峰7个,指认出其中5个共有峰,分别为朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C、宝藿苷Ⅰ、淫羊藿苷。结论该方法结果准确,重复性好,可用于淫羊藿标准汤剂的质量控制。

祛瘀生新胶囊化学成分超高效液相色谱-串联质谱法分析及含量测定

目的建立定性分析祛瘀生新胶囊化学成分的超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)法,以及测定士的宁和黄芪甲苷的液相色谱法。方法采用UPLC-MS/MS法定性分析祛瘀生新胶囊的特征化学成分,采用液相色谱法测定士的宁和黄芪甲苷的含量。色谱柱为Accucore AQ C18柱(150 mm×2.1 mm,2.6μm),流动相为0.1%甲酸水溶液-甲醇溶液,采用正离子全扫描模式;液相色谱柱为Welchrom C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),士的宁流动相为乙腈-0.2%磷酸水溶液(15∶85,V/V),黄芪甲苷流动相为乙腈-水(32∶68,V/V),蒸发光散射检测器检测,紫外检测器检测波长为260 nm。结果祛瘀生新胶囊中有23个特征峰,包括士的宁、马钱苷酸、芦丁、黄芪甲苷等。士的宁、黄芪甲苷进样量分别在0.11~1.10μg(r=0.9999)和0.49~4.90μg(r=0.9992)范围内与峰面积线性关系良好;平均加样回收率分别为99.62%和99.44%,RSD分别为1.34%和0.90%(n=6)。结论该方法灵敏度高,重复性好,结果准确,专属性强,可为该制剂的质量标准及药效物质基础研究提供参考。

地黄养阴颗粒对耳廓微循环药效学作用

目的:探讨验证地黄养阴颗粒的主要药效学,为临床用药服务。方法:取昆明小鼠60只,分为空白组、大剂量组、中剂量组、小剂量组和阳性组5组,每组12只小鼠。给药30 d后,①称取标记区域毛发重量;②使用图像分析系统测定微循环相关指标;③进行碳粒廓清实验,测定吞噬指数κ。比较各给药组指标和空白组间差异。结果:与空白组比较,10.0 g/kg、5.0 g/kg 2个剂量组可促进小鼠毛发生长,增加小鼠毛细血管开放量,提高小鼠毛细血管血流速度,扩大小鼠毛细血管输入、输出口径,明显增强了小鼠网状内皮系统的吞噬功能。结论:地黄养阴颗粒具有活血生发作用,初步证明对毛发松动或呈稀疏状脱落,毛发干燥或油腻等有效。

HPLC同时测定花果茶中3种成分的含量

目的建立同时测定花果茶中3种指标性成分的含量的HPLC方法。方法色谱柱为Welchrom C18(4.6 mm×250 mm,5μm);甲醇-乙腈-0.1%磷酸水溶液为流动相梯度洗脱,检测波长为280 nm,柱温为30℃,流速为1.0 ml/min。结果绿原酸、儿茶素、表儿茶素分别在0.0940~0.9400 mg(r=1.0000),0.5000~5.0000 mg(r=0.9996),0.2426~2.4260 mg(r=0.9995)范围内线性关系良好,平均回收率分别为99.93%,100.19%,100.26%。结论建立的方法准确度高,重复性好,可用于花果茶的质量控制。