大麻素WIN55，212-2对双环己酮草酰二腙诱导的脱髓鞘模型髓鞘修复作用的研究

目的探讨大麻素WIN55,212-2对双环己酮草酰二腙(cuprizone,CPZ)诱导C57BL/6小鼠脱髓鞘模型的治疗作用。方法取6周龄C57BL/6雄性小鼠,分为正常组、第2周WIN55,212-2给药组与DMSO对照组、第4周WIN55,212-2给药组及DMSO对照组,每组10只。正常组每天喂养普通饲料,CPZ模型持续喂养含有0.25%CPZ的混合饲料,在第2周和第4周时进行WIN55,212-2注射,DMSO对照组则在相同条件下注射10%的DMSO,继续喂养CPZ混合饲料。于第3、5周末通过体质量变化观察整体状态;旋转棒实验观察小鼠运动功能,利用LFB和MBP免疫组化技术染色观察胼胝体区域髓鞘,GFAP染色观察星形胶质细胞。结果与DMSO对照组相比,WIN55,212-2给药组模型体质量下降趋势明显减缓(P<0.05);旋转棒实验中,WIN55,212-2给药组小鼠运动功能仍弱于正常小鼠,但是与DMSO对照组相比,WIN55,212-2给药组运动功能明显改善(P<0.01);LFB染色结果显示DMSO对照组髓鞘脱失明显,WIN55,212-2给药组介于正常与DMSO对照组之间,MBP染色进一步证实了这一结果;GFAP免疫组化实验结果显示DMSO对照组CPZ模型小鼠胼胝体区域GFAP阳性细胞广泛表达,而经过WIN55,212-2治疗的小鼠GFAP表达量明显低于DMSO对照组(P<0.05)。结论大麻素WIN55,212-2可通过降低髓鞘的脱失和星形胶质细胞的活化,对脱髓鞘病变具有一定缓解的作用。

少突胶质细胞前体细胞在双环己酮草酰二腙诱导的脱髓鞘模型中的变化特点

目的观察神经胶质细胞在双环己酮草酰二腙(cuprizone,CPZ)诱导的脱髓鞘模型中的变化特点,探讨其与髓鞘再生的内在联系。方法选8周龄C57BL/6雄性小鼠,分为正常组、急性脱髓鞘组及髓鞘再生组。正常组每天饲养正常鼠粮;模型组小鼠饲养含有0.2%CPZ的混合鼠粮,连续饲养6周;髓鞘再生组在连续喂养6周CPZ鼠粮后,换用正常鼠粮2周。实验过程中通过卢卡斯快蓝染色及透射电镜技术判断脑组织胼胝体区髓鞘脱失及恢复程度,通过免疫组化及免疫荧光技术检测脑内NG2,Olig2和GFAP的表达来评估少突胶质细胞前体细胞及星形胶质细胞的变化特点。结果与正常组相比,急性脱髓鞘组胼胝体髓鞘脱失明显,Olig2、GFAP表达明显升高(P<0.05),侧脑室旁外侧隔核(LSD)NG2升高水平较胼胝体区(CC)更为明显(P<0.05,P<0.01);髓鞘再生组髓鞘有所修复,Olig2、GFAP表达仍高于正常组,但较急性脱髓鞘组有一定程度降低(P<0.05)。结论髓鞘损伤期少突胶质细胞前体细胞不能有效迁移至受损部位,修复期Olig2表达降低,星形胶质细胞持续高水平表达可能是髓鞘修复障碍的影响因素。

高频重复经颅磁刺激对大鼠局灶性脑缺血后髓鞘修复再生的影响

目的探讨大鼠局灶性脑缺血后介入高频重复经颅磁刺激(repetitive transcranial magnetic stimulation,rTMS)治疗对大鼠运动功能的影响及对少突胶质前体细胞(OPC)、少突胶质细胞转录因子(Olig1)、髓鞘碱性蛋白(MBP)、NG2细胞表达的影响。方法将63只SPF级成年雄性Sprague-Dawley大鼠采用随机抽样法分为模型组、rTMS组、假手术组,每组21只,3组分别按术后1、3、10 d各分7只。模型组、rTMS组使用线栓法制备短暂性大脑中动脉栓塞(tMCAO)模型,模型组建模成功后自然恢复,rTMS组建模成功后每24 h介入高频rTMS治疗,干预10 d。使用改良大鼠神经功能缺损评分评定rTMS对大鼠运动功能影响。各组分别于建模成功后第1、3、10天取脑,通过对NG2、髓鞘碱性蛋白(MBP)进行免疫组织化染色,观察缺血侧纹状体中少突胶质前体细胞的增殖以及髓鞘损伤程度;Western blot检测Olig1、MBP、NG2的表达量。结果rTMS降低tMCAO后的神经功能缺损评分,治疗后rTMS组的神经功能缺损评分低于模型组(P<0.05);rTMS促进tMCAO后OPC的增殖和分化,其中rTMS组的NG2表达在第1、3、10天均高于模型组(P<0.05);Olig1表达在第3、10天高于模型组(P<0.05)。rTMS促进脑组织缺血后的髓鞘修复,模型组MBP表达始终低于假手术组(P<0.05),治疗后rTMS组MBP表达在10 d时高于模型组(P<0.05)。结论缺血性脑卒中后急性期rTMS治疗可促进OPC增殖和髓鞘修复。

激活PV阳性抑制性神经元对脑缺血引起记忆障碍的改善作用

目的探讨激活小白蛋白(parvalbumin,PV)阳性抑制性神经元对额叶皮层缺血所致记忆功能障碍的影响,并分析其作用机制。方法采用随机数字表法,将成年PV-Cre小鼠分为3组:对照组[额叶皮层PV神经元表达hM3D-mCherry,额叶皮层注射0.9%NaCl溶剂+腹腔注射氯氮平(clozapine N-oxide hydrochloride,CNO)]、模型组(额叶皮层PV神经元表达mCherry,额叶皮层区注射内皮素+腹腔注射生理盐水)、干预组(额叶皮层PV神经元表达hM3D-mCherry,额叶皮层注射内皮素+腹腔注射CNO)。其中,通过病毒微量注射技术,使得模型组小鼠额叶皮层PV神经元特异表达mCherry,而对照组和干预组小鼠额叶皮层区PV神经元特异表达hM3D-mCherry。通过药物遗传学,在干预组注射CNO可通过hM3D特异激活PV阳性神经元。通过T-迷宫和物体位置识别检测小鼠的记忆和运动功能。应用高尔基染色分析额叶皮层区锥体神经元树突棘密度的改变。结果额叶皮层给予内皮素可引起局部缺血。与对照组比较,额叶皮层缺血后引起其锥体神经元上树突棘密度减少,造成小鼠在T-迷宫中选择正确率下降,在物体空间位置识别任务中探索分数降低(P<0.01)。激活PV阳性神经元能够显著增加额叶皮层树突棘的密度,显著提高小鼠在T-迷宫中的选择正确率(P<0.05),提高在物体位置识别任务中的探索分数(P<0.05)。激活额叶皮层PV阳性神经元并未影响动物运动功能。结论激活PV阳性神经元可改善额叶皮层缺血引起的记忆功能障碍,其可能与提高额叶皮层内树突棘密度有关。

关节松动术结合体外冲击波治疗对卒中后患者踝关节挛缩的康复疗效观察

目的观察关节松动术结合体外冲击波治疗卒中后踝关节挛缩的疗效.方法选取2017年7月—2019年8月来该院就诊的30例脑卒中踝关节挛缩患者随机奇偶排列分为对照组和观察组各15例.15例奇数对照组对挛缩踝关节仅行关节松动术,15例偶数观察组踝关节在关节松动术治疗的同时在加用冲击波治疗.比较两组治疗前后踝关节被动关节活动度(PROM)及日常生活能力评分(ADL).结果观察组和对照组治疗后踝关节被动关节活动度及日常生活能力评分较治疗前均改善,差异有统计学意义(P<0.05),观察组踝关节被动关节活动度及日常生活能力明显优于对照组,差异有统计学意义(P<0.05).结论关节松动术结合体外冲击波治疗能够更好的改善卒中后患者踝关节挛缩程度,有效的促进患者运动功能恢复.