人月经血干细胞的提取与表面标记的研究

对人月经血干细胞进行提取,测定月经血干细胞表面标记。方法 收集人月经血,经淋巴细胞分离液离心后进行原代培养,待细胞贴壁后观察细胞生长状态,并用相应抗体对细胞进行流式法表型测定。结果 从人月经血中提取的月经血干细胞,贴壁后经血干细胞呈现梭形,经血干细胞表面表达CD44,CD90,CD105等间充质干细胞表面标志,但不表达造血干细胞表面标记CD45。结论 人月经血干细胞为间充质干细胞,表达间充质干细胞表面标记。

CatSper蛋白对精子超活化运动和男性不育影响的研究进展

CtaSper通道是目前公认的哺乳动物精子细胞膜上最重要的Ca^(2+)通道,对精子运动、精子超活化和受精功能起着关键作用。Cat Sper蛋白只表达于精子尾部主段,由CatSper1-4和5个辅助单元β、γ、δ、ε和ζ构成。CatSper蛋白是Ca^(2+)功能结构域的主体,在时空上均有序调控精子尾部蛋白酪氨酸磷酸化(P-Tyr),维持了精子超活化运动。CatSper^(-/-)小鼠超活化表现为早发式、爆发式、散发式,能量很快耗尽,超活化提前终止。胞内p H值、膜电位、类固醇激素、多种蛋白质、环腺苷酸类似物等通过调控CatSper通道参与精子超活化、精子游动至受精部位和穿透卵子外膜。近年来,许多研究证实CatSper蛋白功能缺陷会严重影响精子功能,9个CatSper亚基的中任何一个丢失最终导致男性生育功能障碍。本文结合目前最新研究进展,从CatSper蛋白表达、定位、结构、调控等多角度就CatSper对精子超活化和男性不育的影响进行综述。

内皮和造血系统特异性敲除Rictor基因对胎肝造血的影响

目的:研究Rictor基因对胚胎发育过程中胎肝造血的影响。方法:利用Cre-LoxP基因敲除系统,特异性在小鼠内皮(VEC-Cre)和造血(Vav1-Cre)系统敲除Rictor基因;通过流式细胞术分析特异敲除Rictor基因后小鼠胚胎第15 d胎肝中的各系细胞比例的变化,并进一步分析造血干细胞的变化。结果:利用VEC-Cre和Vav1-Cre小鼠敲除Rictor基因后,胎肝中各系细胞比例均有所减少,B细胞比例的减少较为明显,造血干细胞比例也明显减少。结论:Rictor基因敲除损害胎肝组织中造血干细胞的产生和各系细胞的分化。

获卵少患者体外授精方式的临床分析

目的:探讨授精方式对体外受精-胚胎移植(IVF-ET)治疗中获卵少患者临床结局的影响。方法:回顾性分析2013年1月-2016年6月行体外受精-胚胎移植治疗中获卵数≤3个且男方精液无明显异常的190个周期,比较常规体外受精(IVF组97个周期)和卵胞浆内单精子注射(ICSI组93个周期)的临床结局。结果:IVF组和ICSI组患者夫妇基础资料差异无统计学意义;两组正常受精率(61.6%vs.59.9%)、卵裂率(91.8%vs.97.3%)、优胚率(67.9%vs.66.1%)、可利用胚胎率(91.1%vs.94.5%)、完全受精失败率(11.3%vs.20.4%)、取消周期率(35.1%vs.28.0%)、着床率(32.1%vs.20.8%)、临床妊娠率(46.0%vs.27.3%)、临床活产率(83.3%vs.60.0%)、累计妊娠率(35.7%vs.24.1%)、累计活产率(32.1%vs.18.5%),差异均无统计学意义;两组多精受精率(14.1%vs1.6%)差异有统计学意义(P<0.05)。结论:获卵数≤3个且男方无ICSI指征的患者,选择ICSI可减少多精授精,但临床结局无明显改善。

囊胚解冻移植周期中胚胎形态学评分对临床妊娠结局的影响

目的探讨囊胚解冻移植中第3天(D3)卵裂期和囊胚期形态学评分对临床妊娠结局的影响。方法回顾性分析2019年1月至2020年4月在天津医科大学总医院生殖医学中心行602个解冻移植周期,移植D3优质胚胎为D3组(478例),移植囊胚共124例,其中D3形态学高评分为HD3B组(58例),低评分为LD3B组(66例);根据囊胚形态学评分,从高到低将HD3B组和LD3B组分为4个亚组(H1-4和L1-4)。比较D3组、HD3B组和LD3B组解冻周期的临床基本情况及种植率和临床妊娠率等指标。结果新鲜周期D3形态学高评分的胚胎囊胚形成率为60.51%,低评分的胚胎为14.74%;解冻移植周期中D3组种植率、临床妊娠率、流产率分别为36.20%,48.12%,21.30%;HD3B组分别为64.52%,63.79%,16.22%;LD3B组分别为56.16%,57.78%,15.79%。LD3B组的种植率明显高于D3组,且差异有统计学意义(P<0.01),LD3B组的临床妊娠率与HD3B组相比差异无统计学意义(P>0.05)。HD3B组和LD3B组的4个亚组间比较种植率、临床妊娠率和流产率差异无统计学意义(P>0.05)。结论D3形态学评分低的胚胎仍有行囊胚培养的价值,所形成的囊胚在解冻移植周期中仍然有较高的种植率和妊娠率。

Rictor在胚胎期肝脏造血干细胞中的作用研究

目的:观察Rictor在血细胞特异敲除后对胎肝造血的影响。方法:取实验组Vav-Cre;Rictorf/f小鼠和对照组Rictorf/+或Rictorf/f小鼠E12.5 0.08ee胎肝细胞进行骨髓重建移植实验,观察Rictor敲除对造血干细胞重建造血能力的影响。同时,实验组和对照组小鼠分选E14.5胎肝细胞0, 10, 20, 40, 60, 80个造血干细胞进行极限稀释移植实验,检测Rictor敲除后具有重建造血能力的造血干细胞的数量。进一步进行细胞周期实验以及流式细胞术分选E12.5通过一次移植成功重建造血的供体细胞进行二次移植实验,检测Rictor敲除对造血干细胞自我更新能力的影响。结果:骨髓重建造血实验结果显示,移植后4个月对照组Rictorf/+或Rictorf/f 8只受体小鼠全部重建造血功能,重建率为77.2%±11.1%,每个胎肝有57个LT-RU,实验组Vav-Cre;Rictorf/f 8只受体全部重建,重建率为37.0%±16.3%,每个胎肝8个LT-RU。极限稀释移植实验显示,移植后4个月对照组每17个SLAM细胞,实验组每39个SLAM细胞有1个具有重建造血能力的造血干细胞。二次移植实验证明,每只受体移植4×10~5供体细胞,1个月后对照组4只受体有2只重建,实验组0只重建。并且进一步证明实验组S/G2/M期细胞比率增加。结论:在胎肝造血过程中,特异敲除血细胞Rictor会导致重建造血能力降低,具有重建造血能力的造血干细胞数量下降,造血干细胞自我更新能力降低。

NF-κB抑制剂在急性髓系白血病中的作用

目的:探讨NF-κB抑制剂在AML白血病发生发展过程中的作用。方法:随机收集16例骨髓标本,其中AML 8例,正常对照8例。应用PCR阵列检测NF-κB信号通路在AML中是否激活?同时构建小鼠白血病模型,检测NF-κB抑制剂对AML的作用。结果:NF-κB信号通路在AML中被激活,在高表达的基因中如EDARADD,TNFSF14可激活NF-κB通路,IL6介导炎症信号;在低表达的基因中如TNFRSF 10B,TNFRSF1A促进细胞凋亡。本实验成功构建了小鼠白血病模型。在小鼠白血病模型中给予NF-κB抑制剂,可缓解白血病微环境对正常造血干细胞的抑制作用,使正常造血干细胞进入细胞周期。结论:AML细胞中NF-κB信号通路被激活,NF-κB抑制剂促进正常造血干细胞细胞进入细胞周期。

血清卵泡刺激素、抑制素B水平在不同睾丸体积非梗阻性无精子症中的表达

目的检测不同睾丸体积的非梗阻性无精子症[唯支持细胞综合征(SCOS)和生精功能阻滞(SA)]患者血清卵泡刺激素(FSH)和抑制素B(Inh B)水平,探讨两者在不同睾丸体积中与严重睾丸生精功能损害的关系及意义。方法入组病例包括SCOS 121例、SA 27例,每组疾病按睾丸体积≤5 ml,5 ml<睾丸体积<10 ml和睾丸体积≥10 ml分成三组进行血FSH和Inh B检测,比较不同睾丸分组间两种激素表达水平的差异,以相同体积的重度少精子症或隐匿性无精子症匹配作为对照(50例);考察不同疾病间睾丸体积与FSH和Inh B的相关性;结合ROC曲线法对SCOS进行分析评价。结果当睾丸体积≤5 ml时,FSH和Inh B在试验组和对照组之间表达均无统计学差异,而当睾丸体积>5 ml时,FSH在三种疾病中表达有统计学差异;FSH在SA和对照组中与睾丸体积呈正相关性,Inh B与睾丸体积无相关性;SCOS组中的睾丸体积与FSH和Inh B均没有相关性;FSH诊断睾丸体积>5 ml SCOS的切点值为11.53 m IU/ml,敏感度为87.4%,特异度为88.3%。结论在评价FSH与严重生精功能损害的程度时应与其睾丸体积相结合,当睾丸体积≥5 ml时,血清FSH水平有助于评估睾丸生精功能状况。

不同年龄组促排卵周期获卵数少的患者临床结局分析

目的探讨年龄对体外受精-胚胎移植(IVF-ET)/卵胞浆内单精子注射(ICSI)助孕治疗中获卵数≤3个患者的临床结局,为今后这类患者的治疗及预后判断提供依据。方法回顾性分析2013年1月-2016年6月在天津医科大学总医院生殖中心行IVF-ET/ICSI助孕治疗,获卵数≤3个的186例取卵周期的临床及实验室资料。按年龄分为A组(<35岁,68例)、B组(35~40岁,54例),C组(>40岁,64例),比较分析不同年龄组患者一般情况及妊娠结局。结果随年龄增长,患者采用非常规促排方案比例增加,窦卵泡数(AFC)、获卵数逐渐减少,差异有统计学意义(P<0.05);C组种植率、临床妊娠率、累计临床妊娠率、累计活产率显著低于A组和B组(P<0.05);B组和C组患者较A组患者的流产率显著增加,活产率显著下降(P<0.05)。结论年龄对于获卵数≤3个患者的妊娠结局评估有一定的临床指导意义。