机械刺激诱导的远端结肠黏膜离子转运在腹泻型肠易激综合征大鼠模型中的变化

目的探讨在腹泻型肠易激综合征(D-IBS)大鼠中,机械刺激诱导的远端结肠黏膜离子转运是否发生改变。方法将Sprague-Dawley大鼠分为对照组和模型组,采用孤养+慢性非预见刺激的方法制备D-IBS大鼠模型,通过排便和蔗糖偏嗜度来检测D-IBS大鼠模型,采用短路电流技术结合去除溶液中阴离子和运用各种阻断剂的方法,观察机械刺激诱导的远端结肠黏膜离子转运。结果同对照组比较,模型组大鼠的排便数量显著增加,蔗糖偏嗜度显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。2组大鼠结肠黏膜的基础电生理特性无显著差异(P>0.05)。机械刺激引起对照组和模型组大鼠结肠黏膜的短路电流均显著增加,但是模型组中增加的短路电流,显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。去除溶液中的HCO3-并不能改变2组的短路电流,但是去除溶液中的Cl-均显著降低2组的短路电流,差异有统计学意义(P<0.001)。运用Ca2+激活的Cl-通道(CaCC)阻断剂4,4'-二异硫氰酰芪-二苯乙烯-2,2二磺酸二钠盐(DIDS)并不能改变2组的短路电流,但是运用囊性纤维变性跨膜电导调节器(CFTR)的抑制剂CFTR(inh)-172或Na+-K+-2Cl-共转运体(NKCC)的阻断剂bumetanide均显著降低2组的短路电流,差异有统计学意义(P<0.001)。结论在D-IBS大鼠模型中,机械刺激诱导的远端结肠黏膜Cl-分泌增加可能是D-IBS大鼠产生腹泻的原因之一。

慢性心理应激对机械刺激诱导的远端结肠黏膜离子转运的影响

目的探讨在慢性心力应激大鼠模型中,机械刺激诱导的远端结肠黏膜离子转运是否发生改变。方法 SD大鼠分为对照组和模型组,采用束缚制动法制备慢性心理应激大鼠模型,通过排便测定、蔗糖水偏嗜度和悬尾实验测定其行为学,采用短路电流技术结合去除溶液中阴离子和运用各种阻断剂的方法,观察机械刺激诱导的远端结肠黏膜离子转运。结果同对照组比较,模型组大鼠的排便数量显著增加(P<0.05),蔗糖水偏嗜度显著降低(P<0.05),静止时间显著延长(P<0.05),而挣扎次数显著降低(P<0.05)。两组大鼠结肠黏膜的基础电生理特性无显著差异。机械刺激导致对照组和模型组大鼠结肠黏膜的短路电流均显著增加,但是模型组中增加的短路电流(△Isc)显著高于对照组(P<0.05)。去除溶液中的HCO-3并不能改变两组的△Isc,但是去除溶液中的Cl-均显著降低两组的△Isc(P<0.001)。运用Ca2+激活的Cl-通道(Ca2+-activated Cl-channel,CaCC)的阻断剂DIDS并不能改变两组的△Isc,但是运用囊性纤维变性跨膜电导调节器(cystic fibrosis transmembrane conductance regulator,CFTR)的抑制剂CFTR(inh)-172或Na+-K+-2Cl-共转运体(Na+-K+-2Cl-cotransporter,NKCC)的阻断剂bumetanide均显著降低两组的△Isc(P<0.001)。结论在慢性心理应激大鼠模型中,机械刺激诱导的远端结肠黏膜Cl-分泌增加,而这可能是功能性胃肠病(FGIDs)患者产生腹泻的原因之一。

心脏不停跳直视手术的临床研究

目的通过心肌肌钙蛋白(cTnI)浓度检测及心肌超微结构的观察,评价心脏不停跳心内直视术与心脏停跳下心内直视术的心肌保护效果。方法通过对比分析心脏停跳与不停跳心内直视手术各20例的手术方法特点及效果,采用生物化学及组织形态学的研究方法,分别测定术中不同时点血浆cTn-I值,观察心肌超微结构,进行对比研究,比较两种术式对心肌损伤的影响,探讨两种术式在心肌保护方面的优缺点。结果(1)阻断前两组肌钙蛋白值均正常,且无统计学差异。(2)阻断30min和开放后20min两组肌钙蛋白值均升高(P<0.05),且不停跳组各时相点血清肌钙蛋白值明显低于停跳组(P<0.05),差异有显著性。(3)心肌超微结构显示不停跳组心肌损伤较停跳组轻。结论心脏不停跳心内直视术安全可行,具有良好的心肌保护作用。

38例左房黏液瘤的外科治疗体会

目的总结38例心脏左房黏液瘤外科治疗经验。方法回顾性分析38例心脏左房黏液瘤病例手术资料在体外循环下行黏液瘤摘除。结果38例均痊愈出院,同期行三尖瓣成形7例,三尖瓣与二尖瓣成形2例,二尖瓣置换1例。结论术中应注意麻醉诱导与插管方法,选择恰当的手术径路,防止瘤体破碎、脱落造成栓塞,切除黏液瘤要彻底。

甘露聚糖结合凝集素对脂多糖诱导的3T3-L1脂肪细胞炎症反应和胰岛素抵抗的调节作用及机制

目的:研究甘露聚糖结合凝集素(MBL)对脂多糖的诱导3T3-L1脂肪细胞炎症反应及胰岛素抵抗的调节作用及机制。方法:诱导3T3-L1前脂肪细胞分化,油红O染色分析细胞分化程度,使用CCK-8检测分化过程中MBL(1、10、20μg/ml)及LPS对细胞增殖能力的影响;ELISA检测细胞炎症因子IL-6、TNF-α含量,Western blot检测TNF-α、IL-6及TLR4/NF-κB信号通路中蛋白表达,并分析Akt、IRS-1 try蛋白磷酸化及GLUT4表达情况;流式细胞术检测MBL对3T3-L1细胞摄取葡萄糖的调节作用。结果:油红O染色显示,12 d时,3T3-L1前体脂肪细胞已诱导为完全成熟的脂肪细胞;CCK-8结果证实,在细胞分化全过程,不同浓度的MBL (1、10、20μg/ml)及LPS对其增殖能力无明显影响;ELISA及Western blot结果显示在脂肪细胞分化至成熟过程中,MBL处理均可抑制LPS诱导的炎症因子分泌,且其抑制作用呈浓度依赖性;Western blot结果显示MBL以浓度依赖的方式抑制LPS诱导的IκB、IKK磷酸化和TLR4以及核NF-κB表达,且MBL可增强Akt和IRS-1磷酸化,增加GLUT4表达;流式细胞术结果显示MBL可以在一定程度上解除LPS对3T3-L1细胞摄取葡萄糖的抑制,并呈一定的浓度依赖性。结论:在脂肪细胞中,MBL通过TLR4/NF-κB信号通路抑制细胞炎症因子分泌,发挥抑炎作用;MBL通过抑制炎症因子分泌,解除LPS对3T3-L1细胞摄取葡萄糖和IRS-1/Akt信号的抑制,减轻胰岛素抵抗。

自发性高血压大鼠学习记忆能力和脑组织SK2蛋白的表达

目的:探讨高血压对学习记忆能力的影响。方法:取自发性高血压(SH)大鼠和对照Wistar-Kyoto大鼠各7只,采用标准Ⅱ导联记录心电图,尾套法测定鼠尾动脉压,采用Y型迷宫和跳台实验测试大鼠的学习记忆能力,采用Western blot法检测脑组织小电导钙激活钾通道蛋白2(SK2)的表达。结果:与对照比较,SH大鼠鼠尾动脉压增高(t=12.060,P<0.001),QRS时长和R-R间期延长(t=3.147,3.917,P<0.05),Y型迷宫实验学习次数减少(t=3.279,P=0.007),跳台实验上台次数和上台受电击总时间增加(t=4.626,2.516,P<0.05);脑组织SK2蛋白表达也较对照组增加。结论:SK通道可能参与了高血压大鼠认知损害的过程。

RyR2-shRNA重组慢病毒载体的构建及其对离体心肌细胞RyR2基因表达的影响

目的构建携带RyR2-shRNA的慢病毒载体,并检测其对小鼠离体心肌细胞中RyR2的基因沉默效果。方法设计并合成针对小鼠RyR2基因的shDNA,克隆入含U6启动子和EGFP报告基因的慢病毒载体psiHIV-U6-eGFP,构建表达RyR2-shRNA的慢病毒载体,通过将慢病毒转移质粒和包装质粒共转染293T细胞,得到重组慢病毒载体颗粒,然后离体感染小鼠心肌细胞,采用Real-timePCR检测RyR2在mRNA水平的沉默效应。结果经测序证实RNAi慢病毒载体构建成功并成功包装。流式细胞仪测得重组慢病毒感染小鼠心肌细胞的阳性率达80%以上。Real-timePCR证实,重组慢病毒Lenti-siRyR2感染的小鼠心肌细胞中RyR2在mRNA水平基因抑制率达90%以上。结论成功构建了表达RyR2-shRNA的重组慢病毒表达载体,并在小鼠心肌细胞中实现有效的基因沉默效应。

肿瘤干细胞在人乳腺癌细胞株MCF-7耐紫杉醇效应中的作用

目的 观察肿瘤干细胞（CSC）在人乳腺癌细胞株MCF-7对紫杉醇（Taxol）产生获得性耐药中的作用。方法 采用低浓度加量（起始浓度为0.005 mg/L）持续诱导法诱导产生人乳腺癌耐Taxol细胞株MCF-7/Taxol,噻唑蓝（MTT）法检测MCF-7/Taxol对Taxol的敏感性。实时定量聚合酶链反应（Real-time PCR）检测三磷酸腺苷结合转运蛋白G超家族成员2（ABCG2）和性别决定区Y-框蛋白2（SOX-2）的表达。结果 亲本株和耐药株细胞对Taxol的半数抑制浓度（IC50）值分别为0.05 mg/L和4.2 mg/L,耐药指数为84。0.20 mg/L的As2O2降低了耐药株对Taxol的耐药性,逆转倍数为3.82,相对逆转效率为74.7%。耐药株细胞ABCG2和SOX-2的表达显著升高（P〈0.01）。As2O3处理后,ABCG2和SOX-2的表达显著下降（P〈0.05）。结论 CSC有可能是人乳腺癌细胞株MCF-7对Taxol产生耐药的机制之一。

骨髓间充质干细胞对胶原诱导的关节炎大鼠CD4^＋CD25^＋调节性T细胞的影响

目的观察间充质干细胞（MSCs）对Ⅱ型胶原诱导的关节炎（CIA）大鼠Treg细胞数量和功能的影响。方法以Ⅱ型胶原蛋白免疫SD大鼠建立CIA动物模型；分离培养正常SD大鼠骨髓MSCs，尾静脉移注CIA大鼠；流式细胞仪检测大鼠脾脏CD4^＋CD25^＋T细胞比例变化；实时定量聚合酶链反应（Real—timePCR）检测脾脏叉状头／翅膀状螺旋转录因子（Foxp3）mRNA水平及白细胞介素（IL）-10、转化生长因子-β1（TGF—β1）的表达；免疫磁珠法分选各组大鼠脾脏CD4^＋CD25^＋T细胞，体外检测CD4^＋CD25^＋T细胞对CD4^＋CD25^-T细胞（Teff）增殖的抑制作用。结果MSCs移植改善了CIA大鼠的关节炎症状；与对照组比较，MSCs治疗组大鼠的脾脏内Treg细胞比例逐渐增加，到30d时，和正常对照组比较差异无统计学意义（P〉0．05）。Foxp3mRNA水平逐渐升高，同时IL-10、TGF-β 1mRNA水平亦逐渐增加；MSCs治疗组Treg细胞对Teff细胞增殖作用与CIA组比较显著增强（P〈0．05）。结论通过移植MSCs可提高CIA大鼠体内Treg细胞的数量和功能，通过免疫调节改善了CIA大鼠关节炎症的进程。

自发性高血压大鼠心肌小电导钙激活钾通道蛋白的表达

目的探讨高血压心脏功能的变化与小电导钙激活钾通道（sK）的关系。方法自发性高血压大鼠作为实验组（雄性，n=15），SKY大鼠作为对照组（雄性，n=11），采用尾套法和标准Ⅱ导联测定2组大鼠的动脉血压（ABP）和心电图；采用免疫印迹检测2组大鼠心脏组织SK2通道蛋白的表达；采用免疫细胞化学观察实验组大鼠心房和心室细胞SK2通道的分布。结果与对照组比较，实验组大鼠血压明显升高[（161．91±2．15）mmHg比（109．67±2．65）mmHg（1mmHg=0．133kPa），P〈0．05）]，P波时长和R．R间期延长[P波：（29．27±0．74）ms比（26．60±0．24）ms，R．R间期（161．64±8．78）ms比（131．40±1．65）ms，均P〈0．05]，而QRS波长和P．R间期与对照组相比差异无统计学意义。与对照组比较，实验组大鼠心房组织SK2蛋白表达降低（P〈0．05），心室组织SK2蛋白表达量与对照鼠差异无统计学意义。SK2通道分布于高血压大鼠心房细胞膜，心室细胞的SK2阳性免疫反应略弱。结论自发性高血压大鼠心脏SK2通道表达下调。