喜马拉雅旱獭鼠疫自然疫源地牧羊犬耶尔森菌感染和携带状况初步调查

目的了解喜马拉雅旱獭鼠疫自然疫源地牧羊犬耶尔森菌感染和携带状况,探讨3种致病性耶尔森菌在自然界是否存在替代或拮抗关系,为鼠疫防控提供新方法。方法采集喜马拉雅旱獭鼠疫疫源地牧羊犬血清、肛拭子标本进行致病性耶尔森菌的检测与分析。结果检测阿克塞县、肃北县、肃南县、天祝县牧羊犬血清分别为88、94、70、64份,阳性率分别为31.82%(28/88)、32.98%(31/94)、2.86%(2/70)、1.56%(1/64)。采集阿克塞县、肃北县、肃南县、天祝县的牧羊犬肛拭子共171份进行致病性耶尔森菌分离,动物间鼠疫流行猛烈的阿克塞、肃北分别分离出1株克氏耶尔森菌和2株非致病性小肠结肠炎耶尔森菌。结论喜马拉雅旱獭鼠疫自然疫源地动物间鼠疫流行猛烈地区的牧羊犬感染和携带非致病性小肠结肠炎耶尔森菌。

常用消毒剂对鼠疫菌的杀灭效果观察

目的选择高效、低毒、方便的消毒剂代替来苏儿,用于鼠疫实验室消毒和疫情处理。方法选用二氧化氯、过氧乙酸消毒剂,采用悬液法、载体定量法和模拟现场对鼠疫菌进行杀灭试验。结果250mg/L二氧化氯溶液作用5min,或400mg/L过氧乙酸溶液作用10min,可完全杀灭液体中鼠疫菌。200mg/L二氧化氯溶液或400mg/L的过氧乙酸溶液作用1min,即可杀灭物体表面的鼠疫菌。结论2种消毒剂对鼠疫菌杀灭效果可靠,可以替代来苏儿用于鼠疫实验室和疫情处理消毒。

2011-2018年甘肃省祁连山-阿尔金山喜马拉雅旱獭鼠疫自然疫源地鼠疫流行特征分析

目的掌握甘肃省祁连山-阿尔金山喜马拉雅旱獭鼠疫自然疫源地鼠疫流行特征,为结合当地实际,创新开展鼠疫防控工作提供科学依据。方法采用回顾性研究,收集2011-2018年甘肃省鼠疫自然疫源地监测数据(来源于甘肃省疾病预防控制中心疫情监测档案、网络直报信息)。采用描述性流行病学方法,分析2011-2018年甘肃省祁连山-阿尔金山喜马拉雅旱獭鼠疫自然疫源地的鼠疫流行特征,包括宿主动物分布情况、鼠疫菌的病原学及血清学检测结果、人间鼠疫流行特征等。结果2011-2018年,甘肃省祁连山-阿尔金山喜马拉雅旱獭鼠疫自然疫源地总平均獭密度为0.21只/hm_(2),其中天祝县平均獭密度最高,为0.58只/hm_(2);嘉峪关市平均獭密度最低,为0.01只/hm_(2)。疫源地内共分离鼠疫菌381株,其中分离自人尸4株、宿主动物298株、染疫媒介79株;分离菌株前3位的县(市)依次为阿克塞县(38.85%,148株)、肃北县(31.50%,120株)、玉门市(16.27%,62株)。共检测旱獭血清6860份、犬血清1769份,F1抗体阳性率分别为2.70%(185/6860)、8.42%(149/1769);动物材料814份,F1抗原阳性率为4.30%(35/814)。共发生人间鼠疫4起,发病4人,死亡4人;其中3起发生在肃北县、1起在玉门市;发病月份分别为7、9、11、12月,主动接触牧羊犬等染疫动物是主要感染途径,外来放牧雇工为重点职业人群。结论甘肃省祁连山-阿尔金山喜马拉雅旱獭鼠疫自然疫源地动物间疫情活跃,且各地区鼠疫疫情呈现不同流行状态;应采取因地制宜、分类指导的防控措施严防鼠疫的发生和传播。

甘肃省202株鼠疫耶尔森菌基因型分布及流行特征分析

目的研究甘肃省鼠疫耶尔森菌（鼠疫菌）基因分型分布及其流行特征。方法根据鼠疫菌基因组23个差异区段设计引物，采用PCR技术，分析甘肃省202株不同来源的鼠疫菌。结果202株鼠疫菌共分为8个基因型，即1b、5、7、8、13、26、GS1型（新基因型）和GS2型（新基因型）。自20世纪60年代起至今分离到1b、8和GS1基因型，而自1977年后再未分离到7、13、26基因型，在1995年后才分离到GS2、5基因型。结论甘肃省1b、8和GS1基因型鼠疫菌自20世纪60年代起持续流行至今，7、13和26基因型菌已有40余年未分离到，而GS2和5基因型菌自20世纪90年代才开始流行。

甘肃省鼠疫疫源地啮齿动物DNA条形码分析

目的探讨DNA条形码技术在甘肃省鼠疫疫源地啮齿动物分类和鉴定中的可行性。方法 2017年在甘肃省鼠疫疫源地及非疫源地采集啮齿动物肝脏标本,并保存整只,制作标本,提取基因组DNA,采用通用引物PCR法扩增细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ(COⅠ)基因并测序。将测序结果与GenBank中物种的DNA条形码进行BLAST比对,并构建分子进化树。结果在甘肃省9个市(区、县)的4类不同生境中共采集啮齿动物164只,其中鼠科3种,跳鼠科2种,仓鼠科4种,松鼠科3种,沙鼠科、鼢鼠科和兔形目的鼠兔科各1种。通过164个样本所构建的分子进化树形成15个高度支持的分支,与形态鉴定结果一致。结论 DNA条形码可用于啮齿动物标本的准确鉴定,能更好地研究啮齿类的分类及进化关系。

甘肃省布鲁氏菌病流行特征与防控对策的研究

目的对目前甘肃省布鲁氏菌病流行状况及影响流行因素调查研究,提出符合甘肃省实际,切实可行的防控对策。方法采用回顾性描述研究方法对1990～2009年间甘肃省布鲁氏菌病流行特征进行综合分析。结果1990～2009年,布鲁氏菌病感染率由0.41%上升到3.41%,发病率由0.035/10万上升到0.271/10万;阳性血清地区由3个县区上升到37个县区;新发病人由2个县区上升到17个县区。布鲁氏菌病感染人群以40岁以上年龄组最高;职业以农民和牧民为主;流行高峰集中在5～8月份;传染源主要为羊、其次为牛和猪。20年间牛布鲁氏菌病感染率由1990的0.04%上升到2009年的0.17%,奶牛感染率由0.08%上升到0.17%,羊感染率由0.02上升到1.37%;20年间全省家畜牛平均检疫覆盖率仅占存栏量的18.14%,奶牛检疫率28.65%,羊检疫率0.14%;牛平均免疫覆盖率为6.27%,羊平均免疫覆盖率为4.88%。普通人群布鲁氏菌病基本知识平均知晓率仅为10.6%,高危人群仅为14.9%;医务人员仅为28.4%。结论甘肃省人、畜间布鲁氏菌病感染率逐年上升,年内新发病人逐年增加;流行范围逐年扩大,疫情重点地区已由传统的牧区逐渐转向农区,并向城镇逼近蔓延。传染源得不到彻底净化,各级政府重视不够,政策及经费支持欠缺,专业技术力量薄弱,技术人员匮乏,群众对布鲁氏菌病防治知识缺乏等是影响甘肃布鲁氏菌病流行及回升主要因素。针对上述严峻形势,应尽快完善修订防控措施,以早日遏制疫情迅速上升的势头。

鼠疫菌检测技术在鼠疫实际监测工作的应用效果分析

目的评价鼠疫菌检测技术在鼠疫实际监测工作的应用效果。方法分别用细菌培养、反向血凝、金标、PCR和ELISA方法检测染疫动物脏器材料F1抗原,比较了不同方法在实际监测工作中的差异。结果细菌培养、ELISA、R IHA、PCR、金标阳性检出率分别为4.68(、8.19(、15.79(、15.20(、14.62(;以标准值为对照,敏感度和特异度分别为细菌培养:敏感度36.4%、特异度100%;ELISA敏感度63.6%、特异度100%;R IHA敏感度72.7%、特异度92.6%;PCR敏感度95.5%、特异度96.6%;金标敏感度81.8%、特异度95.3%。结论细菌培养在实际应用中,受到材料腐败程度影响较大,但能培养出鼠疫菌。反向血凝在应用中以其方便、迅速且成本较低,在大范围的疫源监测中起到重要作用。胶体金法在应用中简单、准确、便捷,适用于现场操作。PCR技术在非典型鼠疫菌的检测中意义重大[1]。ELISA技术方便、快捷、特异性强,但对材料要求较高。

DNA条形码技术在甘肃省啮齿动物鉴定中的应用

目的探讨DNA条形码技术在甘肃省啮齿动物鉴定中的应用，为建立甘肃省啮齿动物DNA条形码数据库提供资料。方法选取甘肃省鼠类肝脏或肌肉作为研究对象，运用DNA条形码技术检测动物标本线粒体细胞色素C氧化酶I亚基（coI）基因序列。结果共检测54份样本，种内遗传距离为0-2％，种间遗传距离为18％-30％；邻接法系统树能区分8个物种的类群。结论DNA条形码技术可用于啮齿动物鉴定，对于甘肃省自然疫源性疾病防治有重要意义。

5种鼠疫检验技术检测鼠疫腐败材料的对比分析

目的探讨鼠疫被检材料腐败对5种鼠疫检验技术特异性和敏感性的影响。方法用细菌培养、酶联免疫吸附测定法(ELISA)、微量法(RIHA)、多聚酶链反应(PCR)以及胶体金法对采自甘肃省河西鼠疫活跃区的64份腐败材料进行敏感性和特异性对比实验。结果材料腐败后鼠疫菌培养受限(36.4%);RIHA敏感性为72.7%,特异性为73.8%;PCR法较稳定,敏感性和特异性分别为95.5%和88.1%;胶体金法的敏感性为81.8%,特异性为83.3%;ELISA敏感性较低(63.6%),但特异性(100%)较高。结论材料腐败后其细胞内的DNA和蛋白均会有不同程度的降解,对以上几种检验方法的敏感性和特异性均有影响,现行的鼠疫诊断方法可能出现错判、漏判。现场检测和判定需配合几种实验方法加以确认。

受试者工作特征曲线法评价上转发光技术快速检测鼠疫抗原抗体的效果

目的用受试者工作特征曲线（receiver operating characteristic curve，简称ROC曲线）法评价上转发光技术（UPT）快速检测鼠疫抗原抗体的效果，为UPT快速检测技术的鼠疫现场应用提供依据。方法在喜马拉雅早獭和阿拉善黄鼠疫源地采集动物血清标本224份，用U胛、酶联免疫吸附试验（EUSA）、金标、间接血凝试验（IHA）4种方法检测鼠疫菌F1抗体；采集旱獭、黄鼠脏器、骨髓标本108份，用UPT、ELISA、金标、PCR、反向间接血凝试验（RIHA）5种方法检测鼠疫菌F1抗原。抗体检测结果以IHA为标准，抗原检测结果分别以RIHA、PCR＋金标、PCR＋ELISA为标准，结果应用ROC法进行评价。结果抗体检测UPT、ELISA、金标3种方法的曲线下面积（AUC）均〉0．5，U胛的AUC与其他方法比较，差异无统计学意义0=1．204，P〉0．05）。抗原检测UPT、ELISA、金标、PCR4种方法AUC均〉0．5，UPT的AUC与其他方法比较，差异无统计学意义0=0．866。P〉0．05）。结论UPT快速检测技术对鼠疫抗原抗体检测效果良好，该技术操作简单，快速，结果准确，适合鼠疫现场监测、突发鼠疫疫情应急处理，适宜推广应用。

甘肃省58株鼠疫菌基因分型及地理分布的研究

本研究采用差异区段（different regions，DFR）方法对分离自甘肃省鼠疫疫源地的58株鼠疫菌进行基因分型，分析其地理分布。