降钙素基因相关肽通过Hippo通路调控小鼠骨髓间充质干细胞成骨分化的实验研究

目的前期研究发现降钙素基因相关肽(CGRP)能够促进成骨细胞的生物学活性,为了进一步揭示CGRP在骨修复中的作用,检测CGRP对小鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)成骨分化的影响,并对Hippo通路在这个过程中的作用进行了初步探讨。方法在体外诱导培养的BMSCs中加入不同浓度的CGRP,处理48 h后测试碱性磷酸酶(ALP)活性,以筛选的优势浓度;处理7 d后进行茜素红染色,分别检测细胞的分化情况。应用Western blot检测CGRP作用于BMSCs后,Hippo通路核心分子Mst1/2蛋白磷酸化的表达水平;利用Hippo通路抑制剂维替泊芬(Verteporfin)阻断下游Yap信号,逆转录聚合酶链反应检测其对成骨相关因子Ⅰ型胶原蛋白(ColⅠ)、Runt相关转录因子2(Runx2)mRNA的表达影响。结果 ALP活性检测结果显示,与空白对照组相比,10^(-9)、10^(-8)、10^(-7) mol·L^(-1)浓度范围的CGRP都能显著促进小鼠ALP活性的增加(P<0.05),以10^(-8) mol·L^(-1)浓度的CGRP为最佳刺激浓度。用10^(-8) mol·L^(-1)浓度的CGRP处理后,茜素红染色显示钙化结节明显增多。CGRP能够显著上调p-Mst1/2蛋白的表达(P<0.05);当运用了抑制剂Verteporfin时,显著降低了CGRP诱导的Runx2、ColⅠmRNA的表达(P<0.05)。结论 CGRP能够促进小鼠BMSCs的成骨分化,且Hippo信号通路介导了CGRP作用于小鼠BMSCs成骨分化的过程。

Runx2和Osx在修复性牙本质形成过程中的表达模式

目的:观察Runx2和Osx在牙髓损伤后表达模式的变化。方法:取雄性SD大鼠24只随机抽取4只不作任何处理,用于正常对照;其余20只分别以双侧下颌第一磨牙为对象建立牙髓损伤模型。分别于建模后0、3、12 h和3、7 d各时间点从牙髓损伤组中各随机抽取4只大鼠,并取其双侧下颌第一磨牙标本制作组织切片;然后采用HE染色法观察各组修复性牙本质的形成情况,并采用免疫荧光染色法检测Runx2、Osx、DSPP的表达模式。结果:HE染色显示,损伤后7 d,在损伤下方可见明显的修复性牙本质形成。免疫荧光染色显示,Runx2、Osx和DSPP主要表达于损伤下方,其中Runx2的表达呈"抛物线"趋势,即损伤后3 d时表达最为强烈(P<0.05),此后逐渐下降;Osx和DSPP的表达均呈逐渐上调的趋势,Osx的表达在损伤后7 d时上调最为明显(P<0.05),而DSPP的表达则在损伤后3 d时即显著增强并持续至损伤后7 d(P<0.05)。结论:Runx2、Osx和DSPP在牙髓损伤后的不同时期具有不同的表达模式。

小檗碱对糖尿病大鼠种植体骨整合的影响

目的:研究小檗碱对Ⅱ型糖尿病大鼠种植体骨整合的影响。方法:35只7月龄SPF级雄性健康SD大鼠,随机抽取10只,分入健康组(H组)。剩余25只通过高糖饮食+小剂量链脲佐菌素(STZ)诱导,构建Ⅱ型糖尿病大鼠模型共计20只(5只失败),随机分为小檗碱治疗组(B组)和非治疗组(N组)。将60枚纯钛种植体植入大鼠双侧股骨干骺端,分别于第7、31、38、66、101天测量大鼠的体质量和空腹血糖值。种植术后10 周将大鼠处死,取股骨行Micro-CT扫描、VG染色以及种植体拔出实验。观察VG染色硬组织切片,测量骨体积分数(BV/TV)、骨小梁厚度(Tb.Th)、骨小梁数目(Tb.N)、骨小梁间隙(Tb.Sp)、骨小梁容积率(TBV)、骨接触率(BIC)及最大拔出力。结果:①H组体质量随时间持续增长;B组和N组体质量31 d时达到最大值,此后B组体质量逐渐降低,N组体质量快速降低(P<0.05);②血糖值高低比较:H组<B组<N组(P<0.05)。③BV/TV、Tb.Th、Tb.N、TBV、BIC及最大拔出力比较,均为H组>B组>N组(P<0.05);Tb.Sp值H组<B组<N组(P<0.05)。结论:小檗碱可有效降低Ⅱ型糖尿病大鼠血糖,并促进种植体的骨整合。