儿茶酚氧位甲基转移酶与疾病的关系

儿茶酚氧位甲基转移酶(COMT)是内源基因表达的二相代谢酶,由22号染色体表达。主要将S-腺苷甲硫氨酸上的甲基转移至底物的羟基上,使底物的一个羟基甲基化。COMT在体内的主要作用是代谢儿茶酚类的化合物,例如:多巴胺、肾上腺素、去甲肾上腺素、雌二醇等化合物,此外还能代谢体外通过饮食及药物摄入的儿茶酚类化合物。由于COMT在体内与化合物的代谢密切相关,COMT代谢失常能够引起很多疾病或者罹患疾病的风险增加,例如:帕金森病、精神分裂症、乳腺癌等疾病。本综述通过阐述COMT代谢紊乱引起的疾病尝试说明COMT与其相关疾病之间的联系,旨在能够对COMT代谢相关疾病提供有效的治疗方法。

β-葡萄糖醛酸苷酶的重组表达及对黄芩苷的生物转化

目的构建表达β-葡萄糖醛酸苷酶(β-glucuronidase,GUS)的重组菌株,得到高纯度β-葡萄糖醛酸酶,进而对黄芩苷进行生物转化获得黄芩素。方法以E.coli K12基因组DNA为模板,采用PCR方法扩增GUS基因,经酶切后连接到表达载体p ET-28a中,获得重组表达载体p ET28a-GUS,将重组载体转化到感受态细胞BL21(DE3)中,对所得基因工程菌进行培养条件和表达条件的优化;后经分离纯化后得到高纯度β-葡萄糖醛酸酶。以黄芩苷为底物进行酶法转化生产黄芩素,并对反应条件进行优化。结果经测序,扩增的重组质粒目的基因序列与数据库中GUS基因序列一致。经IPTG(isopropy-β-D-thiogalactoside)诱导表达后,SDS-PAGE分析获得分子质量70 k Da的单一蛋白条带,工程菌最适培养条件为:37℃、pH7.2、IPTG浓度0.6μmol/L、诱导时间12 h。经过离心破碎、亲和层析、冻干后得到高纯度β-葡萄糖醛酸酶冻干粉。在该酶催化转化下,黄芩苷可转化为黄芩素,在40℃,pH 6.5,酶浓度60μg/m L条件下,反应2.5 h,黄芩苷转化率可达72.5%。结论成功构建了β-葡萄糖醛酸苷酶高表达菌株,并用于黄芩苷的定向水解制备黄芩素,为生物转化法生产黄芩素提供了新思路。