膜表达型InsB_(15-23) H-2K^d dtSCT诱生小鼠特异性CTL细胞研究

通过SOE-PCR构建膜表达型二硫键捕获型单链三聚体(dtSCT)真核表达载体,肌肉免疫4~5周龄NOD母鼠,利用流式细胞术检测小鼠外周血和脾脏中InsB15-23特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)细胞频率。结果表明:dtSCT组NOD小鼠的外周血中InsB15-23特异性CD8+T细胞频率为1.93%±0.55%,与空质粒对照(0.22%±0.11%)有极显著差异(P<0.01);脾脏中InsB15-23特异性CD8+T细胞频率为0.83%±0.31%,与空质粒对照(0.37%±0.20%)亦有极显著差异(P<0.01)。说明膜表达型InsB15-23H-2Kd dtSCT分子在小鼠体内得到表达,且具有类似天然pMHC I复合物的功能,能够为InsB15-23特异性CTL细胞的活化增殖提供第1信号。

应用dtSCT技术制备低亲和力抗原肽InsB_(15-23)肽的MHCⅠ四聚体

目的制备低亲和力InsB15-23抗原肽的MHCⅠ四聚体。方法应用二硫键捕获型单链三聚体(disulfide-trap singlechain trimer,dtSCT)技术,将InsB15-23抗原肽、小鼠β2微球蛋白(β2-microglobulin,β2m)和H-2Kd分子以柔性接头(linker,L)依次连接,并在抗原肽的C末端与H-2Kd分子间引入了二硫键,以提高抗原肽与H-2Kd分子结合的稳定性。融合基因克隆入pET-22b原核表达载体,经过诱导表达、洗涤包涵体、稀释复性等步骤获得单体,生物素化后制成InsB15-23dtSCT型四聚体。结果我们比较了自制InsB15-23dtSCT四聚体和商品化G9V传统五聚体对小鼠外周血特异性CTLs的检出率。2种多聚体对阴性对照Balb/c小鼠都显示出很低的非特异性标记水平,都能检出4周龄NOD母鼠外周血中低水平的InsB15-23特异性CTLs,且二者的检出率无统计学差异。结论我们成功制备出稳定的InsB15-23dtSCT型四聚体。与商品化的传统五聚体相比,我们自制的四聚体具有类似的检出率和低非特异性标记水平。

膜表达型InsB_(15-23) H-2K^d dtSCT对NOD小鼠1型糖尿病发病的影响

目的:研究膜表达型Ins B15-23H-2Kddt SCT对NOD小鼠1型糖尿病发病率的影响。方法:用Ins B15-23mdt SCT真核表达载体皮下免疫3周龄NOD母鼠,连续监测NOD小鼠的血糖水平以判断小鼠的发病情况。通过连续切片对NOD小鼠胰岛单个核细胞浸润情况进行检测,并监测IGRP206-214特异性CTLs的变化,来阐明Ins B15-23mdt SCT分子影响1型糖尿病病程的细胞学机制。结果:Ins B15-23mdt SCT组小鼠30周龄时的发病率(9%)显著低于空质粒组(60%)和自然发病组(80%),胰岛单个核细胞浸润情况也较轻,但16和40周龄时两组小鼠外周血IGRP206-214特异性CTLs水平无差异。结论:Ins B15-23mdt SCT真核表达载体能降低NOD小鼠1型糖尿病发病率,并且这种免疫保护作用是IGRP206-214非依赖性的。

高层建筑暖通消防工程中的防排烟施工技术探讨

暖通消防工程在建筑行业实践中的应用越来越重要,强化我国高层建筑的暖通消防工程设计和防排烟施工的效率是消防安全防控的必要之举。本文首先论述现阶段高层建筑的暖通消防工程设计的发展现状,指出了排烟通风不畅的问题,提出提升高层建筑暖通消防工程设计的策略,在实践中不断优化系统设计与建筑单位经济效益。

IGRP_(206-214)dtSCT四聚体偶联皂草素的制备及初步应用

以InsB15-23dtSCT原核表达载体为基础,制备dtSCT型IGRP206-214H-2Kd原核表达载体;将获取的融合蛋白IGRP206-214H-2Kd单体,生物素化制成IGRP206-214dtSCT四聚体,进一步将皂草素与IGRP206-214dtSCT四聚体偶联;流式检测皂草素偶联IGRP206-214dtSCT四聚体与NOD鼠脾脏淋巴细胞共孵育体系中IGRP206-214特异性细胞毒性T细胞(CTL)。结果表明:皂草素偶联IGRP206-214dtSCT四聚体与NOD鼠脾脏淋巴细胞共孵育后,IGRP206-214特异性CTL的频率与PBS对照组相比明显下降(P<0.001)。说明偶联皂草素的IGRP206-214dtSCT四聚体在体外能够靶向清除NOD鼠抗原特异性CTL。