猫CDH1基因在过表达c-MYC成纤维细胞中的表达变化及生物信息学分析

[目的]试验旨在研究骨髓细胞瘤病毒癌基因同源物(myelocytomatosis viral oncogene homolog, c-MYC)对猫成纤维细胞的影响及其与E-钙黏蛋白(cadherin 1,CDH1)基因表达和分子特性的关系,为将其应用于猫肿瘤疾病防治和组织损伤修复提供依据。[方法]通过组织贴壁法对猫胎儿成纤维细胞进行分离培养,利用电转仪将PB-TRE-c-MYC质粒转染至细胞并观察细胞形态,利用实时荧光定量PCR检测CDH1基因的表达情况,并通过生物信息学软件分析CDH1蛋白的理化性质和结构特征。[结果]过表达c-MYC导致细胞形态发生变化,从间质细胞的长梭型向上皮细胞的鹅卵石状发生转变,且使上皮细胞标志基因CDH1的表达极显著上调(P<0.01)。生物信息学分析显示,猫CDH1蛋白有881个氨基酸,其中含量最多的是亮氨酸,定位于细胞膜,存在4个CA结构域,介导细胞与细胞的接触,属于亲水性的酸性蛋白,主要由无规则卷曲组成,可能存在由Sec易位子转运并被信号肽酶Ⅰ(Sec/SPⅠ)切割的信号肽位点。[结论]猫CDH1基因的表达可被外源性重编程因子c-MYC激活,其编码的钙黏蛋白可促进猫胎儿成纤维细胞的间质-上皮转化,以抑制细胞癌化。

NF-κB和Nrf2信号通路在成肌细胞抗氧化应激中的作用

成肌分化是动物肌肉发育的关键环节,与其健康和生产性能密切相关。为研究成肌细胞抗氧化应激的机制,试验分离了绵羊胎儿成肌细胞,利用地塞米松处理分化中的成肌细胞建立氧化应激模型;试验分为4组,包括正常分化48 h组(N 48 h)、地塞米松处理分化48 h组(Dex 48 h)、正常分化72 h组(N 72 h)、地塞米松处理分化72 h组(Dex 72 h),通过倒置显微镜观察各组细胞的形态变化,利用ROS检测试剂盒检测ROS含量,用RNA-seq检测NF-κB和Nrf2信号通路相关基因mRNA的表达情况,并采用皮尔森相关系数法分析相关性,用STRING数据库分析蛋白的互作关系。结果表明,地塞米松诱导的氧化应激对成肌分化具有明显的抑制作用,且抑制作用随处理时间的延长而增加;ROS含量较各自对照组均显著增加,且随着处理时间的延长而增加。由RNA-seq分析结果可知,与对照组相比,地塞米松处理组NF-κB和Nrf2信号通路被激活,上游基因P65、IKK2、IκBα、IκBβ、Nrf2、Keap1以及相应下游靶基因SOD1、SOD2、FHC、HO-1、GSH-Px的mRNA相对表达量均显著升高,各基因之间存在不同程度的相关性以及错综复杂的蛋白互作关系,其中Keap1基因是联系2条通路的重要枢纽。综上所述,在成肌细胞分化过程中,NF-κB和Nrf2信号通路交互联系,共同在地塞米松诱导的成肌细胞氧化应激中发挥抗氧化作用。

浅析雷奥南和《奥尔加农大全》

12世纪的法国巴黎是知识、经济繁荣发展的时期。为了与巴黎圣母院高大、辉煌、璀璨的哥特式建筑风格相一致，巴黎圣母院的作曲家们创作了一些高度装饰的音乐作品，雷奥南就是这其中的代表之一。

Myf5基因在不同时期绵羊胎儿半腱肌和背最长肌中的表达及生物信息学分析

为了研究MRFs家族中Myf5基因在不同发育时期绵羊胎儿骨骼肌中的表达规律及分子特性,实验采取妊娠30 d(E30)、50 d(E50)和70 d(E70)3个时期绵羊胎儿的半腱肌和背最长肌,用HE染色法观察了其显微结构,通过实时荧光定量PCR技术检测了Myf5基因的表达变化,同时运用生物信息学软件对绵羊Myf5蛋白的结构特征和理化特性及下游靶基因进行了预测分析。结果显示,E30~E70胎羊半腱肌和背最长肌的肌细胞数量和直径随胎龄逐渐增加,同一时期两者微观结构有所差异;Myf5 mRNA的表达量同样随胎龄而升高,但在同一时期2种组织中也存在差异。绵羊Myf5蛋白由255个氨基酸组成,分子式为C_(1209)H_(1901)N_(351)O_(397)S_(18),定位于细胞核,主要由α螺旋和无规则卷曲组成,存在1个bHLH结构域,亲水性平均系数为-0.658,不稳定系数为72.99,等电点(PI)为5.72。绵羊Myf5调控的下游靶基因包括MyoD、MyoG和Myf6等;Myf5基因mRNA在胎羊半腱肌和背最长肌E30~E70时期的表达量均呈现上升趋势,但同一时期在背最长肌中的表达更高。本实验可为绵羊Myf5基因调控和作用机制的深入研究奠定基础。

地塞米松对胎鼠骨骼肌发育相关基因表达的影响

为了研究母体应激对胎鼠骨骼肌发育及相关基因表达的影响,对孕期12 d的母鼠连续3 d(每天一次)注射地塞米松(Dex)以建立母体应激模型,使用ELISA试剂盒检测孕鼠胎盘羊水中糖皮质激素(Glucocorticoid,GC)含量的变化,采用HE染色法观察胎鼠骨骼肌的显微结构,利用荧光定量PCR分析相关基因的表达,并利用生物信息学软件对相关基因5'调控区元件进行预测。结果表明,Dex处理组孕鼠胎盘羊水中的GC含量显著升高,胎鼠骨骼肌发育受损,Myostatin基因表达显著上调,而Pax3和Pax7表达明显下调。进一步生物信息学分析结果表明,Myostatin、Pax3和Pax7基因的5′调控区均含有糖皮质激素受体元件(GRE),Myostatin基因的5′调控区同时存在PAX7元件,Pax3、Pax7基因的5′调控区还分别存在PAX7、PAX3元件,其调控机制可能是Dex通过糖皮质激素受体(GR)结合于靶标基因启动子区的GRE元件而发挥直接或间接的调控作用。研究结果可为深入研究家畜等动物母体应激影响子代骨骼肌发育的分子机制并探讨相应的防治措施奠定基础。

生命的绿

我的案头有一盆龟背竹。我爱这饱含生命活力的绿。一支支叶柄,不枝不蔓,托起几片浓浓的绿叶,仿佛是只只伞盖,与墙上的墨笔条幅相映衬,让室内平添了一分宁静淡泊又蓬勃向上的意境。一天,我注意到,又一片新绿要诞生了。它先是从老叶叶柄下部的包裹中伸出一个尖角来,随后的几天,它颤动着、扭转着,挣开老叶子的怀抱,占据了整个植株最中央、最高处、最醒目的位置,绽开了新生命的容颜。看着,看着,让人有一种抑制不住的向上、向上、再向上的感觉。

业务学习要抓“实效性”和“实践性”

当前,各级税务部门都把抓干部的业务学习列入重要日程,并取得了一定的成效。但在实施过程中,某些地方出现了业务培训和考试与实际工作脱节的现象,造成了"实效性不强"和"实践性不足"的偏差。所谓实效性不强,是指培训和考试的目的并没有真正达到,效果不好。究其原因,一是认识不足。有一部分同志,尤其是一些年龄偏大的人员。