ABCA1胞内第三环缺失突变体的抗砷性研究

目的分析ABCA1胞外第三环(第843—1348位氨基酸残基)缺失突变体的抗砷功能。方法分别转染空载体、第843—1348位氨基酸残基ABCA1缺失(ABCA1△843-1348)突变体和全长ABCA1到HeLa细胞,激光共聚焦显微镜观察其定位,CCK-8法检测急性砷暴露24 h后细胞生存率的改变,并用原子荧光吸收光谱法检测细胞内的砷蓄积量。结果激光共聚焦结果表明,突变体与全长ABCA1都定位在细胞膜上。突变体和全长ABCA1转染组在各砷浓度处理条件下的生存率没有差异(P>0.05),均高于空载体对照组(Ρ<0.05)。转染空载体、全长和突变体ABCA1细胞24 h半数抑制浓度IC50值分别为19.17μM、31.64μM、29.73μM。10μM亚砷酸钠处理条件下,转染全长和突变体ABCA1细胞内砷含量在4 h后趋于稳定,而转染空载体的细胞内砷含量仍持续升高,3组差异有统计学意义(Ρ<0.05)。转染全长和ABCA1△843-1348突变体细胞内各个时间点的砷含量没有差异(P>0.05)。结论ABCA1△843-1348突变体仍具有抗砷性,提示该区域不是ABCA1抗砷的关键功能结构域。

阿尔茨海默病中高表达的miR-182-5p靶向抑制了Neuritin的表达

目的筛选阿尔茨海默病(Alzheimer′s disease,AD)数据集中可能靶向Neuritin的目标miRNA,明确二者在AD动物模型中的相关性,进一步探讨目标miRNA对Neuritin的靶向抑制作用。方法从AD小鼠脑组织miRNA数据集中,富集AD中上调的miRNA;同时利用生物信息学手段,分析预测靶向Neuritin的miRNA;二者取交集,筛选获得AD中上调的可能靶向Neuritin的目标miRNA。为了明确二者的相关性,我们在AD模型小鼠中,使用qRT-PCR检测目标miRNA在脑组织的表达水平,同时利用Western Blot检测Neuritin蛋白在脑组织的表达。然后,在细胞水平观察了目标miRNA模拟物对Neuritin表达的影响。最后,我们用荧光素酶报告基因实验探讨了目标miRNA对Neuritn 3′UTR区特异性的结合作用。结果筛选获得AD中上调、且可能靶向Neuritin的目标miRNA———miR-182-5p;在AD模型小鼠海马组织中,miR-182-5p的表达升高(P<0.05),且Neuritin的表达降低(P<0.01),说明AD模型小鼠海马中miR-182-5p与Neuritin的表达呈负相关;miR-182-5p模拟物转染293T细胞后,Neuritin表达低于对照组(P<0.05),说明miR-182-5p抑制了Neuritin的表达;荧光素酶报告基因结果显示,共转染荧光素酶报告基因和miR-182-5p模拟物后,pLUC-Neuritin组的荧光活性低于pLUC-MUT-Neuritin组(P<0.01),说明miR-182-5p通过与Neuritn 3′UTR区特异结合,靶向抑制了Neuritin的表达。结论AD模型小鼠中miR-182-5p表达升高,miR-182-5p可以靶向抑制Neuritin的表达。

2014—2023年浙江省海宁市食源性疾病病原体感染特征分析

【目的】分析浙江省海宁市食源性疾病主动监测病原体的流行特征,为食源性疾病及暴发事件的预防及调查提供依据。【方法】收集2014—2023年海宁市哨点医院报告食源性疾病患者信息,并采集其粪便或肛拭子进行相关病原体检测。采用χ^(2)检验比较不同组别的病原体检出率差异,采用多因素logistic回归分析病原体检出的危险因素。【结果】2014—2023年间共检测样本5814份,阳性检出率15.36%,其中诺如病毒检出率4.95%,致泻性大肠埃希菌检出率4.49%,沙门菌检出率3.59%,副溶血性弧菌检出率2.22%,志贺菌检出率0.11%。阳性检出率呈现出以诺如病毒为主的3—4月份小高峰和以细菌为主的7—9月大高峰的季节特征;病原体检出率最高的3种人群为工人、脑力劳动者和其他人群。多因素logistic回归显示,年龄、季节和就诊前服用抗生素是病原体检出的显著影响因素(P<0.05)。就诊前服用抗生素组总病原体检出风险较未服用者降低(OR=0.29,95%CI:0.15~0.49);诺如病毒在学龄前年龄组(OR=0.19,95%CI:0.04~1.00)、夏秋季(OR值范围为0.23~0.41)及服用抗生素组(OR=0.42,95%CI:0.15~0.92)检出风险降低,在青年组检出风险增加(OR=1.40,95%CI:1.05~1.88);致泻性大肠埃希菌在夏季(OR=1.82,95%CI:1.30~2.60)检出风险升高;沙门菌检出风险在老龄组和夏季增加(OR值范围为1.44~2.21),在青年组、冬季和服用抗生素组降低(OR值范围为0.22~0.65);副溶血性弧菌检出风险在夏秋季增加(OR值范围1.80~1.90),在中小学生组和冬季降低(OR值范围为0.10~0.32)。【结论】海宁市食源性疾病流行病原体检出处于较高水平,年龄、季节和就诊前服用抗生素是病原体检出的独立影响因素。提示在进行食源性暴发事件现场调查时可依据发生时间、病例年龄分布等特征提出针对性的致病因子假设。

砷对巨噬细胞胆固醇流出及ABCA1、ABCG1、SRBI基因表达的影响

目的分析砷对巨噬细胞胆固醇流出及腺苷三磷酸结合盒家族A亚家族成员1(ABCA1)、腺苷三磷酸结合盒转运体G1(ABCG1)和清道夫受体-BI(SRBI)基因表达的影响,为砷致动脉粥样硬化的机制研究提供依据。方法人髓系白血病单核细胞(THP-1)加入佛波酯诱导成巨噬细胞,与小鼠原代巨噬细胞用0、0.625、1.25、2.5和5μmol/L的亚砷酸钠处理48 h,采用荧光定量PCR和免疫印迹法检测ABCA1、ABCG1和SRBI基因表达水平;采用同位素示踪法检测胆固醇流出率。用含2.5μmol/L亚砷酸钠培养基处理巨噬细胞48 h,再换无砷培养基培养48 h,每隔12 h收集细胞,分析砷对ABCA1表达水平和胆固醇流出的时间效应。结果砷以剂量依赖方式抑制ABCA1、ABCG1的表达和胆固醇流出;5μmol/L砷处理组THP-1细胞和小鼠原代巨噬细胞中ABCA1 mRNA相对表达量分别下降69%和72%,ABCG1 mRNA相对表达量分别下降42%和34%,胆固醇流出率分别下降55%和59%(均P<0.05)。砷对SRBI的表达无明显影响(均P>0.05)。砷以时间依赖方式抑制THP-1细胞ABCA1表达和胆固醇流出,砷处理48 h时ABCA1 mRNA相对表达量和胆固醇流出率下降至最低,分别为0 h时的43%和42%;去除砷影响后ABCA1 mRNA相对表达量和胆固醇流出率逐渐恢复。结论砷通过下调巨噬细胞ABCA1和ABCG1的表达抑制胆固醇流出。

下调LANA对卡波氏肉瘤相关疱疹病毒复制的影响

本文旨在探讨下调潜伏相关核抗原(Latency-associated nuclear antigen,LANA)对卡波氏肉瘤相关疱疹病毒(Kaposi’s sarcoma associated herpesvirus,KSHV)复制的影响。以四环素(Doxycycline,DOX)处理KSHV阳性的iSLK.219细胞,在不同时间点收集细胞,采用实时荧光定量PCR(real time quantitative PCR,qPCR)检测裂解复制期LANA mRNA表达水平。采用脂质体法转染si-LANA至iSLK.219细胞中下调LANA表达水平,以转染非特异siRNA为对照,24h后加入DOX激活病毒裂解复制,在裂解复制激活后不同时间点收集细胞和培养液上清。采用台盼蓝染色法检测细胞活力,倒置荧光显微镜观察红色荧光蛋白(Red fluorescence protein,RFP)表达评价KSHV裂解复制水平;qPCR检测细胞内和上清液中KSHV基因组的拷贝数以判断病毒复制水平。诱导KSHV裂解复制后24h和48h LANA表达分别为潜伏期的2.2和2.6倍。敲低LANA后iSLK.219细胞裂解复制水平在24h、48h和72h比未敲低组分别下降了8.18、3.25和3.98倍。敲低LANA细胞内病毒基因组拷贝数没有明显增加,而未敲低组在细胞内病毒基因组拷贝数在72h增加到2.1倍。相较于未敲低组,上清液中的病毒拷贝数在所有时间点均显著减少。对细胞活力的分析显示敲低LANA降低了细胞活力。敲低LANA抑制KSHV裂解复制,LANA可能通过维持细胞存活和增加细胞内病毒基因组拷贝数促进KSHV病毒的裂解复制。

健康素养简要筛查问卷的汉化及信效度研究

目的汉化由3个条目组成的健康素养简要筛查问卷(Brief Health Literacy Screen, BHLS),并检测其信效度和筛查性能。方法以城市公众健康素养快速评估问卷为效标工具,采用BHLS调查263名住院患者,分别使用Cronbach’sα系数、Pearson相关系数和ROC曲线计算BHLS的信效度和筛查健康素养不足与健康素养有限患者的最佳临界值。结果 BHLS的内部一致性信度为0.742,效标效度为0.519。BHLS得分≤9提示受试者健康素养不足,对应的ROC曲线下面积为0.788(P<0.001);BHLS得分≤11提示受试者健康素养有限,对应的ROC曲线下面积为0.715(P<0.001)。结论 BHLS可用于临床快速筛查健康素养不足患者。

基于2018年CHARLS调查数据的中老年群体首诊就医选择及其影响因素

目的了解我国现阶段中老年群体在患病时就医首诊选择情况及其影响因素。方法数据来源于中国健康与养老追踪调查(CHARLS)2018年的调查数据,纳入样本量为1196人。对中老年人首诊就医行为选择的不同特征进行描述性统计分析,采用多因素Logistic回归来分析其主要影响因素。结果有50.76%的中老年居民在患病时首诊选择基层医疗机构,有49.24%的中老年居民选择医院;不同年龄、居住地、文化程度及是否具有城镇职工医疗保险、城镇居民医疗保险、新农合的中老年居民首诊就医行为选择比较,差异有统计学意义(P<0.1);多因素Logistic回归分析显示,居住地、文化程度和医疗保险对中老年居民首诊选择具有显著影响。结论我国中老年居民基层首诊率不太理想,建议通过医疗资源配置向基层倾斜,加强基层医疗人才队伍建设,加强基层卫生服务机构的药品供应保障,医保报销政策引导,简化转诊程序,宣传分级诊疗,发展医生多点执业制度等途径来提高中老年居民的基层首诊率。

DNA损伤反应影响KSHV复制的研究进展

卡波氏肉瘤相关疱疹病毒(Kaposi’s sarcoma-associated herpesvirus,KSHV)是已知的肿瘤病毒之一,其病毒和细胞因子之间的相互作用对病毒复制和宿主防御至关重要。DNA损伤反应(DNA damage response,DDR)是识别并招募修复因子到DNA损伤部位,引起细胞周期停滞直至损伤修复。DDR是维持基因组稳定的重要机制。未被正确修复的损伤有可能导致基因组不稳定并引起肿瘤发生。本文综述了DDR在KSHV感染、潜伏及裂解期复制的影响的研究进展。