CMV与SP双启动子增强外源基因在小鼠骨骼肌中的表达效率

构建分别含有CMV、肌肉特异启动子SP及双启动子CMV-SP的真核报告基因EGFP表达载体(pCMV-EGFP、pSP-EGFP及pCMV-SP-EGFP)和生长激素释放因子(GRF)表达载体(pCMV-GRF、pSP-GRF和pCMV-SP-GRF).将3种EGFP表达质粒分别注射至小鼠骨骼肌.注射后1周、2周、3周以及4周时,分别提取肌肉组织RNA,应用半定量RT-PCR检测报告基因(EGFP)的表达量,发现pCMV-SP-EGFP组EGFP表达量显著高于pCMV-EGFP组和pSP-EGFP组(P<0.01);经荧光检测得到了较强的荧光信号.将3种GRF表达质粒分别注射至小鼠骨骼肌,在注射后每隔10d记录小鼠累积增重,采血并用RIA法测定血清胰岛素样生长因子Ⅰ(IGF-Ⅰ)浓度,结果pCMV-SP-GRF组累积增重、IGF-I浓度分别高于生理盐水组、pCMV-GRF组和pSP-GRF组(P<0.05).结果表明:CMV与SP两种启动子组合,在小鼠骨骼肌内使外源基因表达效率提高.本研究为提高外源基因在肌肉组织的表达提供了新的途径.

穿心莲内酯对胶质瘤U87细胞增殖的抑制作用及其机制

目的:观察穿心莲内酯(Andro)对胶质瘤U87细胞增殖的抑制作用,阐明其作用机制。方法:取对数生长期U87细胞,分为二甲基亚砜(DMSO)对照组、4H-穿心莲内酯(4H-Andro)对照组和Andro组,MTT法检测不同浓度(0、5、10、15、20和25μmol.L-1)DMSO、4H-Andro及Andro对U87细胞活力的影响,计算U87细胞半数抑制浓度(IC50);Western blotting法检测各组U87细胞NF-κB蛋白表达强度。结果:通过浓度筛选,Andro平均IC50为8μmol.L-1。与DMSO和4H-Andro对照组比较,8μmol.L-1 Andro处理24h后U87细胞增殖活性降低(P<0.01),增殖抑制率达到50%;Andro处理96h时,U87细胞增殖活性进一步降低(P<0.01),增殖抑制率达到65%。与DMSO和4H-Andro对照组比较,8μmol.L-1 Andro处理48h后,U87细胞中NF-κB(即磷酸化p65)蛋白表达强度下降(P<0.01)。结论:Andro作为临床上常用的天然抗炎药物,具有抑制胶质瘤细胞增殖的功能,并且可通过靶向抑制NF-κB蛋白表达强度发挥作用。

Mac-1基因缺失对Apc^(Min/+)小鼠肿瘤生长及脂代谢的影响

目的探讨整合素Mac-1基因缺失对自发肠道腺瘤小鼠Apc^(Min/+)脂代谢的影响。方法 Apc^(Min/+)小鼠和Mac-1基因缺失小鼠(Mac-1^(-/-))扩群获得实验所需数量小鼠,并进行杂交剪尾提取DNA,用PCR法检测小鼠基因型;计数肠道腺瘤数目和体积,并检测血清中总胆固醇(TC)和三酰甘油(TG)的变化。结果获得Mac-1缺失的自发腺瘤Apc^(Min/+);Mac^(-1-)/-小鼠。Mac-1基因缺失后,ApcMin/+小鼠小肠腺瘤数目和体积减少,血清中TC和TG均下调约40%。结论 Mac-1基因缺失抑制Apc^(Min/+)小鼠小肠腺瘤生长可能与脂代谢有关。

临床护士执业中机械性损伤状况调查

[目的]了解各护龄段临床护士执业中机械性损伤的发生率及相关防护问题。[方法]采用便利调查及直接询问法对158名护士进行机械性损伤方面的回顾性调查。[结果]临床护士总损伤率为80.38%;其中,被污染锐器损伤的占32.28%;低年资护士组各种损伤率均显著高于高年资护士组(P﹤0.1-0.005)。[结论]加强临床护士的职业防护意识和防护措施,规范操作行为,保障职业安全。

Cyclin D1调控U87胶质瘤细胞周期研究

目的探讨细胞周期蛋白D1(Cyclin D1,CCND1)在U87胶质瘤细胞周期调控中的作用。方法根据NCBIGenBank中cyclin D1序列设计双链siRNA,利用Western blotting技术验证设计的siRNA序列的有效性,并通过流式细胞术检测抑制CCND1对U87胶质瘤细胞周期进程的影响。结果经Western blotting检测,成功抑制了CCND1的表达。并且抑制CCND1后,U87细胞周期停滞在G1期,抑制了U87细胞的G1/S期转换。结论 U87细胞中抑制CCND1可以显著抑制细胞周期进程,使细胞周期停滞在G0/G1期,为进一步研究胶质瘤的靶向治疗奠定了理论基础。

cyclin D3调控LN308胶质瘤细胞迁移研究

目的探讨细胞周期蛋白D3(CCND3)在LN308胶质瘤细胞中的作用。方法根据NCBI GenBank中cyclin D3序列设计双链siRNA,利用western blotting技术验证设计的siRNA序列的有效性,并通过流式细胞术检测抑制CCND3对LN308胶质瘤细胞周期进程的影响;通过transwell检测CCND3对LN308细胞迁移的影响。结果经western blotting检测,成功抑制了CCND3的表达。并且发现与对照组相比较,抑制CCND3表达对LN308细胞周期无影响,但是可以显著抑制LN308细胞的迁移。结论 LN308细胞中CCND3并不发挥调控细胞周期的功能,而是影响细胞的迁移,促进肿瘤的发展。本研究为临床上靶向治疗胶质瘤提供了理论基础。

外源基因转染血管内皮细胞条件优化

目的探讨阳离子脂质体及电穿孔法介导外源基因转染血管内皮细胞的转染效率并进行条件优化。方法采用绿色荧光蛋白基因为报告基因,分别采用Lipofectamine^(TM)2000阳离子脂质体为载体以及电穿孔方法,转染人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)。培养48 h后,用荧光显微镜观察绿色荧光蛋白在HUVEC内的表达及转染效率。结果 Lipofectamine^(TM)2000阳离子脂质体介导组有少量细胞可见弱荧光信号,而电穿孔法转染组可见较强荧光信号,其中以电击条件为电场强度1100 V、脉冲时间20 ms、电击2次的转染效率最好。结论电穿孔法介导的血管内皮细胞基因转染效率较高,可作为血管内皮细胞的外源基因转染的方法。

Robo1基因miR-218靶位点序列克隆及其突变体构建

目的克隆Robo1基因3'UTR的miR-218靶位点区域序列并构建"seed"区位点突变体,以便进一步研究miR-218对Robo1基因的调控作用。方法通过targetscan 6.2对Robo1 3'UTR进行分析找出miR-218靶位点,根据NCBI GenBank中Robo1 mRNA序列设计引物,利用RT-PCR技术从人类细胞总RNA中对包含miR-218靶位点的序列进行克隆;并设计一对突变引物,通过重叠PCR法获得"seed"区点突变基因序列;通过双荧光报告基因检测miR-218对Robo1基因的调控。结果经测序验证,成功克隆了目的基因序列,并成功构建了"seed"区点突变体,并且通过报告基因检测发现miR-218对Robo1表达有显著抑制(P<0.05)。结论成功克隆了含有miR-218靶位点的Robo1 3'UTR基因序列及构建了"seed"区点突变体,并阐明miR-218直接作用于Robo1基因3'UTR区,为进一步研究miR-218对Robo1基因的转录后调控机制奠定了基础。

U87胶质瘤细胞p53基因全场cDNA克隆及序列分析

目的克隆U87胶质瘤细胞p53基因编码序列,并对其序列进行分析。方法根据NCBI GenBank中p53 cDNA序列设计引物,利用RT-PCR技术从U87胶质瘤细胞总RNA中对p53基因编码序列进行克隆;并通过DNAMAN软件将克隆序列与NCBI GenBank中序列进行比对,分析U87细胞中p53基因编码序列特点。结果经测序验证,成功克隆了p53基因编码序列,通过序列比对发现U87细胞中p53基因72位密码子为精氨酸残基。结论成功克隆了U87细胞中p53基因编码序列,分析发现U87细胞中p53基因表达产生的是72位密码子为含精氨酸残基的p53野生型蛋白,为进一步研究U87细胞中p53基因功能特性及其与胶质瘤的相关性奠定了基础。

鹿茸多肽的生物学活性研究

采用醇沉法从新鲜马鹿茸中提取出活性多肽。该多肽为一系列分子量低于17kD的多肽混合物，Western blotting检测到其含有胰岛素样生长因子-1（IGF-1）。Bradford法定量总多肽约为1～2mg／g鲜重，RIA法定量IGF-1为300～400pg／g鲜重。小鼠腹腔连续注射多肽6d后，对其促生长、免疫调节、抗氧化、抗疲劳等生物学活性进行了研究。结果表明：小鼠体重较对照组有增加趋势（P〉0．05）；腹腔注射1，4，8mg／kg鹿茸多肽组小鼠玫瑰花环成环率分别高于对照组（生理盐水）33．3％，34．2％，39．6％，差异显著（P〈0．05）。注射8mg／kg鹿茸多肽的小鼠血清溶血素OD值与对照组差异极显著（P〈0．01）。实验组小鼠腹腔巨噬细胞吞噬百分率分别比对照组高22．1％，25．8％，26．5％，差异显著或极显著（P〈0．05或P〈0．01），说明鹿茸多肽具有免疫调节作用，且呈剂量依赖性。注射4，8mg／kg鹿茸多肽组老年小鼠血清超氧化物歧化酶（SOD）活性分别升高51．1％，59．2％，血清丙二醛（MDA）含量分别下降14．9％，16．7％，与对照组差异显著（P〈0．05），说明鹿茸多肽对老年小鼠有较强的抗氧化作用。小鼠负重游泳实验中，注射小鼠存活时间比对照组延长了21．67min（P〈0．05），说明鹿茸多肽具有抗疲劳作用。

胰腺损伤的围手术期护理

总结39例胰腺损伤患者的围手术护理经验。术前主要在做好心理护理,及时做好术前准备,争取尽早进行手术。术后着重围绕严密观察病情变化、加强胃管及胰周双套管的护理,并把好出院指导关,从而取得了优良的护理效果。本组治愈37例,无护理并发症的发生,死亡2例(6.9%):1例死于颅脑损伤,1例死于多器官功能衰竭。术后并发胰瘘3例,经胃肠外营养、联合应用生长激素与生长抑素等治疗3个月痊愈;腹腔感染4例,在B超引导穿刺引流1个月后痊愈;切口感染4例,经积极换药半个月内愈合。3个月后复查发现胰腺假性囊肿1例,行囊肿空肠Roux-en-y吻合后痊愈。

应用含氮化合物判别油气运移的方向

利用原油中含氮化合物的组成及绝对浓度的变化,对江汉盆地西南缘油气运移特征进行了研究。结果表明,原油中含氮化合物的分布及组成特征较好的指示了油气运移效应,江汉盆地西南缘石油具有从生油凹陷(玫瑰桥-牛头岗洼陷)向邻近的构造高部位和断层上升盘发生侧向运移的趋势;石油在发生侧向运移的同时还沿断层发生向上的垂向运移。该结果与该区油气分布和勘探实践相吻合。

非平行界面地层对水平井双感应测井的影响

地层电阻率是影响油气评价的重要参数,感应测井是确定水平井中地层电阻率的常用方法。在实际测井环境中,地层上、下界面往往是不平行的,在测井解释过程中,这种非平行界面地层环境对水平井感应测井响应的影响是一个值得关注的问题。基于三维数值模式匹配法,通过正演数值分析,研究了地层界面倾斜时界面倾角、地层厚度、围岩电阻率、侵入带电阻率和侵入深度等对水平井双感应测井响应的影响。结果表明,在水平井中,地层界面倾斜对双感应测井响应具有一定的影响,其影响程度的大小与界面倾角有关。在非平行界面地层中,所得结论可为水平井双感应测井解释校正提供一定的理论参考。

穿心莲内酯对口腔癌生长的影响

目的:探讨穿心莲内酯对口腔癌的作用及其机制。方法:用穿心莲内酯及其对照药物治疗金黄地鼠颊囊癌,通过测量肿瘤体积观察治疗效果。用免疫组化检测穿心莲内酯对肿瘤血管和肿瘤细胞增殖的作用,用TUNEL法检测穿心莲内酯对肿瘤细胞凋亡的作用,用免疫组化检测凋亡信号分子caspase-3的表达情况。结果:穿心莲内酯治疗组颊囊癌的肿瘤体积明显比对照组小,肿瘤微血管密度和增殖的肿瘤细胞也明显低于对照组,肿瘤细胞的凋亡率明显高于对照组,而且治疗组中caspase-3明显被活化。结论:穿心莲内酯通过抑制肿瘤血管生成和肿瘤细胞增殖以及促进肿瘤细胞凋亡,抑制了金黄地鼠颊囊癌的生长。穿心莲内酯通过caspase-3途径诱导了肿瘤细胞的凋亡。

PLGA微球包裹生长抑素融合基因表达质粒对家兔生长的影响

将HBsAg与Somatostatin（SS）融合基因克隆到真核表达载体pIRESlneo—CMV，构建了pIRESlneo—HBsAg／SSM。应用脂质体介导转染CHO细胞，96h提取细胞总RNA，RT-PCR鉴定融合基因表达；并收集细胞上清，ELISA法测定上清中HBsAg表达情况，结果为阳性。大量提取pIRESlneo—HBsAg／SSM质粒，用Poly D，L—lactide co—glycolicacid（PLGA）微球包裹，注射Vc獭兔后肢胫前肌，以注射生理盐水獭兔为对照。动物常规饲养45d，观察日增重并测定血清中IGF-Ⅰ、SS含量以及抗HBsAg抗体水平。结果显示注射后15～30d，质粒注射组日增重较对照组高106．8％（P〈0．01）；30d时，血清中IGF-Ⅰ浓度质粒组比对照组高29．2％（P〈0．05）；检测整个过程中血清中SS含量，发现注射后30d时明显低于对照组，且出现整个试验过程的最低值；质粒注射组血清中抗HBsAg抗体水平在注射后30d时出现峰值，这与SS含量出现最低值相吻合。本试验结果表明HBsAg与SS融合基因免疫獭兔，可以促进动物生长。

生长调控因子与GHRP-6微球的制备及对水貂生长的影响

以乳酸-乙醇酸共聚物为载体,利用复乳-液中蒸发法制备pcDNA3-GRF微球、pIRES-HBs/AgSSM微球和GHRP-6微球。将空微球、pcDNA3-GRF微球(1 mg/kg),pIRES-HBs/AgSSM微球(1 mg/kg)和GHRP-6微球(1mg/kg)分别肌肉注射至水貂骨骼肌。120 d后,3个试验组水貂体长均高于空微球组(P<0.01);采用RIA法测定各组水貂血清IGF-Ⅰ浓度,3个试验组水貂血清IGF-Ⅰ浓度均比空微球组高,但pcDNA3-GRF微球组血清IGF-I浓度显著高于对照组(P<0.05)。结果表明:pcDNA3-GRF乳酸乙醇酸共聚物微球有明显的促水貂生长作用。

穿心莲内酯通过Caspase-3/PARP途径诱导人舌癌Tb细胞凋亡作用研究

研究穿心莲内酯对舌癌细胞(Tb细胞)凋亡的作用及其机制。用瑞士吉姆萨染色法、Hoechst 33258荧光染色法、原位Annexin V/PI双染和流式细胞术检测穿心莲内酯对Tb细胞凋亡的作用;Western blot检测穿心莲内酯诱导Tb细胞凋亡的机制。结果显示:穿心莲内酯处理Tb细胞后,与对照组相比,细胞凋亡数明显增加(P<0.05)。Western blot实验结果发现,穿心莲内酯处理组与对照组相比,聚腺苷酸二磷酸核糖转移酶(polyADP-ribosepolymerase,PARP)表达明显增强(P<0.05),表明穿心莲内酯可能通过活化PARP促进Tb细胞的凋亡。

穿心莲内酯对前列腺癌细胞的增殖及神经内分泌分化的抑制作用

目的探讨穿心莲内酯(Andro)对前列腺神经内分泌癌细胞增殖及神经内分泌分化的影响。方法Andro处理前列腺癌细胞(PC3),用MTT法检测48 h时Andro作用的最大效应浓度及对PC3细胞增殖的时间依赖性;进一步提取细胞蛋白,通过Western blotting检测神经内分泌分化标志物(NSE、Cg A)表达情况。结果 Andro作用48 h时7.5μmol/L达到最大效应浓度,且随着时间的延长Andro抑制PC3细胞增殖的作用越显著;Andro能明显抑制PC3细胞的增殖,并具有浓度和时间依赖性。Western blotting检测结果显示,NSE、Cg A是PC3细胞中神经内分泌的标志物,Andro能显著抑制NSE、Cg A的表达。结论Andro可抑制PC3细胞增殖及神经内分泌分化。

乳腺上皮细胞特异性敲除Scrib基因杂合子小鼠的制作与鉴定

目的利用Cre-LoxP重组酶系统构建乳腺上皮细胞特异性敲除Scrib基因杂合子小鼠,并进行鉴定,为进一步在动物整体水平研究Scrib基因在乳腺癌中的作用提供研究平台。方法将Scrib条件敲除杂合子小鼠(Scrib+/fl小鼠)进行繁殖并鉴定,然后将鉴定结果为阳性的子代Scrib+/fl小鼠与乳腺上皮细胞特异性表达Cre重组酶的MMTV-Cre纯合子小鼠进行杂交,鉴定其子代小鼠的基因型。结果成功繁育Scrib条件敲除小鼠和MMTV-Cre小鼠,并通过鉴定得到Scrib+/fl小鼠,与MMTV-Cre小鼠杂交并繁殖,获得基因型为Scrib+/fl;MMTV-Cre+/-小鼠5只。结论本研究利用Cre-LoxP重组酶系统成功构建了乳腺上皮细胞特异性敲除Scrib基因杂合子小鼠,为进一步研究极性蛋白Scrib表达下调在乳腺癌发生中的作用提供了良好的动物模型。

疼痛干预在创伤性骨折患者术后康复过程中的应用效果观察

目的探究疼痛干预护理在创伤性骨折患者术后康复过程中的应用效果。方法基于本院自2014年11月至2016年11月期间收治的120例创伤性骨折患者的临床资料,按照临床护理方式的不同,将120例患者分为观察组(实施疼痛干预护理)和对照组(实施常规护理),各60例,观察比较两组患者的临床护理效果、术后并发症发生情况以及护理前后患者对护理工作满意度评分变化情况。结果观察组患者临床护理总有效率86.67%明显高于对照组(63.33%),具有统计学意义(P<0.05);观察组患者的术后并发症发生率16.67%明显低于对照组(46.67%),具有统计学意义(P<0.05);疼痛干预护理前,两组患者对护理工作满意度评分差异无统计学意义(P>0.05),疼痛干预护理后,观察组患者对护理工作满意度评分明显高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),且与疼痛干预护理前相比,其上升幅度也明显高于对照组,具有统计学意义(P<0.05)。结论对创伤性骨折患者实施疼痛干预护理,能够消解患者的负面情绪,促使患者配合临床护理工作,降低术后并发症发生率,从而提升护理效果,改善患者的生活质量。