肉鸡养殖场环境水体中沙门菌的耐药性与噬菌体的抑菌作用

为了调查肉鸡养殖场周围水体存在的沙门菌,分析其耐药情况,并探讨噬菌体对耐药菌株的抑制效果,本试验选择肉鸡场附近水体,采取表层水样5份,使用选择培养基进行沙门菌分离纯化,通过药敏试验评估所分离沙门菌的耐药性;此外,从同一水样中分离噬菌体,选取不同感染复数(MOI)的噬菌体单独应用,以及与不同抗生素联合应用,检测噬菌体及其与抗生素联合应用对耐药沙门菌的抑制作用。结果显示:自5份水样中分离并鉴定出11株沙门菌,均对常用抗生素存在耐药现象,且多重耐药率高达63.64%(7/11),单株细菌多重耐药最多对6种抗生素耐药;通过对比不同试验条件,当MOI为1∶10时,噬菌体对沙门菌的抑制效果最好;耐药沙门菌在噬菌体作用下,对抗生素的敏感性增加,表现为抗生素抑菌环直径增大;噬菌体与氨苄青霉素(AMP)联合应用时,可极显著降低沙门菌对试验小鼠的致死率(P<0.01)。结果表明,环境水体中存在的沙门菌具有广泛的抗生素耐药性,而同水源噬菌体则对沙门菌具有显著的抑菌效果,并可以增强耐药菌对抗生素的敏感性。

口蹄疫O型重组病毒的构建及其免疫原性分析

【目的】利用反向遗传操作技术,构建含O型口蹄疫病毒(food-and-mouth disease virus,FMDV)3个拓扑型免疫优势结构蛋白基因的重组FMDV,评估其作为猪O型口蹄疫(food-and-mouth disease,FMD)疫苗候选株的潜力。【方法】通过基因合成,在FMD疫苗株O/HN/CHA/93(古典中国拓扑型)的基因中嵌合流行株O/NXYCh/CHA/2018(东南亚拓扑型)VP1结构蛋白的重组病毒骨架上,用O/TUR/5/2009疫苗株(中东-南亚拓扑型)VP1蛋白的G-H环基因替换其对等基因,构建含O型3个拓扑型FMDV结构蛋白基因的重组全长质粒,Not I线性化后转染表达T7 RNA聚合酶的BSR/T7细胞,拯救重组病毒。通过RT-PCR、序列测定、间接免疫荧光鉴定重组病毒;噬斑试验和一步生长曲线分析重组病毒的生物学特性。重组病毒制备疫苗免疫猪,用病毒中和试验分析其对当前流行的O型3个拓扑型FMDV的交叉反应性。【结果】成功拯救到含O型3个拓扑型FMDV结构蛋白基因的重组病毒,重组病毒与亲本病毒具有相似的生物学特性。亲本病毒和重组病毒制备的疫苗免疫猪,均能够对中东-南亚型(Middle East-South Asia,ME-SA)拓扑型和东南亚型(South-East Asia,SEA)拓扑型病毒株产生保护性平均中和抗体(>1.65log10);均不能对古典中国型(Cathay)拓扑型流行株产生保护性平均中和抗体(<1.65log10),但与亲本病毒相比,O/TUR/5/2009疫苗株G-H环基因的替换显著提高了对ME-SA和SEA拓扑型病毒株的交叉反应性(P<0.05)。【结论】本研究对未来FMD疫苗的设计具有重要的指导意义。