人羊膜间充质干细胞支持造血的体外实验

背景:骨髓是目前间充质干细胞的主要来源,但由于取材不便、细胞数量受年龄限制等原因,其应用具有一定局限性。近年来,羊膜作为间充质干细胞的新来源受到越来越广泛的关注。目的:探讨人羊膜来源间充质干细胞在体外对造血干细胞的扩增是否有支持作用,以及怎样提高羊膜间充质干细胞和造血干细胞共移植成功率。方法:利用组织块培养法,从足月分娩的人羊膜中分离培养羊膜间充质干细胞。密度梯度离心法分离脐血单个核细胞,采用免疫磁珠分选技术分选其中CD34+细胞。分别用脐血单个核细胞和CD34+细胞与羊膜间充质干细胞共培养,连续4周,每周计悬浮细胞浓度,并以骨髓间充质干细胞组及无滋养层组作为对照。采用集落形成实验,把扩增的脐血单个核细胞和CD34+细胞分别接种至甲基纤维素半固体培养基中,14d后根据典型形态特征计数造血集落数。结果与结论:羊膜间充质干细胞可促进人脐血单个核细胞和CD34+细胞扩增,扩增后两者在甲基纤维素半固体培养基中能够形成造血祖细胞集落,其造血支持作用与骨髓间充质干细胞相似,两者对比无明显统计学差异。提示,羊膜间充质干细胞体外具有与骨髓间充质干细胞相似的造血支持作用,有可能为造血干细胞体外扩增及临床间充质干细胞与造血干细胞联合移植、提高造血干细胞移植成功率提供一种更加理想的间充质干细胞新来源。

胎膜干细胞的分离方法和特性

胎膜由绒毛膜和羊膜组成,胎膜可以分离出多种具有可塑性和免疫耐受的细胞,因而在再生医学和细胞治疗的临床应用中备受关注。胎膜是胎儿的附属组织,出生后成废弃物,所以容易获得,不需要侵袭性操作,而且它的应用不违背伦理道德。目前已经有很多关于胎膜干细胞的分离和特性的报道。现就目前这些细胞的分离方法和特性研究进行综述,为实验研究和临床应用提供指导。

脓毒症肺损伤小鼠血清内皮微颗粒的变化

目的探讨脓毒症相关肺损伤小鼠血清中内皮微颗粒(endothelial-derived microparticles,EMPs)的变化及意义。方法 C57BL/6J小鼠随机分成结扎盲肠头尾端穿孔术(cecal ligation puncture procedure,CLP)组和假手术(Sham)组。术后24 h CLP组存活的小鼠和假手术组小鼠心尖取血,离心后测定血清IL-1β、IL-6、TNF浓度,流式细胞仪检测血清中CD144^+EMPs浓度水平。取各组肺组织测定肺湿重/干重比值(W/D),光镜下观察肺组织学的改变,电子显微镜下观察肺组织超微结构改变。结果 CLP组小鼠血清中IL-1β、IL-6、TNF浓度均高于Sham组(P<0.01);CLP组小鼠肺组织W/D高于Sham组(P<0.01)。病理学检查显示CLP术后24 h小鼠出现急性肺损伤,肺泡内皮细胞损伤明显。CLP组小鼠血清中CD144^+EMPs浓度高于Sham组(P<0.01)。结论 CLP术后24 h小鼠发生了急性肺损伤,是较好的肺损伤的模型。内皮微颗粒浓度的升高和脓毒症相关性肺损伤密切相关,内皮微颗粒可能参与了急性肺损伤的过程。

肺应力和应变在肺损伤家猪机械通气中的作用

目的研究不同平台压参数设置下,急性肺损伤(acute lung injury,ALI)家猪的跨肺压(transpulmonary pressure)等呼吸力学参数,明确平台压30 cm H2O能否全面准确反应ARDS呼吸力学情况。方法将6只健康家猪麻醉、进行外科手术后,按照以下不同实验状态进行机械通气:A组平台压<30 cm H2O、B组平台压>30 cm H2O伴腹内高压(intra-abdominal hypertension,IAH)。观察不同分组通气参数设置下,肺应力、平台压等呼吸力学标。结果呼吸力学:A组肺应力为(15.07±1.47)cm H2O高于B组(10.92±1.28)cm H2O;B组胸壁弹性阻力与呼吸系统弹性阻力之比(Ecw/Ers)为(0.36±0.06)高于A组(0.24±0.05);B组肺顺应性(Cdyn)为(13.38±2.79)ml/cm H2O,明显高于A组(10.26±1.18)ml/cm H2O;差异均有统计学意义(P<0.01)。B组胸壁顺应性(Ccw)为(43.12±8.00)ml/cm H2O,低于A组(63.28±36.71)ml/cm H2O,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论单纯以平台压30 cm H2O作为机械通气的标准,不能准确地反映ARDS患者肺部的呼吸力学。腹内高压时,需要更高的平台压来改善氧合状况。肺应力和应变是真正反应ARDS肺呼吸力学的指标,将肺应力和应变理论引入临床,有利于为ARDS患者制定更加安全、合理的通气策略。

整合素介导的肝素结合蛋白在肺损伤模型中的作用

目的探讨在肺损伤病理过程中，肝素结合蛋白的释放与中性粒细胞表面的β2整合素及其与肺损伤的关系。方法30只C57BL/6小鼠来自同济大学实验动物中心，随机（随机数字法）分为对照组、结肠穿刺肺损伤组（CLP组）和抗体处理组。CLP组和抗体处理组使用结肠穿刺法制作急性肺损伤模型，对照组给予假手术处理。抗体处理组予以造模前注射CD18单抗抑制β2整合素功能。制模24h后小鼠取肺组织，HE染色观察肺组织病理学改变，Smith评分法评估肺损伤程度，行肺湿干比测量，肺泡灌洗液（BALF）行蛋白水平测定，酶联免疫吸附法检测小鼠外周血肝素结合蛋白水平，流式细胞术测量中性粒细胞表面β2整合素表达。各组水平差异比较采用t检验，Pearson法分析肝素结合蛋白与β2整合素和肺损伤指标的相关性。结果与对照组比较，CLP组动物肺Smith评分（t=10.607,P〈0.01）、肺湿干比（t=3.968,P=0.001）和BALF蛋白水平（t=4.331, P〈0.01）等肺损伤指标均明显升高，同时肝素结合蛋白水平（t=3.515,P=0.002）及β2整合素（t=4.816,P〈0.01）差异有统计学意义。而抗体处理组动物肺smith评分（t=2.307,P=0.033）、肺湿干比（t=3.080,P=0.006）和BALF蛋白水平（t=2.484,P=0.023）均较CLP组有降低，肝素结合蛋白水平也有显著降低（t=2.218,P=0.046）。就CLP组和抗体处理组动物进行相关性分析，其肝素结合蛋白水平与肺湿干比（r=0.527,P=0.017）及BALF蛋白均有明显相关性（r=0.508,P=0.022）,HBP水平与β2整合素水平也有明显相关（r=0.674,P=0.001）。结论肝素结合蛋白和β2整合素均参与了肺损伤的病理过程，其中肝素结合蛋白的水平与肺损伤严重程度相关。β2整合素与肝素结合蛋白的释放有关，抑制β2整合素功能可降低肝素结合蛋白水平，同时减轻肺损伤。

VILI小鼠血清内皮细胞微粒变化

目的 观察呼吸机相关性肺损伤（VILI）小鼠血清内皮细胞微粒（EMPs）的变化,并探讨其在VILI中的意义.方法 将48只SPF级雄性野生C57BL/6J小鼠按随机数字表法分为两组,每组24只：机械通气（MV）组小鼠于气管插管后进行30 mL/kg大潮气量（VT）MV 4 h;自主呼吸组小鼠气管插管后进行自主呼吸4 h.两组分别取12只小鼠心尖血,采用酶联免疫吸附试验（ELISA）测定血清白细胞介素（IL-1β、IL-6）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平,采用流式细胞仪检测血清EMPs水平;EMPs与IL-1β、IL-6、TNF-α的关系采用线性回归分析.另取12只小鼠肺组织,测定肺湿/干重（W/D）比值;苏木素-伊红（HE）染色后,光镜下观察肺组织形态学改变;醋酸铀-柠檬酸铅双染后,透射电镜下观察肺组织超微结构改变.结果 与自主呼吸组比较,MV组小鼠肺W/D比值明显升高（5.47±0.14比4.34±0.11）,血清IL-1β、IL-6、TNF-α及EMPs水平亦明显升高〔IL-1β（ng/L）：42.4±4.4比7.7±3.6,IL-6（ng/L）：1239.5±66.3比21.7±4.6,TNF-α（ng/L）：237.6±25.8比37.1±19.1,EMPs（个/μL）：28.6±1.8比5.9±1.8,均P〈0.01〕.相关分析显示,血清EMPs与IL-1β、IL-6、TNF-α均呈线性正相关（r值分别为0.968、0.932、0.945,均P=0.000）;拟合线性回归分析显示, EMPs每增加1个/μL,IL-1β升高2.4 ng/L〔95%可信区间（95%CI）=1.9~2.8,P〈0.001〕,IL-6升高34.5 ng/L （95%CI=25.1~44.0,P〈0.001）,TNF-α升高13.6 ng/L（95%CI=10.3~16.9,P〈0.001）.光镜下显示：自主呼吸组小鼠肺泡结构完整;而MV组肺泡萎缩或消失,肺实变,部分肺泡融合,肺泡隔增粗.电镜下显示：自主呼吸组小鼠肺泡壁完整、无渗出;而MV组肺泡壁水肿、破裂,Ⅱ型肺泡上皮细胞空泡化.结论 给予小鼠30 mL/kg VT通气4 h可导致VILI伴EMPs增加,提示EMPs水平升高与VILI的发生密切相关,可能成为VILI的标志物.

N -乙酰半胱氨酸抗氧化作用在急性呼吸窘迫综合征治疗中的研究进展

急性呼吸窘迫综合征(ARDS)是一种由肺内和(或)肺外原因导致的以低氧血症为显著特征的临床危重症,其发病机制与氧化应激失衡有关。N-乙酰半胱氨酸(NAC)作为抗氧化剂已广泛用于呼吸系统疾病的治疗,目前国内外关于NAC在抗氧化方面治疗ARDS是否有益存在争议。本文围绕NAC分子机制、动物实验及临床研究结果,对NAC抗氧化作用在治疗ARDS中的研究进展进行综述,以期为NAC用于ARDS的治疗提供参考。