清疕饮调控S1P/S1PR5信号通路对HaCaT炎症模型的影响

目的通过体外实验探讨清疕饮和鞘氨醇-1-磷酸受体5(sphingosine-1-phosphate receptor 5,S1PR5)信号对鞘氨醇-1-磷酸(sphingosine-1-phosphate,S1P)诱导的人永生化角质形成细胞(human immortalized keratinocytes,HaCaT)生物学功能的影响,研究清疕饮在角质细胞(keratinocytes,KC)上对银屑病的治疗机制。方法脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)(1μg/mL,24小时)刺激HaCaT细胞,酶联免疫吸附测定实验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)测定细胞上清中S1P含量,实时荧光定量聚合酶链式反应(quantitative real time-polymerase chain reaction,q-PCR)法检测S1PRs mRNA转录水平,筛选出高特异性的S1P/S1PR5通路。细胞增殖和细胞毒性检测(cell counting kit-8,CCK-8)法测定细胞存活率,q-PCR法检测白介素(interleukin,IL)-17、IL-23 mRNA表达,筛选适宜的S1P处理浓度和时间,蛋白质免疫印迹法(Western blot,WB)检测清疕饮对S1PR5蛋白表达的抑制,WB检测S1PR5蛋白表达筛选高效siRNA构建S1PR5基因缺陷模型。将细胞分为阴性对照组(PBS+NC siRNA)、S1P炎症模型组(S1P+PBS+NC siRNA)、清疕饮处理组(S1P+清疕饮+NC siRNA)、S1PR5基因缺陷组(S1P+PBS+S1PR5 siRNA)、清疕饮处理S1PR5基因缺陷组(S1P+清疕饮+S1PR5 siRNA)予对应处理,划痕试验检测细胞迁移率,EILSA法检测细胞上清中IL-36γ分泌,WB法检测细胞核因子-κB(nuclear factor-kappa B,NF-κB)通路相关蛋白核因子抑制蛋白(inhibitor kappa B alpha,IκBα)、kappa B抑制因子激酶(inhibitor of kappa B kinase,IKK)、磷酸化(p)-IKK、p65、p-p65的表达。结果相比于正常细胞,LPS刺激HaCaT银屑病炎症模型细胞上清S1P含量显著上升(P<0.01),S1PR5 mRNA表达增加最明显(P<0.01)。筛选出浓度0.5μmol/L的S1P处理48小时为炎症造模方案,清疕饮冻干粉溶液能显著抑制S1P造成的S1PR5蛋白高表达(P<0.01)。与阴性对照组比较,S1P炎症模型组HaCaT细胞迁移能力显著增强,上清液IL-36γ显著增加,细胞中p-IKK、p-p65蛋白的表达水平显著增加(P<0.01),IκBα、IKK、p65蛋白未发现显著变化。与S1P炎症模型组比较,清疕饮处理组、S1PR5基因缺陷组、清疕饮处理S1PR5基因缺陷组HaCaT细胞迁移能力显著降低,IL-36γ分泌量显著减少,细胞中p-IKK、p-p65表达水平显著降低(P<0.01),IκBα、IKK、p65蛋白未发现显著变化,但清疕饮处理S1PR5基因缺陷组IL-36γ、p-IKK、p-p65的变化相较于另外两组更明显(P<0.01)。结论清疕饮可以部分通过阻碍S1P与S1PR5结合抑制HaCaT细胞迁移和IL-36γ分泌,截断NF-κB通路信号,从而干预炎症反应。

PCMC联合Sandwich的教学方法探索与实践——以中医皮肤病学为例

为探索中医皮肤病学临床实习中开展PCMC联合Sandwich教学法的教学效果,选择在北京中医药大学东直门医院皮肤科实习的60名2019级学生为研究对象,随机分为观察组和对照组,每组30人。对照组采用传统临床带教;观察组采用医学人文教育融入PCMC联合Sandwich教学模式,问卷调查两组学生的理论水平和实践能力,包括专业知识、临床技能、人文素质和教学满意度等。观察组的理论考核成绩、临床技能、总体临床能力和教学满意度均显著优于对照组(P<0.001)。PCMC和Sandwich两种教学方法优势互补,能够调动医学生的学习积极性,夯实其理论知识,提升临床技能,培养临床思维能力和人文医学素养。