C反应蛋白联合血常规对新生儿支气管感染性疾病诊断研究

目的探讨C反应蛋白(CRP)联合血常规在新生儿支气管感染性疾病的临床诊断价值。方法选择临床支气管感染新生儿212例为研究对象,根据感染病原体不同分为细菌感染组156例、病毒感染组56例,并选择124例新生儿非感染性疾病患儿为对照组,比较三组间感染性疾病中不同严重程度患儿CRP及血常规检查的差异。结果细菌感染组、病毒感染组、对照组三组间CRP、WBC、NUET、LYM两两比较差异均有统计学意义(P<0.05),细菌感染CRP出现大幅升高;细菌感染组中重症感染与普通感染CRP、WBC差异有统计学意义(P<0.05),CRP随病情严重程度而升高,细菌感染组中CRP与WBC呈正相关(r=0.539,P<0.05),CRP与NETU无相关性(P>0.05)。细菌感染组治疗后CRP与WBC均出现下降,与治疗前比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论 CRP联合血常规监测对新生儿支气管感染疾病的病原体鉴别、诊断及病情监测有重要临床意义。

免疫分子的糖基化修饰与重要感染性疾病

蛋白质糖基化是最常见的蛋白质翻译后修饰(post-translational modification,PTM)之一,其广泛存在于生命体中。真核细胞中,糖基化修饰对蛋白质的折叠、构象、分布、稳定性和活性具有重要的影响。研究表明,糖蛋白的糖链对于维持多细胞生物所有分化细胞间相互作用的秩序至关重要。蛋白质糖基化的功能障碍可能导致疾病的发生和感染性疾病的发展。迄今已有许多蛋白质的N/O-聚糖改变被确定为肿瘤和某些传染性疾病发展的生物标志物。因此,本文针对B细胞受体(B-cell receptor,BCR)、T细胞受体(T-cell receptor,TCR)、细胞因子(cytokines,CK)、补体(complement)和免疫球蛋白(immunoglobulin,Ig)等主要的免疫分子的糖基化修饰,以及相关糖基化修饰与传染性疾病之间的关系进行综述,旨在阐释免疫分子的糖基化与传染性疾病之间的关联,为治疗感染性疾病提供新思路和策略。

2型糖尿病患者平均血小板体积与血管病变的关系

目的探讨2型糖尿病患者平均血小板体积(MPV)的变化及其与糖尿病血管病变的关系。方法选取2型糖尿病患者255例(其中视网膜病变55例,冠心病68例)和健康人183例,测定血小板数(PLT)、平均血小板体积(MPV)、血小板分布宽度(PDW)。结果2型糖尿病组PLT较正常对照组显著降低,但两组PLT都在正常范围内。糖尿病组MPV和PDW明显高于对照组,但MPV在糖尿病视网膜病变组与糖尿病非视网膜病变组无显著性差异,在糖尿病冠心病组与糖尿病非冠心病组亦无显著差异。多因素Logistic回归分析未发现在统计学上有意义的影响因子。结论2型糖尿病患者MPV较对照组明显升高表明血小板参与了糖尿病的血管病变。

运用SELEX技术筛选特异性高亲和IVB型纤毛结构蛋白RNA适配子

目的 获得特异性高亲和IVB型纤毛结构蛋白prepilS的RNA适配子 (aptamers) ,为开发预防、治疗伤寒杆菌肠热症的新型药物试剂奠定基础。方法 采用SELEX技术 (SystematicEvolutionofLigandsbyExponentialEn richment)筛选IVB型纤毛结构蛋白prepilS的特异性适配子 ,通过体外构建一个长度为 88nt含有 30个随机序列的单链DNA(ssDNA)文库 ,PCR扩增为双链DNA随机文库后 ,体外转录构建RNA随机文库 ,以Sepharose 4B为筛选介质 ,筛选具有特异性高亲和力prepilS蛋白的RNA适配子。结果 经 8轮筛选获得具有特异性高亲和prepilS蛋白的RNA适配子库。结论 成功地筛选出具有特异性高亲和力的RNA适配子库 ,该RNA适配子库可显著抑制伤寒杆菌侵入THP

赴一场“春天的约会”

一雷惊蛰始,酣睡春醒时。今天是惊蛰节气,迎春花含苞待放,春天来了。有人说,参加全国两会,是赴一场“春天的约会”。赴约,不能空着手来。提案,是最好的礼物,更是一份交给人民的答卷。我是新任委员,第一次参会,唯有尽心履职,才有可能做到不负重托。我来自医卫界,医学是我的专业,今年我带来了一份《关于完善医养融合养老新模式的相关建议》。我国60岁以上老年人超过2.3亿,占总人口的比重达到16.7%,

DC-SIGN特异性适配子的筛选及鉴定

目的:筛选高特异性、高亲合力结合DC-SIGN的单链DNA适配子,为开发抗HIV、HCV和结核杆菌感染的新型预防和治疗试剂奠定基础。方法:采用基于细胞表面展示的SELEX技术(TECS-SELEX),筛选出具有高亲合力结合DC-SIGN的单链DNA(ssDNA)适配子;运用流式细胞术(FCM)检测该适配子的亲合力;对最高亲合力适配子库进行克隆和测序;ELISA和FCM方法检测单适配子ZD8与DC-SIGN蛋白结合的剂量相关性;MTT法测定IC50观察适配子对细胞的毒性。结果:第14轮筛选的适配子库亲和力最高;DC-SIGN抗体能抑制适配子结合表达DC-SIGN蛋白的细胞;第14轮库中筛选的单适配子ZD8与DC-SIGN蛋白的结合率呈剂量依赖性;所筛选的单适配子对肝细胞几乎无毒性。结论:成功筛选出DC-SIGN蛋白的ssDNA适配子,为防治HIV、HCV和结核杆菌感染等DC-SIGN相关性疾病,提供新型预防和治疗的候选试剂和小分子药物。

IL-1B基因多态性和H.pylori感染与汉族人胃癌的相关性研究

目的:通过比较胃癌患者与匹配人群的幽门螺旋杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)感染率和IL-1B基因多态性,探讨IL-1B基因多态性是否增加H.pylori感染后胃癌发生的危险性。方法:采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(Restriction fragment length polymorphism,RFLP)分析法检测胃癌低发区84例胃癌患者和84例与之性别、年龄匹配的普通人群的lL-1B基因多态性。采用酶联免疫吸附法(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测上述人群中的H.pylori感染率。结果:①胃癌患者IL-1B-511T/T基因型频率显著高于性别、年龄匹配的对照人群(P<0·05),IL-1B-31T/T基因型频率在两组间无显著差异(P>0·05)。84例胃癌患者的H.pylori感染率显著高于对照人群(P<0·01)。胃癌患者H.pylori阳性感染者IL-1B-511T/T基因型个体显著多于对照人群。结论:H.pylori感染者胃癌组织中IL-1B-511T/T基因型为主,提示IL-1B-511T/T基因型可能增加H.pylori感染后中国汉族人群发生胃癌的危险性,而IL-1B-31基因型与H.pylori感染后中国汉族人群胃癌发生无显著相关性。

新型细胞因子IL-24真核表达载体的构建、表达及其对肿瘤的抑制作用

目的:构建IL-24真核表达质粒,并研究其体内外表达对肿瘤细胞的生长抑制作用。方法:采用重组DNA技术构建IL-24真核表达质粒pEGFP-C1-IL-24。用脂质体法将重组质粒及空载体外转染HIC细胞,再经激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)观察其表达,用MTT法检测HIC细胞的体外增殖能力,用流式细胞仪检测细胞周期与凋亡。小鼠皮下接种转染IL-24真核表达质粒或空载的B16细胞观察其体内致瘤性的变化。小鼠实体瘤模型研究基因转染对肿瘤的生长抑制作用。结果:pEGF-C1-IL-24转染HIC细胞后,LSCM可观察到其表达。IL-24基因转染的HIC细胞体外增殖能力明显受到抑制,G2-M期细胞比例增高,细胞被阻滞在G2-M期。转染IL-24的B16细胞体外致瘤率降低。与对照组相比,IL-24基因治疗组肿瘤生长明显受到抑制(P<0.05)。结论:IL-24基因转染的肿瘤细胞体外生长受抑。瘤内注射pEGFP-C1-IL-24可抑制肿瘤生长,具有明显的抗肿瘤作用。

病毒与宿主细胞的糖基化修饰及相关功能

病毒的复制和对宿主的入侵与自身结构蛋白的糖基化修饰密切相关.对于宿主而言,在病毒感染宿主和宿主抗病毒的过程中,宿主的糖基化过程一方面可抑制病毒的复制和入侵,另一方面可促进病毒对宿主的感染,抑制宿主糖苷酶可抑制病毒的复制.从病毒方面来看,由于病毒自身缺乏糖基化修饰系统,病毒的糖基化过程是借宿主细胞内的合成系统对自身进行糖基化修饰.病毒的糖基化过程对病毒蛋白的折叠与稳定、病毒的感染和入侵、参与识别宿主细胞受体和参与病毒的免疫逃逸等过程起着重要的作用.随着糖基化研究技术的发展,以糖基化为基础的功能应用也越来越深入:如新型病毒疫苗和新型抗病毒药物的研制,以糖蛋白质组学研究为基础的质谱技术和生物信息学方法的发展,以及利用糖基化对病毒性疾病的诊断和治疗等,这些均为糖基化深入研究发展奠定了基础.本文就病毒与宿主细胞糖基化过程、相关功能以及研究应用等进展作一综述.

心脏瓣膜病患者瓣膜置换术前后BNP浓度的变化

目的:观察心瓣膜置换术患者围手术期血浆B型钠尿肽(BNP)浓度的变化规律。方法:56例心瓣膜置换术患者按NYHA心功能标准分级,术前进行超声心动图检查,测量左室射血分数(LVEF),同时于术前、术后1天、3天、5天、7天、14天,分别测量血浆BNP浓度,分析术前BNP浓度与心功能的关系,以及围手术期BNP浓度变化趋势。结果:心瓣膜疾病患者术前心功能NYHA分级与BNP水平呈正相关(r=0.59,P<0.05)。术后BNP浓度急剧上升,24h达峰值(P<0.01)。术后3～7天明显下降,但仍略高于术前水平,术后14天明显下降且低于术前水平。结论:术前血浆BNP浓度与心功能状况明显相关,BNP浓度越高,心功能越差。术后早期BNP浓度快速升高,后期呈下降趋势。

白细胞介素-24基因重组表达载体的构建及原核表达

目的:构建人白细胞介素-24(hIL-24)基因的表达载体并在大肠杆菌中表达。方法:用PCR从质粒TRAP-IL-24中扩增hIL-24cDNA片段,并将该片段插入pGEX-KG原核表达载体中,实现插入基因的融合表达。用SDS-PAGE和West-ernblot对表达产物进行鉴定。采用MTT法检测GST-IL-24融合蛋白的生物学活性。结果:酶切结果证实,成功地构建了pGEX-KG IL24原核表达载体,并在大肠杆菌中获得稳定的表达,表达产物的相对分子质量(Mr)同预期值相一致。GST-IL24融合蛋白能够抑制THP1细胞的生长。结论:成功地构建了重组表达载体pGEX-KG-IL24,并在E.coliBL21中表达了具有生物学活性的GST-IL-24融合蛋白,为下一步研究人IL24的功能奠定了基础。

传统教学混搭翻转课堂在医学免疫学教学的实施

医学免疫学是一门重要的医学基础学科,学好它对于医学本科生夯实基础、提高科研素养和培养临床实践能力都具有重要作用。翻转课堂是一种新式教学模式,倡导“先学后教”,注重培养学生学习兴趣和自主学习能力。在本科生教学中,运用传统教学混搭翻转课堂模式后,问卷调查和学生成绩分析显示,80%以上的学生对混搭式教学满意。通过混搭教学模式,高分段的学生比例提高,同时也促进了教师专业成长。

鸭跖草的抑菌作用研究

目的 研究鸭跖草的抑菌作用及其急性毒性。方法 用琼脂扩散法检测鸭跖草的抑菌作用,并测定其MIC和MBC。急性毒性实验用小白鼠以口服给药的方式测定MTD。结果 鸭跖草对志贺氏痢疾杆菌、枯草杆菌、大肠杆菌等均有较强的抑制作用,最低抑菌浓度分别为1∶2 5 6、1∶12 8、1∶6 4 ,最低杀菌浓度分别为1∶12 8、1∶6 4、1∶32。急性毒性实验表明其最大耐受量大于4 0 g/ kg。结论 鸭跖草有明显的抑菌作用。

葡萄糖苷酶Ⅰ特异性siRNA-EGFP真核表达载体的构建及表达

目的:构建葡萄糖苷酶Ⅰ(glucosidaseⅠ, GluⅠ)特异性siRNA真核表达载体。方法:根据 siRNA靶序列选取原则,设计并合成针对鼠葡萄糖苷酶ⅠcDNA的寡聚DNA,退火并连接至载体 pSilencer1.0 U6,再将 U6 启动子及下游插入片断一起切下,克隆至真核表达载体 pEGFP C1,通过限制性酶切和测序对重组表达载体进行鉴定,最后将该质粒转染至HeLa细胞,共聚焦荧光显微镜观察其表达。结果:①限制性酶切和测序结果表明成功构建了带有EGFP基因的鼠GluⅠ特异性的siRNA真核表达载体 pC 1U6glu; ②共聚焦荧光显微镜观察结果表明p C1U6glu成功转染至HeLa细胞。结论:pC 1U6glu的成功构建及表达为进一步利用 siRNA研究葡萄糖苷酶Ⅰ的功能和治疗肿瘤奠定基础。

HIV-1 Tat基因在pEGx-KG中的融合构建及原核表达

目的:在大肠杆菌BL21(DE3)中高效表达融合的Tat蛋白。方法:用PCR方法从HIV cDNA文库中扩增出Tat基因,并将其插入到表达载体pEGx-KG中,转化到E.coli中进行融合表达,表达产物用蛋白电泳和Western-blot进行鉴定。结果:成功地构建了重组质粒pEGx-KG-Tat,重组质粒在大肠杆菌BL21(DE3)中得到高效表达。蛋白电泳和Western-blot分析表明,在相对分子质量(Mr)为38.9kDa处有1条特异性的带。结论:GST基因与HIV-1 Tat基因的融合构建,使Tat蛋白在大肠杆菌中得到高效表达,为艾滋病的防治研究奠定了基础。

新发现的伤寒杆菌ⅣB型菌毛致病性研究

目的 :研究伤寒杆菌菌株ⅣB型菌毛的致病特性。方法 :本研究将表达ⅣB型菌毛的的伤寒杆菌J341及另一插有强启动子Tac并表达ⅣB型菌毛的重组伤寒杆菌菌株TyphiA2 1 6和不表达ⅣB型菌毛的伤寒杆菌菌株TyphipilS∶∶kmr 分别攻击人的THP 1细胞和小鼠腹腔巨噬细胞 (MΦ) ,利用细胞毒检测试剂盒检测细胞受到伤寒杆菌攻击后 ,伤寒杆菌对细胞的毒性作用 ;同时进一步采用实时荧光定量PCR法检测伤寒杆菌毒力岛上的ⅣB菌毛对人单核细胞的侵袭作用 ,分析表达ⅣB菌毛的伤寒杆菌菌株J341及TyphiA2 1 6和不表达ⅣB型菌毛的伤寒杆菌菌株TyphipilS∶∶kmr 分别对THP 1细胞的侵袭作用 ,通过对细胞内侵入的伤寒杆菌的ⅣB菌毛基因 (pilS)和伤寒杆菌O抗原的聚合酶基因 (rfc)DNA的含量的检测 ,来比较进入胞内细菌含量的差别。结果 :比较发现J341及TyphiA2 1 6比TyphipilS∶∶kmr 对人的细胞有更强的毒性以及侵袭性 ,而对鼠的细胞毒性和侵袭性没有明显差异。结论 :说明伤寒杆菌ⅣB型菌毛与细菌侵入人体细胞的毒性和侵袭性密切相关 ;并且伤寒杆菌ⅣB型菌毛的侵袭性和细胞毒性具有种属特异性 ,即对人的单核细胞等细胞有致病性 ,而对鼠的巨噬细胞无致病性。

黄豆芽多糖对免疫抑制小鼠的实验研究

目的:研究黄豆芽多糖(BSPS)对免疫功能低下小鼠的免疫调节作用。方法:采用药物、荷瘤的方法建立免疫抑制小鼠动物模型,利用MTT方法、淋巴细胞转化及巨噬细胞吞噬中性红实验,检测黄豆芽多糖对免疫抑制小鼠免疫反应的影响。结果:黄豆芽多糖可增强吞噬细胞的吞噬功能,增加抗体形成细胞的数量,促进淋巴细胞转化。证明黄豆芽多糖具有增强小鼠免疫功能的作用。

L-ficolin保护小鼠抵御伤寒杆菌感染作用的研究

目的探讨L-fcolin在小鼠体内抵御鼠伤寒杆菌(Salmonellatyphiurium)感染的作用。方法以构建的pcDNA3-L-ficolin、pcDNA3及生理盐水分别作为实验组、阴性对照组及空白对照组,用活体基因导入仪分别肌肉内注射于感染鼠伤寒杆菌C5的BALB/c小鼠,观察小鼠的生存时间,检测肝脾中的活菌数、肝脾脏器重量指数(WI)以及脾脏中IFN-γ和IL-4的水平。结果于注射后第7天,检测3组小鼠的各项指标。实验组小鼠的半数死亡时间明显长于两个对照组。实验组肝、脾组织中的活菌数,分别为(5.12±0.21)logCFU/(mL·g)及(3.29±0.83)logCFU/(mL·g);阴性对照组分别为(7.49±1.27)logCFU/(mL·g)及(6.46±0.56)logCFU/(mL·g);空白对照组分别为(7.52±1.12)logCFU/(mL·g)及(6.44±0.27)logCFU/(mL·g);实验组明显低于两个对照组(P<0.05)。实验组小鼠的脾WI为0.376±0.16,明显低于阴性对照组(为0.84±0.12)及空白对照组(为1.01±0.05,P<0.05)。实验组脾组织匀浆中IFN-γ的水平为(1287.87±194.96)ng/L,明显高于阴性对照组[为(464.19±68.72)ng/L],空白对照组[为(361.17±201.27)ng/L],(P<0.05);但3组小鼠脾脏组织匀浆中Th2型细胞因子IL-4的水平没有区别。结论pcDNA3-L-ficolin对小鼠抵御伤寒杆菌的感染有一定的保护作用,其作用机制可能是通过提高TH1型细胞因子IFN-γ的水平而抑制细菌的生长。