重组人βNGF在大肠杆菌中的可溶表达、纯化及活性鉴定

旨在大肠杆菌中可溶表达重组人神经生长因子（Recombinant humanβnerve growth factor,rhβNGF）,并对表达产物进行分离纯化和生物学活性鉴定。成功扩增h NGFβ亚基基因,将其克隆入pMAL-c2X表达载体,构建了hβNGF-MBP的大肠杆菌表达体系并进行诱导表达,表达产物经纯化后以Factor Xa酶切去除麦牙糖结合蛋白（MBP）,Western blot鉴定后以TF-1细胞法检测生物学活性。结果显示,pMAL-c2X-hβNGF经酶切和测序证实构建正确,25℃、180 r/min、0.5 mmol/L IPTG诱导下可溶表达hβNGF-MBP融合蛋白。hβNGF-MBP经Factor Xa酶切后可去除MBP标签,SDS-PAGE分析纯化的hβNGF位于13 k D左右,纯度可达95%。Western blot鉴定为hβNGF,结果表明,比活约为1×10~6 U/mg。在大肠杆菌中成功可溶表达hβNGF,并具有较高的生物学活性。

神经生长因子联合甲钴胺治疗糖尿病周围神经病变的系统评价

目的:系统评价神经生长因子联合甲钴胺治疗糖尿病周围神经病变的疗效。方法:在中国学术期刊全文数据库、万方全文数据库、维普期刊全文数据库中检索2001-2014年关于神经生长因子和甲钴胺联合治疗糖尿病周围神经病变的文献,根据纳入和排除标准筛选相关文献,进行方法学质量评价,采用Review Manager 5.3软件对数据进行Meta分析。结果:共纳入6篇质量均为B级的随机对照文献,共计432例患者。各研究结果之间不存在异质性(P=0.53,I2=0%),神经生长因子联合甲钴胺治疗糖尿病周围神经病变显著优于甲钴胺(Z=5.50,P<0.00001)。纳入的文献基本无发表偏移,两组患者不良反应轻微并未影响治疗。结论:神经生长因子和甲钴胺联合治疗糖尿病周围神经病变显著优于甲钴胺单独治疗,具有临床推广意义。

重组人神经生长因子治疗大鼠糖尿病周围神经病变的效果

目的观察重组人神经生长因子(rhNGF)治疗大鼠糖尿病周围神经病变(DPN)效果。方法选用健康成年的雄性SD大鼠,腹腔注射链脲霉素(STZ)建立糖尿病(DM)大鼠模型。1个月后检测大鼠尾部感觉神经传导速度(SNCV),以SNCV<30 m/s为DPN成模标准。将DPN大鼠随机分为6组,分别为模型对照组、受试药rhNGFⅠ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ(剂量分别为0.3、1、3、9μg/kg)4个剂量组,阳性对照组(依帕司他15 mg/kg),同时设正常对照组。连续给药2个月,检测大鼠体重、血糖、大鼠尾部SNCV、坐骨神经传导速度(MNCV)以及坐骨神经中果糖及山梨醇含量。结果 DM造模1个月后,模型对照组大鼠体重、血糖值、尾部SNCV和坐骨神经MNCV均与正常对照组有明显差异(P<0.01),表明DPN造模成功。受试药rhNGF对DPN大鼠体重和血糖值无显著影响(P>0.05),对大鼠尾部SNCV和坐骨神经MNCV具有明显改善作用,给药2个月rhNGF受试组(Ⅲ)大鼠尾部SNCV、rhNGF受试组(Ⅱ、Ⅲ)坐骨神经MNCV较模型对照组高且差异有统计学意义(P<0.05)。DPN大鼠坐骨神经中果糖及山梨醇的含量显著升高,说明DPN的发生与多元醇代谢紊乱具有相关性。受试药rhNGF能降低DPN大鼠坐骨神经中果糖及山梨醇的含量,其中果糖含量变化具有一定的剂量相关性,而山梨醇含量变化未发现明显的剂量效应。结论受试药rhNGF对DPN大鼠神经具有较好的保护作用,与阳性对照药依帕司他作用相似,可能与改善DPN大鼠的多元醇代谢相关。

HPLC法快速检测重组人神经生长因子原液中醋酸残留量

神经生长因子（nerve growth factor,NGF）是最早发现的神经营养因子,其在神经细胞的生长、发育、分化、存活和损伤神经修复中起着重要的作用。目前,临床采用鼠颌下腺提取的NGF用于各类神经损伤的修复,疗效显著。

HPLC检测重组人β神经生长因子原液纯度和含量

目的：建立HPLC检测重组人β神经生长因子（rhβNGF）原液纯度和含量的方法。方法：采用分子排阻色谱法,色谱柱为Tosho G3000SWxl（300 mm×7.8 mm,4μm）,流动相为0.1 mol·L^-1磷酸缓冲液（含0.1 mol·L^-1Na2SO4,p H 7.0）,流速为0.8 m L·min^-1,检测波长为28 nm,柱温为30℃。结果：HPLC法系统适用性达到《中华人民共和国药典》要求,rhβNGF在0-1.0 mg·mL^-1范围内线性良好（r=0.999 2）,检测限和定量限分别为0.2和0.6μg,日内精密度为0.51%,日间精密度RSD为0.74%,回收率为100.28%-101.67%。结论：该方法简便、快速、灵敏度高、结果准确,可应用于工业化生产中rhβNGF原液纯度和含量检测。