鲍氏不动杆菌的耐药性及同源性研究

目的调查当地省级医院临床分离的鲍氏不动杆菌耐药性及产AmpC酶情况,并对AmpC酶阳性的多重耐药菌株进行同源性研究。方法药敏试验采用纸片琼脂扩散法,采用AmpC酶表型筛选法结合PCR法检测AmpC酶,利用RAPD分型技术对AmpC阳性的多重耐药鲍氏不动杆菌进行基因分型。结果106株鲍氏不动杆菌对亚胺培南耐药率最低11.1%,对青霉素类、头孢菌素类和单环β-内酰胺类抗生素耐药率均较高,特别是氨曲南和哌拉西林;对氨基糖苷类和氟喹诺酮类抗生素也有一定的耐药性;共检测出25株AmpC酶阳性菌株,产AmpC酶阳性率占总菌株数的23.58%;通过聚类分析发现5、6、10、12、13、14、20、23号菌株分为同一聚类群;8、17、18号菌株分为同一聚类群。结论鲍氏不动杆菌对各类抗生素均有不同程度的耐药性;AmpC酶表型筛选试验检测AmpC酶结果可靠,操作简便、快速,易于在临床实验室中推广使用;RAPD分型技术对鲍氏不动杆菌进行基因分型对于确定鲍氏不动杆菌菌株间的同源性,监控感染的传播有重要意义。

多重耐药鲍曼不动杆菌对替加环素等15种抗菌药物的耐药性分析

目的分析多重耐药鲍曼不动杆菌对替加环素等15种抗菌药物的耐药性。方法常规培养和分离菌株,经Vitek-32全自动微生物分析仪及配套GNI+和GNS药敏卡进行菌株鉴定和药敏试验,替加环素、头孢哌酮/舒巴坦的药敏试验采用K-B法。结果 100株多重耐药鲍曼不动杆菌对替加环素的敏感率为95.0%,其中70株耐亚胺培南的鲍曼不动杆菌对替加环素的敏感率为97.1%(68/70);对其余14种抗菌药物100%耐药的有5种;除对头孢哌酮/舒巴坦耐药率较低(20.0%)外,对其余药物耐药率都在70%以上。结论替加环素对多重耐药的鲍曼不动杆菌有较强的敏感性。

环介导恒温扩增法快速检测曲霉菌的研究

目的建立环介导恒温扩增(LAMP)检测曲霉菌的方法。方法用LAMP技术扩增曲霉菌菌株,并应用临床标本检测,同时对方法特异性、敏感性进行观察。结果所测曲霉菌菌株均获扩增产物,对其他非曲霉菌菌株无交叉反应,其检测敏感性可达0.05pg。结论LAMP方法特异性好,灵敏度高,操作简便,快速,适合从临床标本中检测曲霉菌。

DNA环介导的恒温扩增技术在鉴定病原微生物中的应用

进入21世纪以来．全球流行病趋势表明．病原微生物越来越以微小多变甚至是分子的形式穿越人类空间，SARS、H5N1高致病性禽流感等疾病给人们留下了深刻的记忆。难培养和不能培养的病原微生物已经成为传染性和感染性疾病的主要根源。一些常规的病原检测方法由于其耗时费力、步骤繁琐等不足之处．已经愈来愈跟不上人类对病原微生物快速、简易、敏感、特异性高的鉴定要求。

高产AmpC酶阴沟肠杆菌的耐药性及同源性分析

目的掌握阴沟肠杆菌的耐药谱及分子流行病学特征。方法高产AmpC酶采用表型筛选法,耐药谱选用改良K-B法,基因分型采用随机扩增多态DNA(RAPD)法。结果50株阴沟肠杆菌中表现高产AmpC酶株有16株(32%)、单产ESBLs菌株有8株(16%)、同时产AmpC酶和ESBLs的菌株有8株(16%),未发现亚胺培南耐药株,产酶和不产酶菌株间的耐药率差异存在显著性,RAPD基因分型得的遗传聚类图,可分为4类。结论阴沟肠杆菌有很高的耐药性,阴沟肠杆菌感染的治疗应首选亚胺培南,RAPD技术对阴沟肠杆菌感染同源性分析是一个有效的方法。

耐碳青霉烯类抗菌药物肠杆菌科细菌耐药特性的分析

目的探讨耐碳青霉烯类抗菌药物肠杆菌科细菌的临床分布及耐药特性,以便更好地指导临床控制和治疗此类细菌的感染。方法常规方法进行菌株分离,经革兰染色、氧化酶试验等初筛,再经VITEK-32型全自动微生物分析仪进行菌株鉴定,K-B法进行药物敏感试验。结果 2011年1月至2012年6月共检测到56株耐碳青霉烯类药物的肠杆菌科细菌,主要有肺炎克雷伯菌33株(58.9%)、阴沟肠杆菌10株(17.9%)、产酸克雷伯菌和大肠埃希菌各5株(8.9%)。以下呼吸道标本痰液为主,占55.4%(31/56),其次为伤口分泌物12.5%(7/56)。病区分布前4位的分别是ICU(30.4%)、神经外科(17.9%)、呼吸内科(12.5%)和肾内科(10.7%)。56株实验菌中有8株泛耐药,泛耐药率达14.3%,耐碳青霉烯类药物肠杆菌科细菌对常用16种抗菌药物耐药率>60%的有15种,其中耐药率>90%的也有6种,分别为氨苄西林、氧哌秦青霉素、头孢呋辛、头孢他啶、头孢吡肟、亚胺培南。耐药率最低的为阿米卡星(42.9%)。结论耐碳青霉烯类药物的肠杆菌科细菌的多重耐药性严重,甚至泛耐药,临床无经验抗菌药物可选,必须依据药敏试验的结果选用敏感的抗菌药物进行治疗。

2012年临床分离菌分布及耐药性分析

目的了解南昌大学第二附属医院临床分离菌的分布及耐药特性。方法采用纸片扩散法进行抗菌药物药敏试验,E试验检测葡萄球菌属对万古霉素及肺炎链球菌对青霉素的MIC。参照CLSI 2012年版标准判读药敏结果,用WHONET5.5软件进行数据分析。结果 2012年共收集到非重复临床分离菌4 454株,其中革兰阴性菌3 181株(71.4%),革兰阳性菌1 273株(28.6%)。呼吸道分泌物标本占28.5%,其次为血液(26.7%)和脓液(包括伤口分泌物,20.3%)。居前5位的病原菌依次为大肠埃希菌(16.1%)、鲍曼不动杆菌(12.4%)、铜绿假单胞菌(11.8%)、肺炎克雷伯菌(10.3%)和金葡菌(8.8%)。葡萄球菌属中耐甲氧西林金葡菌(MRSA)和耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌(MRCNS)分别占29.2%和79.0%,未发现对万古霉素、替考拉宁和利奈唑胺耐药株。肺炎链球菌中青霉素耐药株占14.2%,β溶血链球菌对红霉素和克林霉素耐药率较高。屎肠球菌对多数抗菌药物的耐药率高于粪肠球菌,检出2株屎肠球菌和4株粪肠球菌对万古霉素耐药。大肠埃希菌、克雷伯菌属(肺炎克雷伯菌、产酸克雷伯菌)和奇异变形杆菌中ESBLs的检出率分别为68.0%、40.4%和34.0%,ESBLs阳性菌株对大多数抗菌药物的耐药率高于ESBLs阴性的菌株。肠杆菌科细菌对亚胺培南和美罗培南的耐药率均低于10.0%。铜绿假单胞菌对亚胺培南的耐药率为20.2%。鲍曼不动杆菌除对头孢哌酮-舒巴坦外,对其他常用抗菌药物的耐药率均大于60.0%。结论该院临床分离菌耐药现象严重,尤其是鲍曼不动杆菌对碳青霉烯类抗生素耐药率增高较快,应引起重视。

2015年临床常见分离菌分布及耐药特性分析

目的分析南昌大学第二附属医院2015年临床分离菌的分布构成及其对常用抗菌药物的耐药特性。方法收集我院2015年全年临床分离菌,剔除重复菌株,采用纸片扩散法或自动化仪器法进行药物敏感性试验,E试验法检测葡萄球菌对万古霉素及肺炎链球菌对青霉素的最低抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)。依据美国临床实验室标准化协会(CLSI)2015年版标准判断结果,用WHONET 5.6软件进行数据分析。结果收集细菌3955株,其中革兰阳性菌1364株(34.5%),革兰阴性菌2591株(65.5%)。位列前5位的细菌依次为大肠埃希菌(18.9%)、金黄色葡萄球菌(12.0%)、肺炎克雷伯菌(11.4%)、铜绿假单胞菌(9.4%)和鲍曼不动杆菌(7.1%)。耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)和耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌(MRCNS)检出率分别为23.5%和71.4%。91.0%MRSA对复方磺胺甲噁唑敏感,82.9%MRCNS对利福平敏感,均未发现万古霉素和利奈唑胺耐药株。屎肠球菌对绝大多数抗菌药物的耐药率显著高于粪肠球菌,检出2株万古霉素耐药屎肠球菌,未发现利奈唑胺耐药株。肺炎链球菌非脑膜炎菌株对青霉素耐药率为7.2%。大肠埃希菌和克雷伯菌属(肺炎克雷伯菌、产酸克雷伯菌)中产超广谱β-内酰胺酶(ESBL)株分别占62.1%和31.7%。鲍曼不动杆菌、铜绿假单胞菌和肺炎克雷伯菌对亚胺培南耐药率分别79.4%、17.0%和12.3%。结论细菌耐药现象仍较严重,特别是对碳青霉烯类耐药的鲍曼不动杆菌和肺炎克雷伯菌,感染控制部门应引起重视,积极采取有效的感染控制措施,临床应根据药敏结果科学合理选用抗菌药物。

MPO、ANCA、SMA及ANA抗体联合检测对自身免疫性肝炎的诊断意义

检测56例自身免疫性肝炎(AIH)患者、176例非AIH及40例健康体检者中抗髓过氧化物酶(MPO)抗体、抗核抗体(ANA)、抗平滑肌抗体(SMA)和抗中性粒细胞胞质抗体(ANCA)等自身抗体表达。结果AIH组患者MPO、ANA、SMA及ANCA抗体检出率均明显高于其他非AIH患者及对照组(P均<0.01)。认为MPO抗体联合ANA、SMA及ANCA的检测对诊断、治疗和阻止AIH的发展有着十分重要作用。

血流感染病原菌分布及耐药特性分析

目的了解血流感染主要病原菌的分布特点及对常用抗菌药物的耐药情况,以指导临床合理用药。方法对2006年1月—2011年6月期间本院临床各科室送检的血培养标本采用美国Bactec9120全自动血培养仪进行培养,Vitek-32型仪进行菌种鉴定,纸片扩散法测定菌株对抗菌药物的敏感性,头孢西丁法检测耐甲氧西林葡菌球菌,WHONET5.6软件分析数据。结果共分离出598株病原菌,其中革兰阳性球菌282株,占47.2%;革兰阴性杆菌289株,占48.3%,真菌15株,占2.5%。最常见的感染菌分别为大肠埃希菌、表皮葡萄球菌、肺炎克雷伯菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌及鲍曼不动杆菌。金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌中耐甲氧西林葡萄球菌检出率分别为63.9%和87.9%,其对青霉素耐药率均>95.0%,均未发现对万古霉素和替考拉宁耐药株。大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌对碳青霉烯类抗生素耐药率最低,对氨苄西林耐药率分别为93.8%和100%。铜绿假单胞菌对亚胺培南耐药率为16.7%,而鲍曼不动杆菌对亚胺培南耐药率高达63.6%,鲍曼不动杆菌对其他抗菌药物的耐药率均>60%。结论本单位血流感染以大肠埃希菌和葡萄球菌为主。表皮葡萄球菌较金黄色葡萄球菌耐药性严重,非发酵菌比肠杆菌科细菌耐药性严重,尤其是鲍曼不动杆菌引起的血流感染无经验抗菌药物可选,必须在药敏试验指导下用药。

抗髓过氧化物酶抗体检测对诊断自身免疫性肝炎的临床意义

目的探讨抗髓过氧化物酶(anti-myeloperoxidase,MPO)抗体检测对诊断自身免疫性肝炎(autoimmune hepati-tis,AIH)的临床意义及诊断的评估方法。方法研究对象为56例AIH患者、176例非AIH及40例健康体检者,采用ELISA法检测抗MPO抗体和间接免疫荧光法(IIF)检测抗核抗体(anti-nuclear antibodies,ANA)、抗平滑肌抗体(smoothmuscle antibod-ies,SMA)和抗中性粒细胞胞质抗体(anti-neutrophil cytoplasmic antibodies,ANCA)等自身抗体并观察其临床评估指标,对其结果进行回顾性分析。结果1)56例AIH与176例非AIH检测MPO结果显示其阳性率分别为64.3%(36/56)和1.7%(3/176);组间比较,P<0.01差异有非常显著性意义。2)AIH及非AIH各疾病检测结果为SMA抗体阳性率最高为69.6%(39/56),MPO、ANCA和SMA抗体检测在AIH与PBC中,经χ2检验,P<0.01差异均有非常显著性意义。3)AIH患者的临床评价指标在患病率不改变的情况下,结果显示除阴性似然比外最高均为SMA;阴性似然比ANCA最高为1.25。4)AIH-I患者检测MPO抗体的结果阳性率为87.2%(34/39);AIH-Ⅱ患者无1例阳性;AIH-Ⅲ患者2例阳性。表明AIH-I患者与其密切相关。5)AIH-I患者的临床评价指标在患病率不改变的情况下,结果显示除阴性似然比外亦是SMA最高;阴性似然比ANCA最高为0.19。结论血清抗髓过氧化物酶抗体联合其他自身抗体的检测对诊断、治疗和阻止AIH的发展有着十分重要作用。对提高AIH在临床上同其它肝病鉴别诊断和治疗有着非常重要的意义。

儿童与成人金黄色葡萄球菌分离株携带PVL基因状况比较

目的了解从儿童或成人中分离获得的金黄色葡萄球菌(金葡菌)菌株携带Panton-Valentine杀白细胞素(PVL)基因的差异。方法分别对66株从儿童中及76株成人中分离获得的金葡菌菌株采用多重PCR,检测金葡菌16SrRNA基因、PVL基因和甲氧西林耐药决定分子A(mecA)基因;并同时检测耐甲氧西林金葡菌(MRSA)的葡萄球菌盒式染色体mec(SCCmec)基因型及亚型。结果在66株从儿童分离的金葡菌株中,共检出7株mecA基因阳性,MRSA 7/66(占10.6%);而在76株从成人分离的菌株中,共检出39株mecA基因阳性,MRSA 39/76(占51.3%),成人菌株MRSA发生率显著高于儿童(χ2=26.73,P<0.01)。从儿童或成人中分离的金葡菌菌株PVL基因携带率分别为31/66(占47.0%)和6/76(占7.9%);从儿童或成人中分离的甲氧西林敏感金葡菌(MSSA)的PVL基因携带率分别为29/59(占49.2%)和2/37(占5.4%),儿童与成人的差异均有统计学意义(P<均0.01);从儿童中分离的2株携带PVL基因的MRSA菌株都属于SCCmecⅣ型,从成人中分离的4株携带PVL基因的MRSA菌株中,SCCmecⅠ型、Ⅱ型各1株,SCCmecⅢ型2株。结论从儿童中分离的金葡菌株携带PVL基因阳性率较成人高,携带PVL基因以MSSA菌株为主。

耐碳青霉烯类抗生素鲍曼不动杆菌耐药机制的研究

目的:调查和研究南昌地区鲍曼不动杆菌对碳青霉烯类抗生素的耐药机制。方法:收集南昌大学第二附属医院2012年间临床分离的耐亚胺培南鲍曼不动杆菌(CRAB)非重复株。Vitek-32型全自动微生物分析仪进行菌株鉴定,K-B法进行药敏试验,三维试验检测AmpC酶,EDTA协同试验检测金属β-内酰胺酶,采用聚合酶链反应(PCR)扩增耐药基因,并对阳性产物进行双向测序分析,确定其基因型。结果:84株CRAB对临床常用的12种抗菌药物有9种耐药率>90%,对头孢哌酮-舒巴坦的耐药率最低(44.0%),所有菌株均为多重耐药株。三维试验在83株菌(98.8%)中检出AmpC酶,协同试验未检出产金属酶菌株。所有菌株均携带blaOXA-23、blaOXA-51及blaADC基因,1株携带blaOXA-58基因,未检测到blaOXA-24及金属酶基因(blaIMP、blaVIM-2、blaNDM-1及blaSIM-1);外排泵编码基因adeB、调控基因adeS和adeR的检出率分别为98.8%(83/84)、81.0%(68/84)和67.9%(57/84);所有菌株均检出外膜蛋白carO基因;69株(82.1%)检测出I类整合酶基因(intI1),全部菌株携带插入序列ISAba1。结论:南昌地区CRAB耐药性及多重耐药性非常严重,鲍曼不动杆菌对碳青霉烯类抗生素耐药的主要机制为产OXA-23型碳青霉烯酶,AmpC酶、外排泵AdeABC、I类整合子和插入序列ISAba1,可能与CRAB的多重耐药性密切相关。

慢性阻塞性肺疾病急性加重患者病原菌及耐药性分析

目的了解慢性阻塞性肺疾病急性加重（AECOPD）患者下呼吸道感染病原菌分布及耐药特点。方法选取该院2013-2014年住院的262例AECOPD患者痰液或纤支镜刷取下呼吸道分泌物进行细菌培养鉴定及药敏试验,并进行分析。结果分离出病原菌的患者有215例,分离到病原菌281株,其中革兰阴性杆菌190株（67.6%）,革兰阳性球菌76株（27.1%）,真菌15株（5.3%）。居前6位病原菌为鲍曼不动杆菌、大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌和肺炎链球菌。药敏结果显示鲍曼不动杆菌耐药性最强,除左旋氧氟沙星、头孢哌酮/舒巴坦耐药率小于50.0%,其他药物耐药率均大于或等于75.0%。肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌对氨苄西林、氨苄西林/舒巴坦、头孢唑林、头孢曲松、头孢替坦、环丙沙星、左旋氧氟沙星、庆大霉素和复方新诺明耐药率均大于或等于70.0%。金黄色葡萄球菌对青霉素G、苯唑西林、红霉素、克林霉素全部耐药（100%）。肺炎链球菌对红霉素、克林霉素、四环素和复方新诺明耐药率均大于或等于75.0%。结论APCOPD患者下呼吸道感染病原菌以革兰阴性杆菌为主,且耐药性严重,临床选用抗菌药物治疗时应重视细菌培养和药敏试验,合理选用抗菌药物。

碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌临床分离株中质粒介导的喹诺酮类耐药基因检测

目的:探讨质粒介导的喹诺酮类耐药(PMQR)基因在碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌(CRKP)临床分离株中的分布情况。方法:收集CRKP 29株,聚合酶链反应(PCR)扩增并确定产物基因型。结果:CRKP中PMQR基因检出率为48.3%(14/29),其中qnrB 5株,包括qnrB2 1株、qnrB4 3株、qnrB10 1株;qnrS 5株,均为qnrS1;1株同时携带qnrS1和qnrB4;有3株携带aac(6')-Ib-cr基因。所有PMQR基因阳性菌株均同时携带β-内酰胺酶基因,其中8株同时携带碳青霉烯酶基因,占57.1%(8/14),以blaKPC-2(4/14)及blaNDM-1(3/14)为主。结论:PMQR基因在临床分离的CRKP中较为普遍,以qnr基因为主,且qnr阳性菌株碳青霉烯酶基因携带率较高,均为多重耐药株。

无菌体液中鲍曼不动杆菌的分布及耐药性分析

目的了解患者无菌体液中分离的鲍曼不动杆菌分布及其耐药特征,以指导临床合理使用抗菌药物。方法回顾性调查南昌大学第二附属医院2011年9月—2012年8月分离自患者无菌体液中鲍曼不动杆菌的分布和耐药特性。采用K-B法进行药敏试验,依据2011年度CLSI标准判读结果。采用WHONET5.5软件分析数据。结果共获得鲍曼不动杆菌88株,以重症监护病房多见,占63.6%(56/88),患者年龄≥50岁者占62.5%(55/88),多重耐药鲍曼不动杆菌检出率为81.8%。该菌对12种临床常用抗菌药物中的7种耐药率>75.0%,对头孢哌酮-舒巴坦耐药率最低,为21.6%。结论患者免疫功能低下是鲍曼不动杆菌感染的主要原因,无菌体液中分离的鲍曼不动杆菌耐药及多重耐药性均非常严重,头孢哌酮-舒巴坦可作为经验用药之一。

携带wcaG毒力基因ST19产酸克雷伯菌致白血病患者死亡的分析

目的了解1例高黏液表型(HMV)产酸克雷伯菌致白血病患者的死亡原因。方法采用Vitek 2Compact全自动微生物仪进行菌株鉴定及药敏试验,黏液丝试验检测HMV表型,PCR方法及基因测序检测主要的高毒力荚膜血清型基因(K1、K2、K5、K20、K54、K57)和毒力基因(rmpA、wcaG、allS、kfu、aerobactin、mrkD、fimH、uge、wabG、cf29a),多位点序列分析(MLST)对该菌株进行分子分型。结果白血病患者血液及肺组织分离株均为产酸克雷伯菌,MLST分型为同一型ST19,该菌株对所测药物均敏感,具有高黏液表型,只检测到wcaG毒力基因,其他毒力基因和所测荚膜血清型基因均阴性。结论携带wcaG毒力基因是ST19产酸克雷伯菌致白血病患者死亡的主要原因,应引起临床关注。

泛耐药鲍曼不动杆菌主动外排泵adeB基因表达及耐药性研究

目的探讨细菌主动外排泵adeB基因在临床分离的泛耐药鲍曼不动杆菌耐药性中的作用。方法琼脂稀释法检测临床分离泛耐药鲍曼不动杆菌经外排泵抑制剂羰基氰氯苯腙(CCCP)处理前后对抗生素最小抑菌浓度(MIC)变化,以聚合酶链反应(PCR)、逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测外排泵基因ade B及其表达水平。结果 50株泛耐药鲍曼不动杆菌临床株加入CCCP后,MIC值小于原值的1/4或1/4以下的四环素42株(84%)、氧氟沙星45株(90%)、亚胺培南45株(90%)、头孢噻肟50株(100%)、庆大霉素50株(100%)。50株泛耐药鲍曼不动杆菌临床株和4株敏感菌株均检测到ade B基因,但泛耐药株表达水平明显高于敏感株(P<0.01)。结论泛耐药鲍曼不动杆菌耐药性与外排泵adeB基因高表达密切相关。

基于雨课堂在临床生物化学检验技术专业课程教学改革实践

雨课堂是清华大学“学堂在线”基于MOOC平台推出的有效地将教师课件PPT和学生手机微信结合起来的一种混合式教学工具。本文以四年制检验专业的《临床生物化学检验技术》课本中的第十四章“心血管系统疾病的生物化学检验”内容为例作为雨课堂教学实践,针对教学改革实践及实践效果进行阐述和分析。