脾多肽对乳腺癌荷瘤小鼠的抑瘤效应及肿瘤免疫微环境影响的实验研究

目的探讨脾多肽注射液对乳腺癌荷瘤小鼠抗肿瘤治疗的效果和安全性以及对乳腺癌肿瘤微环境中淋巴细胞亚群比例的影响。方法动物实验使用20只BALB/C小鼠进行皮下瘤造模。造模成功小鼠随机分为3组:对照组、脾多肽低剂量组和脾多肽高剂量组。脾多肽低剂量组和脾多肽高剂量组连续10天分别每天尾静脉注射1 mg/kg和10 mg/kg的脾多肽注射液,对照组小鼠经尾静脉注射等体积生理盐水。实验过程中记录小鼠体质量和肿瘤体积变化,实验结束后测量小鼠肿瘤组织的体积和质量并使用流式细胞术分析小鼠肿瘤组织单细胞悬液中不同类型淋巴细胞的比例。体外实验则建立人外周血单核细胞(PBMCs)和乳腺癌MDA-MB-231细胞共培养模型,实验组培养基中分别加入0.8μg/ml(脾多肽低剂量组)、8μg/ml(脾多肽高剂量组)的脾多肽注射液,对照组加入等量的完全培养基。处理48 h后收集共培养体系中的PBMCs,用流式细胞术分析PBMCs中淋巴细胞亚群比例变化。结果各组荷瘤小鼠的体质量和肿瘤体积均随着时间的推移增长。与对照组相比,不同剂量脾多肽治疗组的荷瘤小鼠在使用脾多肽治疗10天后,小鼠体质量变化率、肿瘤体积和肿瘤质量的差异无统计学意义(P>0.05)。与对照组相比,脾多肽治疗组能够上调乳腺癌荷瘤小鼠肿瘤组织中CD4^(+)T淋巴细胞和CD8^(+)T淋巴细胞的比例(P<0.05)。此外,对于MDA-MB-231细胞与PBMCs的共培养体系,低剂量和高剂量脾多肽均能够不同程度地上调PBMCs亚群中CD4^(+)T淋巴细胞和CD8^(+)T淋巴细胞的比例(P<0.05)。结论脾多肽能增强乳腺癌荷瘤小鼠的抗肿瘤免疫能力且对于小鼠无明显毒副作用并增加乳腺癌肿瘤免疫微环境中CD4^(+)T淋巴细胞和CD8^(+)T淋巴细胞的比例,具有进一步应用于临床研究中的价值。

顺铂调控三阴性乳腺癌细胞的PD-L1表达及机制的研究

目的探讨顺铂对三阴性乳腺癌(TNBC)细胞程序性死亡蛋白配体1(PD-L1)表达的调控作用及可能机制。方法分别用浓度为2.5、5、10、20、50、100μmol/L的顺铂处理MDA-MB-231细胞,0.625、1.25、2.5、5、10、20μmol/L的顺铂处理SUM1315细胞,48 h后通过活细胞计数(CCK-8)法检测细胞活力并计算半数抑制浓度(IC_(50)),采用实时荧光定量PCR(qPCR)和Western blotting检测梯度浓度顺铂处理MDA-MB-231和SUM1315细胞24、48 h后的PD-L1 mRNA和蛋白水平;用浓度低于IC_(50)的顺铂处理48 h后通过Western blotting检测蛋白激酶B(AKT)、磷酸化AKT(p-AKT)、细胞外信号调节激酶(ERK)和磷酸化ERK(p-ERK)的水平;AKT抑制剂LY294002预处理后分析顺铂对TNBC细胞PD-L1水平的影响。结果顺铂可抑制MDA-MB-231和SUM1315细胞的增殖(P<0.05),IC_(50)分别为23.351和3.848μmol/L;随着增加的浓度梯度顺铂的处理,两种TNBC细胞的PD-L1水平上调(P<0.05);分别使用20和3μmol/L顺铂处理MDA-MB-231和SUM1315细胞后,p-AKT和p-ERK水平升高(P<0.05),而AKT和ERK水平变化不明显(P>0.05);20μmol/L LY294002预处理可逆转顺铂对PD-L1水平的上调作用。结论顺铂通过激活AKT/ERK通路来上调TNBC细胞中PD-L1的表达,可能为顺铂联合免疫治疗提供理论依据。