依据共有等位基因数判别叔侄关系

【目的】建立基于共有等位基因数(A)的典型判别函数,并探讨其在叔侄鉴定中的应用。【方法】根据119对叔侄、119对无关个体的15个STR基因座的分型结果,计算每对个体的共有等位基因数(A)和叔侄指数(AI),进行统计学处理。【结果】共有等位基因数(A)在叔侄对和无关个体对中均符合正态分布。采用共有等位基因数(A)建立的典型判别函数=0.437A-5.268,判别叔侄和无关个体的平均准确率为80.7%;采用lg AI建立的典型判别函数=1.021 lg AI+0.051,平均准确率为82.8%,两者判别结果无统计学差异(P>0.05)。【结论】依据共有等位基因数建立的典型判别函数的判别效能与ITO法相近,且计算简便、易于掌握,可以应用于叔侄关系鉴定。

中国汉族人群9个STR基因座的遗传多态性

目的了解STR基因座的多态性，评价其在法医鉴定中的应用价值。方法应用荧光标记试剂盒，对963例中国汉族无关个体的血样DNA进行D18S1364、D12S391、D13S325、D6S1043、D2S1772、D1152368、D22-GATA198805、D8S1132和／）7530489个基因座的复合扩增，用ABI3100遗传分析仪对扩增产物进行电泳，GeneMapper3．1分析软件指定等位基因型。并计算各个基因座的等位基因频率，统计其遗传学参数。结果9个STR基因座共检出126个等位基因、536种基因型。各个基因座的等位基因数为11—20个，基因频率为0．001～0．289，杂合度为0．818～0．891，三联体非父排除率为0．633～0．777，二联体非父排除率为0．325—0．578，个人识别率为0．927—0．971。9个STIR基因座的累积个人识别率为0．999999999999676，三联体累积非父排除率为0．99997665，二联体累积非父排除率为0．99752。经Hardy—Weinberg平衡检验，9个STR基因座均为P〉0．05。结论该9个STR基因座在中国汉族人群中均属于多态性程度高的遗传标记，可以作为CODIS系统的补充。

增强化学发光法检测基质金属蛋白酶-11鉴定月经血

目的探讨增强化学发光法检测人基质金属蛋白酶-11(matrix metalloproteinase-11,MMP-11)鉴定月经血的法医学应用价值。方法运用增强化学发光法检测月经血痕、阴道拭子、外周血痕、唾液斑、尿液斑和精液斑中的MMP-11,考察MMP-11的组织特异性、稳定性及检测方法的灵敏度。结果月经血痕中MMP-11蛋白的检测阳性率为89.47%,阴道拭子、外周血痕、唾液斑、尿液斑和精液斑中均未检出MMP-11。当上样量为25μL时,蛋白质量浓度为1.329μg/μL,可检出MMP-11。4℃放置20个月的MMP-11阳性的月经血痕,检测阳性率为89.58%。结论用增强化学发光法检测MMP-11蛋白的方法灵敏度高、特异性好,能用于月经血与外周血、阴道液等常见斑痕的鉴别。

ITO法和判别函数法在同胞关系鉴定中的应用

目的探讨ITO法和判别函数法在全同胞、半同胞关系鉴定中的应用价值。方法根据500对全同胞、50对半同胞及500对无关个体的15个STR基因座(PowerPlexTM16体系)的分型结果,采用ITO法分别计算全同胞关系指数(FSI)、半同胞关系指数(HSI)及其比值(FSI∶HSI)。比较三组配对个体的等位基因匹配情况,计算分型结果全不同的基因座数(x0)、半相同的基因座数(x1)和完全相同的基因座数(x2),利用SPSS13.0分析软件建立全同胞、半同胞和无关个体的判别函数。结果(1)以FSI≥19、FSI<1作为全同胞与无关个体的判别标准,交互准确率为96.4%;以HSI≥19、HSI<1作为半同胞与无关个体的判别标准,交互准确率为85.3%;以FSI∶HSI≥1、FSI∶HSI<1作为全同胞与半同胞的判别标准,交互准确率为87.5%。(2)分别建立了全同胞-半同胞-无关个体、全同胞-无关个体、半同胞-无关个体、全同胞-半同胞4组判别函数,判别函数交互准确率为84.4%～97.7%,其中同胞-无关个体判别准确率最高。结论ITO法与判别函数法在全同胞、半同胞鉴定中均具有较高的应用价值。

叔侄指数计算方法

目的介绍计算叔侄指数的方法。方法常染色体STR基因座鉴定争议叔与孩子的叔侄关系,用引入血缘一致性系数法、引入共祖系数法和AI定律计算叔侄指数。结果引入血缘一致性系数法、引入共祖系数法以及AI定律计算叔侄指数的结果一致。结论不同情形下3种方法计算叔侄指数的结果一致,孩子母亲参与鉴定计算所得的叔侄指数往往比孩子母亲不参加鉴定的叔侄指数高。

免疫组织化学检测MMP-11鉴定月经血

目的建立用自制兔抗人基质金属蛋白酶-11(matrix metalloproteinase-11,MMP-11)多克隆抗体鉴定月经血的免疫组化方法,探讨MMP-11蛋白酶的细胞定位。方法运用链霉卵白素-碱性磷酸酶(SAP)免疫组化法检测人月经血及外周静脉血涂片、阴道液涂片、子宫内膜石蜡切片和陈旧月经血痕涂片中的MMP-11。结果MMP-11存在于子宫内膜上皮细胞和间质细胞内;外周静脉血和阴道液涂片未见有MMP-11染色;陈旧月经血痕涂片罕见完整子宫内膜细胞,但能检测到微弱特异信号。结论用自制抗MMP-11多克隆抗体采用免疫组化技术能有效地检测MMP-11,区分月经血和静脉血。

2006～2010年海南省无偿献血血液报废原因分析

目的针对目前本中心无偿献血血液报废率有所增高的趋势,对血液报废原因进行合理分析,探讨降低血液报废方法。方法对2006～2010年海南省无偿献血血液报废原因进行统计分析。结果 5年全血和红细胞总体报废率为4.84%,其中ALT报废率为1.99%,是导致血液报废的首要原因。另外,5年制备血浆总体报废率为9.20%,其中脂肪血浆报废率为5.29%,是血浆报废的主要原因。结论加强献血前的咨询、献血前的宣传、初筛检测以及建立安全和定期的献血群体是降低血液报废,提高血液质量,减少血液不必要浪费的主要措施。

复合扩增mtDNA-HVI和Cyt b片段鉴定混合血痕种属

目的探讨mtDNA-HVI和Cyt b片段复合扩增法鉴定人与动物混合血痕种属的应用价值。方法用chelex-100法从人、牛、猪、狗、兔、鱼、鸡和鼠血痕中提取DNA,复合扩增mtDNA-HVI片段和Cyt b片段,琼脂糖凝胶电泳检测。结果人类在mtDNA-HVI区和Cyt b区分别出现279bp和358bp各一条带,且279bp条带亮于358bp;动物均只有358bp一条带。人与7种动物血痕的检测灵敏度均为3.13ng。检测人与动物混合DNA,灵敏度仍为3.13ng,但358bp条带亮于279bp条带。结论当358bp带明显强于279bp带时,提示检材为人与动物的混合。

扩增12S rRNA基因鉴定生物检材种属

目的建立一种能够在同一反应条件下鉴定多个具体物种,又满足简单、快速、特异、灵敏、准确等实用要求的种属鉴定方法。方法从GenBank中获取人、鸡、鸭、鹅、猪、兔、鼠、绵羊、水牛、狗、山羊等11个物种的12SrRNA基因序列,设计一对针对上述11个物种的通用引物和分别针对人、鸡和鸭的特异引物,同时扩增各物种12SrRNA基因。以通用引物扩增片段为内部对照,以特异引物扩增片段用于人、鸡和鸭的种属鉴定,并分别对人、鸡、鸭单一检材以及人和鸡、人和鸭、鸡和鸭等二元混合DNA进行鉴定。结果通用引物扩增,各物种均有400bp左右的扩增片段;特异引物只对各自目标种属有扩增产物,片段大小:人163bp、鸡286bp、鸭374bp;测序结果与GenBank既有序列比对,Identities分值:人100%、鸡99%、鸭100%;通用引物扩增人、鸡和鸭检材的灵敏度为2.5pg;特异引物扩增灵敏度人为2.5pg,鸡、鸭均为200pg;混合DNA中任一种DNA的含量只要高于检测灵敏度即可被准确检出,不受另一种DNA量的干扰;盲测结果准确。结论本方法可以利用同一种PCR反应条件鉴定多个物种的种属。

MMP-11多克隆抗体的制备及其法医学意义

目的制备兔抗人基质金属蛋白酶-11(MMP-11)多克隆抗体,建立用MMP-11抗体检测月经血的可行方法,探讨其法医学意义。方法将用基因工程制备的人MMP-11融合蛋白免疫新西兰白兔,饱和硫酸铵法进行抗体纯化。运用蛋白印迹法检测月经血痕、外周血痕、阴道液斑、精液斑、唾液斑和尿液斑,盲测验证该方法的可靠性。结果高效价的兔抗人MMP-11多克隆抗体检测月经血MMP-11蛋白的阳性率为90.48%(93/105),而外周血痕、精液斑、唾液斑、尿液斑和阴道液斑均未检出MMP-11。结论用自制的抗MMP-11多克隆抗体所建立的蛋白印迹法检测月经血中的MMP-11特异性好,灵敏有效,可用于月经血及外周血的鉴别。

海南地区无偿献血人群ABO、Rh血型分布调查

目的系统掌握海南地区无偿献血人群ABO血型和Rh血型分布规律,满足无偿献血招募和临床安全输血的需要。方法收集2003～2010年间海南地区244 747名次汉族无偿献血者ABO血型和Rh血型分型实验数据并对其进行统计分析。结果海南地区244 747名次汉族无偿献血者中,ABO血型分布特征为O>B>A>AB,ABO亚型25例,检出率为0.010%;RhD阴性比率为0.34%,RhD阴性确认非阴性检出率为2.26%。结论海南地区汉族无偿献血者ABO血型分布特征为O>B>A>AB;ABO亚型检出率为0.010%,与上海地区0.015%ABO亚型检出率无统计学差异;RhD阴性比率与中国汉族人群RhD阴性频率相吻合;RhD阴性确认非阴性检出率低于张家口地区。RhD阴性确认试验存在较大的漏检可能。

海南地区汉族15个STR基因座群体遗传学研究

目的调查海南地区汉族人群15个短串联重复序列(short tandem repeat,STR)基因座遗传多态性资料。方法应用五色荧光复合扩增和毛细管电泳的方法,对210名海南汉族无关个体进行15个STR基因座分型检测。结果 15个STR基因座的基因频率分布均符合Hardy-Weinberg平衡,杂合度均超过0.733,15个基因座的个体识别力0.874—0.966,非父排除率0.482—0.766,多态性信息含量在0.68—0.86,15个STR基因座累积个体识别力达>0.999 999 999 999 9,累积非父排除率为0.999 999 5。结论所检测的15个STR基因座在海南汉族中均具有高度多态性,有较高的非父排除率和个体识别力,联合检测15个STR基因座可为亲缘鉴定和个体识别提供可靠的法医学证据。

2010～2012年海南省团体无偿献血比较分析

目的探讨团体无偿献血招募措施。方法利用统计学方法对2010—2012年海南省团体无偿献血情况进行分析。结果部分献血团体献血人次逐年下降，部分献血团体的血液资源没有充分挖掘，部分备案的献血团体出现献血空白现象。结论科学、合理开展献血招募工作，平衡发展各种献血群体的血液资源。

海南地区无偿献血者血液筛查不合格情况分析

目的了解海南地区无偿献血者血液筛查不合格分布情况,探索其规律,为制定无偿献血招募策略提供依据。方法收集海南地区2011-2015年丙氨酸转氨酶(ALT)、乙肝表面抗原(HbsAg)、丙肝抗体(抗-HCV)、梅毒、人类免疫缺陷病毒抗体(抗-HIV)五项血液筛查结果数据,统计分析血液筛查不合格率及其在不同人群中的分布情况。结果 2011-2015年海南地区无偿献血者血液筛查总不合格率为4.45%;五项血液筛查不合格率由高到低依次为ALT(1.62%)>HbsAg(1.29%)>梅毒(0.82%)>抗-HCV(0.44%)>抗-HIV(0.27%);不合格率在性别、年龄、文化程度、职业和献血类型分布上差异均有统计学意义(P<0.05);ALT、HbsAg和梅毒三项不合格率在性别、年龄、文化程度、职业和献血类型分布上差异均有统计学意义(P<0.05);抗-HCV项目不合格率除性别外,在年龄、文化程度、职业和献血类型分布上差异有统计学意义(P<0.05);抗-HIV项目不合格率在性别、年龄分布上差异有统计学意义(P<0.05),但在文化程度、职业和献血类型分布上差异无统计学意义(P>0.05)。结论本地区ALT和HbsAg是血液筛查不合格的最主要因素,加强ALT和HbsAg献血前初筛质量管理是降低血液筛查不合格率、保证血液安全的有效手段。

海南地区2006～2010年400ml无偿献血者统计分析

目的统计分析海南地区400 ml无偿献血者比例、年龄分布、流失率等数据,寻找本地区无偿献血发展规律,为政策制定提供依据。方法收集2006～2010年海南地区无偿献血者档案信息,统计分析400 ml无偿献血者相关统计数据。结果海南地区400 ml献血者比例达46.5%,占63.6%献血人群的18～25岁年龄段献血者400 ml献血比例为47.2%,400 ml献血男女性别比例分别为69.6%和30.4%,200 ml献血者流失率大于400 ml献血者流失率。结论通过加强无偿献血者宣传,提高献血服务水平等措施巩固与发展400 ml献血者及减少新献血者流失是保持无偿献血可持续性发展长期战略。

冠心病心肌线粒体DNA5.0kb缺失的检测

目的探讨冠心病心肌线粒体DNA 5．0kb缺失的检测。方法120例心脏的左、右心室肌各1份，分为正常对照组、病例相关组和病例组，每组40例80个样本。用断裂点连接PCR分别扩增样本含线粒体DNA 5．0kb缺失的片段，巢式PCR检测含5．0kb缺失片段的扩增产物的准确性，半定量PCR对该产物进行定量，聚丙稀酰胺凝胶电泳检测PCR产物。结果在对照片段扩增成功的样本中，正常对照组未检出线粒体DNA 5．0kb缺失；病例相关组检出2例。占6．07％（2／33）；病例组检出29例，占85．29％（29／34）；左、右心室肌线粒体DNA 5．0kb缺失量分别为0．0015％～0．7813％和0．0008％～0．3906％。病例组与其他两组缺失率经χ^2检验，其差异具有极显著性意义（P〈0．001）；左、右心室肌的缺失量经t检验，其差异具有极显著性意义（P〈0．001）。结论冠心病心肌多有线粒体DNA 5．0kb缺失，缺血明显的区域其缺失量也较高。

中国南方汉族23个常染色体短串联重复基因座的遗传多态性

目的 调查23个常染色体短串联重复(short tandem repeat, STR)基因座在中国南方汉族群体中的遗传多态性。 方法 应用荧光标记复合扩增和毛细管电泳技术对331名中国南方汉族无关正常个体23个常染色体STR基因座(CSF1PO、FGA、TH01、TPOX、vWA、D1S1656、D2S1338、D2S441、D3S1358、D5S818、D7S820、D8S1179、D10S1248、D12S391、D13S317、D16S539、D18S51、D19S433、D21S11、D22S1045、D6S1043、Penta D、Penta E)进行基因分型,统计各基因座遗传学参数。 结果 23个常染色体STR基因座的基因频率分布经过Bonferroni统计学校正均符合Hardy-Weinberg平衡(P>0.05)。23个STR基因座共检出265个等位基因,890种基因型。各个基因座的等位基因数为5~22,基因频率为0.0015~0.5483,杂合度为0.5891~0.9124,个人识别能力为0.7818~0.9831,多态性信息含量为0.5425~0.9031,三联体非父排除率为0.2780~0.8208,二联体非父排除率为0.193~0.693。累积个人识别能力大于0.999 999 999 999 99,三联体累积非父排除率为0.999 999 999 729 813,二联体累积非父排除率为0.999 999 207 508 474。 结论 中国南方汉族群体的23个常染色体STR基因座是多态性程度高的遗传标记,是一个高效的检测系统,可以应用于法医亲子鉴定、个体识别及群体遗传学研究。

广东汉族人群罕见等位基因FGA-13的研究

目的确认广东汉族人群罕见的FGA-13等位基因。方法应用PCR-短串联重复和DNA序列分析技术，对母子亲子鉴定中的罕见等位基因FGA-OL进行检测。结果序列分析结果显示FGA—OL等位基因的核心序列为[TTTC]。[TTTT][TTcT][cTTT]s[cTcc][TTcc]z，是罕见等位基因FGA-13。结论罕见等位基因FGA-13在广东汉族人群中也有分布，这对个体识别和亲权鉴定有重要意义。

一例罕见的D13S317-5等位基因的鉴定

目的鉴定1例海南汉族个体罕见的D13S317-5等位基因。方法应用PCR-短串联重复和DNA序列分析技术，对母子亲子鉴定中的罕见等位基因D13S317-OL进行检测。结果序列分析结果显示D13S317-OL等位基因的核心序列为[TATC]5，为罕见的等位基因D13S317-5。结论罕见等位基因D13S317-5在海南汉族人群中也有分布，对于个体识别和亲权鉴定有重要意义。